Способ получения 7-рв-5-амино-5-
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Текст
пц 446976 ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК ПАТЕНТУ Союз Советских Социалистических Республиксимыи от патента 51) М С 12 Й 9/14(ЗЗ) США Государственный комите Совета Министров СССРло делам нзабретенийи открытий(США) и Хусто Иностранная фир ерк энд Компанилей Старл артинез Мата (ИспанИзобретение относится к производству антибиотиков.Предложенный способ получения 7-р/О-амино- карбоксивалерамидо /-3-/ карбамоилоксиметил/-7-метокси-цефем- карбоновой кислоты (цефамицина С), ранее в патентной литературе не описанный, заключается в том, что культуру Ягер 1 оптусез 1 ас 1 атпдцгапз 1 чКК 1. 3802 выращивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при 20 - 37 С и рН среды 6,0 - 8,0 в течение 2 - 4 дней с последующим выделением целевого продукта. В качестве источников углерода используют, например, углеводы, содержание которых в среде составляет 1 - 6% вес. %, а содержание источника азота в среде составляет 0,2 - б вес. %.Полученный предложенным способом антибиотик (цефамицин С) обладает высокой активностью в отношении грамм-отрицательных бактерий, низкой токсичностью и устойчив к энзиматическому воздействию.Штамм 81 гер 1 отпусез 1 ас 1 атпйцгапз 1 чКК 1.3802 выделен из земли и на различных питательных средах имеет следующие особенности,Агар Чапека-Докса. Вегетативный мицелий плоский, густо-кремовый. Воздушныймицелий порошкообразный, кремовато-белый.Растворимый пигмент отсутствует,5 Пищевой агар. Вегетативный мицелийплоский, кремовый, золотисто-желтый. Воздушный мицелий порошкообразный, кремовый. Растворимый пигмент отсутствует,Глицерин-аспарагиновый агар. Вегетатив 10 ный мицелий плоский, золотисто-желтый дооранжевого, Воздушный мицелий порошкообразный, кремовый с бледно-персиковым оттенком. Растворимый пигмент бледно-янтарный.15 Агар на основе - дрожжевой экстракт -декстроза. Вегетативный мицелий плоский,золотисто-желтый. Воздушный мицелий порошкообразный, кремовый с розовым оттенком. Растворимый пигмент отсутствует.20 Агар на основе синтетического крахмала.Вегетативный мицелий плоский, кремовыйс оранжевыми краями. Воздушный мицелий порошкообразный, белый с персиковымикраями, Растворимый пигмент отсутствует.25 Частичный гидролиз крахмала.Кусочки картофеля, Вегетативный мнцелийсухой плоский, кремовый с оранжевой окра10,010,02,0 мл0,05 91,0950 25 ской. Воздушный мицелий редкий, кремоватый, Растворимый пигмент отсутствует,Столбик желатины. Вегетативный мицелийредкий кремовый с оранжевым оттенком,распределенный по всему столбику агара. 5Лакмусовое молоко. Вегетативный мицелий рыжевато-коричневый, редкий, кольцеобразный. Воздушный мицелий отсутствует.Пептонизация; щелочная реакция рН 7,8 -7,4 (контрольный рН 6,7), 10П р и м е р 1. Лиофилизированной культурой Ягер 1 оспусез 1 ас 1 атдцгапв ИКК 13802инокулируют колбы Эрленмейера, содержащие по 50 мл питательной среды следующего состава, г: 15Дрожжевой автолизатГлюкозаФосфатный буферМд 304 7 Н 20Дистиллированная 20вода 1000 млрН среды 6,5Состав фосфатного буфера, г:КН 2 Р 04ИаНРО 4Дистиллированнаявода 1000Инкубируют в течение трех дней при 28 Сна роторной качалке, имеющей 220 об/мин иразмах 508 мм. Затем содержимое колб сте- З 0рильными пипетками переносят в четыреколбы такого же размера, содержащиевышеуказанную среду, после чего эти колбы встряхивают на качалке описанным вышеспособом. Содержимое этих четырех колб 35затем аккуратно сливают в одну колбу ииспользуют для инокулирования 11 двухлитровых колб Эрленмейера, в каждой из которых содержится по 350 мл среды следующего состава, г: 40Дрожжи янтарныетип 300 10Барда 20Декстроза 10Дистиллированная вода 1000 млЗатем колбы встряхивают в течение 4 днейпри 28 С на роторной качалке, имеющей145 об/мин и размах 50,8 мм, В конце инкубационного периода содержимое 10 такихколб объединяют и полученную пробу центрифугируют для отделения мицелия,Присутствие в культуральной жидкости антибиотика, т. е. 7+/Р-амино-карбоксивалерамидо/-3-/карбамоилоксиметил/ - 7 - метокси-цефем-карбоновой кислоты определяют агар-диффузионным методом, используя бумажные фильтровальные диски диа.