Способ количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола в зерне, воде, почве и зеленых листьях

юллетеньпубликовано 30.12.8 Дата опубликования описания 30.12.8(72 Авторызобретен Вылегжанина и И. А. Албу Всесоюзный научно-исследовательский ийституг биологических методов зашиты растений(54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ-ХЛОРФЕНИЛОВОГО ЭФИРА ГЕРАНИОЛА В ЗЕРНЕВОДЕ, ПОЧВЕ И ЗЕЛЕНЫХ ЛИСТЬЯХ Изобр риалов хи тографии контроля хлорфени ювенильн очистки мет фии на ком лиза первого тодом газожи и второго спе дом. Предел равны 6,0 и ки, что могут цию действу применение бензол-метан наряду с дей го количеств месей, сущес СН ды, продукащиты окру- химическими Известен также способ количественного определения и-хлорфенилового эфи(а гераниола в зерне, воде, почве, и зеленых листьях, включающий экстрагирование органическими растворителями, очистку и хроматографический анализ.Способ предусматривает четырехкратную экстракцию смесью диэтиловый эфир(3:7), упаривание, очистку на колонкисью алюминия при последовательромывании ее смесями диэтиловый ексан различного состава; определеИзвестен способ определения (4 в (6,7- -эпокси-З-этил-метил-ноненил)окси)-1,2 (метилен-диокси) бензола (ЕИТ в 701) и 6,7-эпокси-(п-этилфенокси)-3,7-диметил- -2-октена (ЕМТ - 70221) в питательной среде для разведения 81 огпохуз сасйгапз (1.). Питательная среда представляет собой смесьизмельченной мякоти сахарного тростника, 2 фпшеничной муки, рыбного белка и воды 11.Методика включает стадии экстракции смесью бензол-метанол в аппарате Сокслета,гексан ке с о ном п эфир-г тение относится к анализу матемическими способами путем хрома- и может быть использовано для за остаточными количествами иового эфира гераниола (аналога го гормона) в объектах окружающеи с ах питания и кормах с целью жающей среды от загрязнени еществами.одом колоночнои хроматограбинированном сорбенте и анаиз указанных соединений медкостной хроматографии (ГЖ) ктрофотофлуометрическим метоы определения соответственно 1,0 мг/кг. Они настолько высо- превышать исходную концентраюшего вещества. Кроме того, в качестве экстрагента смеси ол обеспечивает извлечение, ствующим веществом, большоа коэкстрактивных веществ-притвенно затрудняющих анализ.510 3ние проводится методом жидкостной хроматографии с Уф-детектированием в пределах 0,5 - 1,0 мг/кг 2.Однако известный способ имеет низкую чувствительность определения и трудоемкость. Он пригоден лишь для исследовательских целей по изучению метаболизма, продолжительности сохранения и прочего и непригоден для анализа остатков в реальных условиях, поскольку реальные дозы действующего вещества значительно ниже. Например, исходные концентрации при обработке воды составляют примерно 0,02 - 1,0 мг/кг, зерна 1 - 10 мг/кг, рекомендуемые нормы поверхностной обработки 100 в 3 г/га.Цель изобретения - повышение чувствительности определения и снижение затрат.Поставленная цель достигается тем, что очистку проводят методом препаративной хроматографии на окиси алюминия, а хроматографический анализ осуществляют путем газожидкостной хроматографии.В качестве органического растворителя используют гексан для зерна, воды и зеленых листьев.В качестве органического растворителя используют диэтиловый эфир для почвы,Чувствительность способа оценивается как нижний предел обнаружения и-хлорфени лового эфира гераниола в объекте. Нижний предел определяется двумя факторами. минимально обнаруживаемым количеством вещества на хроматографе (0,01 мкг); наличием оставшихся после очистки коэкстрактивных веществ, которые не мешают определению и-хлорфенилового эфира гераниола Пример, Оценка нижнего предела обнаружения для зерна.Минимально определяемое количество вещества на хроматографе 0,01 мкг, что соответствует концентрации 5 мкг/мл (ввод пробы 2 мкл), а наличие коэкстрактивных веществ не позволяет увеличить размер пробы (свыше 50 кг) или уменьшить объем конечного анализируемого раствора (менее 1 мл), Таким образом, нижний предел обнаружения в зерне для данного способа 0,1 мг/кг. Аналогичным образом определяются пределы для остальных объектов.Для метода тонкослойной хроматографии (ТСХ) предел обнаружения также определяется двумя факторами: минимально обнаруживаемым количеством вещества на пластине (0,5 мкг на силуфоле и 1,0 мкг на окиси алюминия); наличием оставшихся после очистки коэкстрактивных веществ, которые не мешают определнию и-хлорфенилового эфира гераниола. Поэтому при анализе зерна и листьев на пластину наносят не всю пробу, а ее часть, так как в противном случае оставшиеся коэкстрактивные ве. щества .мешают определению. 15 20 25 эо 35 40 45 5 О 55 4Пример 1. Количественное определение Й-хлорфенилового эфира гераниола в зерне. (для нижних пределов обнаружения этим определяется заданное в пробу количество и-хлорфенилового эфира гераниола).Берут 5 навесок зерна пшеницы по 50 г каждая, экстрагируют 70 мл гексана при встряхивании в течение 1 ч, Одна используется как контроль, остальные содержат по 4,8 мкг и-хлорфенилового эфира гераниола, заданных в данные навески, По окончании растворитель сливают и дважы промывают зерно гексаном порциями по 30 мл. Объединенный экстракт сушат безводным сульфатом натрия, упаривают до объема 1 - 2 мл. Для количественного определения и-хлорфенилового эфира гераниола остаток. переносят на пластину с окисью алюминий, которую элюируют циклогексаном, Зону, соответствующую и-хлорфениловому эфиру гераниола, трижды промывают подогретым до 40 С гексаном, экстракт упаривают до 1 мл и анализируют методом ГЖХ на фазе 5 ЕКонтроль при времени удерживания Т = 4,11 мин пика не имеет. В остальных пробах обнаружено, %: 72,9; 67,4; 73,3; 73,0 внесенного вещества (средний процент обнаружения 71,9). Стандартное отклонение 2,8%, доверительный интервал 4,4% при уровне надежности р = 0,95.Пример 2. Количественное определение Ь-хлорфенилового эфира гераниола в воде.Параллельно анализируют 5 проб, каждая объемом 1 л, Одну используют как контроль, в остальные задано по 2,015 мкг вещества. Пробу воды помещают в делительную воронку объемом 2 л, добавляют 150 мл гексана и энергично встряхивают в течение 2 мин, органический слой отделяют и повторяют экстракцию 80 мл гексана. Объединенный экстракт сушат и очищают так же, как в предыдущем случае. Контроль пика не имеет, в остальных пробах обнаружено,%: 67,5; 70,6; 71,7; 65,0 внесенного вещества (в среднем 68,7%), стандартное отклонение 3,0%, доверительный интервал 4,8%, при уровне надежности р = 0,95.Пример 3. Количественное определение и-хлорфенилового эфира гераниола в почве.Параллельно анализируют 4 пробы весом по 100 г каждая. Одну используют как контроль, в остальные задано по 4,8 мкг вещества. К измельченной пробе добавляют 150 мл диэтилового эфира и встряхивают в течение 1 ч, растворитель сливают и экстракцию повторяют еще 2 раза порциями по 70 мл в течение 15 мин. Объединенный экстракт сушат и очищают как описано в примере 1, Контроль пика не имеет, в остальных пробах обнаружено, о/,; 79,9; 76,3; 75,4 внесенного вещества (в среднем 77,2%), стандартное отклояение 2,4%, доверительный интервал 5,9% при уровне надежности р=0,95,894561 Таблица 1 Стандартное отДоверительный интервал, 7. Обнаружено веще- Хср, ства, Е Е Анализируемый объект Задано впробу,мкг/г про -бы клонение,7.(Х) 72,9 67,4 4,8/50 4,4 2,8 71,6 73,3 Зерно 73,0 67,5 70,6 2,015/1000 71,7 68,7 4,8 Вода 3,0 65,0 79,9 76,3 4,8/100 75,4 Почва 2,4 77,2 5,9 78,6 84,0 4,8/20 75,9 Листья 76,2 12,7 8,0 78,6 Пример 4., Количественное определение Ь-хлорфенилового эфира гераниола в зеленых листьях.Параллельно анализируют 5 проб весом 20 г каждая. Одну используют как контроль, в остальные задано по 4,8 мкг вещества. К измельченной пробе листьев добавляют 70 мл гексана и встряхивают 40 мин. Экстракт сливают и промывают листья двумя порциями гексана по 70 мл каждая.Объединенный экстракт сушат и очищают как описано в примере 1. Контроль пика не имеет, в остальные пробах обнаружено, /,: 78,6; 84,0 75,9; 78,6 внесенного вещества (в среднем 76,2%), стандартное отклонение 8,0 О/о,доверительный интервал 12,7% при уровне надежности р = 0,95.Результаты количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола представлены в табл, 1.5 В табл. 2 показаны нижние пределы определения и-хлорфенилового эфира гераниола известным и предложенным способом,Количество реагентов, необходимых дляпроведения анализа, уменьшается. В известном способе для очистки на одну колонку требуется 22 г окиси алюминия,5 мл диэтилового эфира и 55 мл гексана, а в предлагаемом для пластины - 13 г окиси алюминия, 30 мл циклогексана и 20 мл гексана.894561 Таблица 2 Нижний предел обнаружения в способе, мг/кгОбъект известном предлагаемом БКХ ТСХ Мука пшенич 0,5 ная 0,1 0,04 Зерно пшеницы 0,0010,02 0,002 Вода 0,05 Почва 0,25 0,5 Листья Формула изобретения Составитель Т. Роденкова Редактор Н. Грншанова Техред А. Бойкас Корректор Г. Огар Заказ 11476/71 Тираж 910 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул, Проектная, 41, Способ количественного определения п-хлорфенилового эфира гераниола в зерне, воде, почве и зеленых листьях, включающий экстрагирование органическим растворителем, очистку и хломатографический анализ, отличающийся тем, что, с целью повыщения чувствительности определения и снижения затрат, очистку проводят методом препаративной хроматографии на окиси алюминия, а хроматографический анализ осуществляют путем газожидкостной хроматографии.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя используют гексан для зерна, воды и зеле 25 ных листьев.3. Способ по п. 1, отличающийся тем, чтов качестве органического растворителя используют диэтиловый эфир для почвы.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Воьчпап М. С., Юг 1 дИ 1. Е., Вегога М. Ре 1 епп 1 пабоп о 1 Тчо,1 цчеп 11 е Ногпюпе-Ас 11 уе Со 1 процпйз апд ТЬе 1 г 51 аЬ 11 Ну1 п ЯаЬ 1 е Ну Мединп.,1. о 1 Есоп. Еп 1 огп,193, 66,2, р. 301.2, йейегп й Е. е 1 а 11. Асби 1 у апдРег 5151 апсе о 1 йе 1 пзес 1 1 цчеп 11 е Ьоппопепшп 1 с 1 Н1 п 11 оцг 1. о 1 Есоп, Еп 1 огп.,1975,3, р. 377.