метром 12,7 мм. Диски окунают в культуральную жидкость и помещают на поверх-ность чашек Петри, в которых находится 6010 мл питательного агара (Р 11 со) и 0,2 О/о-ныйдрожжевой экстракт (Р 11 со) с посеяннымб актер иальным инокулумом, После инкубации в течение ночи при 28 С измеряют вмиллиметрах диаметры защитных зон. Проведенные биоиспытания на чашках, засеянных Ч 1 Ьпо регсо 1 опз (МВ) показали, что после 4-дневной ферментации образуются защитные зоны диаметром 31,5 мм,Отфильтрованную культуральную жидкость подкисляют до рН 7 разбавленной соляной кислотой и 290 мл адсорбируют на 100 мл сильпоосновной анионообменной смолы, имеющей стиролдивинилбензольную матрицу, при расходе 10 мл в 1 мин, Отработанный раствор собирают фракциями по 500 мл. Смолу промывают водой и элюируют Зо/,- ным раствором хлористого аммиака в 90%- ном метаноле. Элюат собирают фракциями по 100 мл. Все фракции подвергают биоиспытаниям против Чйпо регсо 1 опз (МВ,2,.Проведенные опыты показали 60% -ную активность в отработанной фракции и 18 О/оную активность во фракции алюата. Кроме того, в этих опытах было установлено, что смола адсорбирует только две фракции или 10 объемов бульона. Элюированные фракции 1 - 4 обьединяют и концентрируют, удаляя метанол. Отработанные фракции 3 - б объединяют, получая 1960 мл раствора, подщелачивают разбавленной гидроокисью натрия, доводя рН от 7,2 до 8, и адсобируют на 100 мл сильноосновной анионообменной смолы, имеющей стиролдивинилбензольную матрицу при расходе 14 мл в 1 мин. Отработанный раствор собирают в четыре равные фракции и проводят биоиспытания.В результате испытаний установлено, что активность этих фракций составляет 5/о.Колонку промывают водой и элюируют 5%-ным водным раствором хлорида натрия. Элюат собирают фракциями по 50 мл и подвергают биоиспытаниям.Биоиспытания показали, что в объединенных фракциях 3 - 16 активность составляет 90%.50 мл полученного концентрата разбавляют до 500 мл, меняя рН от 8,8 до 2 с по мощью разбавленной соляной кислоты, и адсорбируют на 25 мл сильнокислой обменной смолы сульфонатного типа, имеющей стиролдивинилбензольную матрицу (смола Дауэкс 50(2, водородный цикл), при расходе 2,5 мл в 1 мин, Колонку промывают 25 мл воды и затем элюируют 2/о-ным пири- дином до тех пор, пока рН эфлюента не поднимется до 7 (54 мл),Биоиспытания отработанных фракций элюата показали, что отработанные фракции имеют 9/О-ную активность, а элюат 90%- ную активность. Элюат классифицируют, как пиридиновую соль антибиотика.Полученный продукт является амфотерным, имеющим изоэлектрическую точку при рН около 3,5. Продукт не устойчив при рН выше 7 и устойчив при рН 1,5.Полученный элюат подщелачивают до рН 8 разбавленной гидроокисью натрия и концентрируют в вакууме, отделяя пиридин,10,010,02,00,05 Инкубируют при 28 С в течение 72 ч при встряхивании, 10 мл полученной культуральной жидкости инокулируют колбы Эрлен мейера, содержащие 50 мл стерильной среды, описанной выше, и инкубируют в течение 48 ч при 28 С. Затем содержимым колбыинокулируют ферментатор из нержавеющей стали емкостью 189,25 л, содержащий 160 л 50 среды, описанной выше. Инокулированная среда затем инкубируется при 28 С в течение 48 ч при перемешивании при постоянной аэрации, В течение процесса ферментации прибавляют небольшие количества полиглиПолученный этим способом продукт классифицируют, как мононатриевую соль антибиотика,Молекулярный вес на основании эмпирической формулы равен 468.Найдено, %, С 39,31; Н 4,76; И 11,16; Б 6,46; О 34,12; Ха 4,19.С 1 бНл Х 450 эВычислено, %: С 41,0; Н 4,5; И 12,0; Я 6,8; О 30,8; Ха 4,9. 10,При испытаниях полученного антибиотика было установлено, что он обладает защитными свойствами против следующих грамотрицательных бактерий: ЕзЬег 1 сЫа со 11, Ргоецз чцдаг 1 з, А 1 са 11 депез 1 асса 11 з, Вгцсе 11 а 15 ЬгопсЫзерИса, Яа 1 топе 11 а да 111 пагцт, ИЬг 1 о регсо 1 апз и Хапйогпопоз чез 1 са 1 ог 1 а, а также против следующих грам-положительных бактерий: Яарйу 1 ососсцз асегецз, Яагс 1 па 1 ц 1 еа и Вас 111 цз зцЬИ 1 з 20Пример 2, Выращивание культуры проводят как в примере 1, используя на последнем этапе среду следующего состава, г:Яа 1 еуз 4 Я соевой муки 30,0Перегнанные растворители 7,5 25Церелоза 20,0МаС 1 2,5СаСОз (рН 7,0) 10,0Дистиллированная вода 1000 млПрисутствие антибиотика обнаружено че рез агар-диффузионное определение, осуществленное на дисках из фильтровальной бумаги 12,7 мм. После инкубации в течение четырех дней, проба бульона дает зону ингибирования 0,33 мм против %Ьг 1 о регсо 1 апз 35 (МВ) .П р и м е р 3. Лиофилизированной культурой Ягер 1 огпусез 1 ас 1 агпдцгапз МКК 1. 3802 инокулируют 50 мл стерильной среды следующего состава, г: 40ДрожжиГлюкозаФосфатный буферМф 04 7 НОДистиллированная 45вода 1000 млрН доводится до 6,5 с применением ИаОНСостав фосфатного буфера, г:КН 2 Р 04 91,0МаНР 04 950 50Дистиллированная вода 1000 мл коля для контролирования вспенивания. 43 л инокулянта, полученного в результате выращивания, применяют для инокулирования ферментатора из нержавеющей стали емкостью 757 л, содержащего 467 л стерильной среды следующего состава, г:Янтарные дрожжи 300 10,0 Перегнанныерастворители 20,0Дистиллированнаявода 1000 млрН 7,0. Инкубируют при температуре 28 С при аэрации в течение 72 ч.В процессе ферментации прибавляют небольшие количества противовспенивающего агента, например полигликоля 2000, для предотвращения интенсивного вспенивания. Отбирают партию и определяют активность при помощи пробы на дисковой пластине. Бульон от ферментации профильтровывают через диатомитовую землю при рН 7,8 и полученный этим способом продукт идентифицируют как цефамицин С.Определение на дисковой пластине при разбавлении 1: 10 дает зону ингибирования 21,5 мм против ИЬг 1 о регсо 1 опз (МВ).П р и м е р 4. Четыре ферментативные партии, полученные согласно примеру 1, адсорбируют на 100 мл сильноосновной анионообменной смоле, содержащей стиролдивинилбензольную матрицу (Дауэкс 12 хлоридную циклическую смолу) и элюируют 1%- ным водным раствором хлористого натрия, Этот элюат собирают по фракциям 50 мл и испытывают, Элюированные фракции из всех четырех партий доводят до рН 5 при помощи разбавленной соляной кислоты и объединяют, получая 4300 мл раствора.4200 мл этого раствора перемешивают с 42 г угля (Дарко С) в течение 30 мин. Затем уголь отфильтровывают и промывают водой, Фильтрат и промывные воды не имеют активности. Угольную массу дважды промывают порцией по 1 л 60%-ным водным ацетоном при перемешивании смеси в течение 30 мин и каждый раз отфильтровывают, Полученные элюаты концентрируют в вакууме до 108 мл и 100 мл соответственно.Пробы показали, что первый элюат содержит 76% активности, т, е. в 18 раз активнее исходного вещества, а вторая фракция содержит 17% активного вещества, т. е. в 14 раз активнее исходного вещества.Эти два концентрата объединяют и концентрируют до 61 мл и доводят до рН 4 - 5 при помощи разбавленной гидроокиси натрия,Этот концентрат содержит 40 мг/мл сухого твердого вещества и дает 25 мм зону против МВпри разбавлении 1: 100 (400 мкг/мл).Этот продукт идентифицирован, как мононатриевая соль 7 Р-/Р-амино-карбоксивалерамидо/-3-/карбамоилоксиметил/-7- метокси-цефем-карбоновая кислота.446976 Предмет изобретения Составитель С, ЩеневаРедактор Л, Тюрина Техред Н. Куклина Корректор Е, Хмелева Заказ 2423/7 Изд. Мо 1371 Тираж 456 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Типография, пр. Сапунова, 2 1. Способ получения 7-р/Р-амино-карбоксивалерамидо/- 3 -/карбамоилоксиметил/ - 7- метокси-цефем-карбоновой кислоты (цефамицина С), отличающийся тем, что культуру Ягер 1 огпусез 1 ас 1 агпо 1 цгапз МКК 1.3802 вырашивают в аэробных условиях на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, при 20 - 37 С и рН среды 6,0 - 8,0 в течение 2 - 4 дней с последующим выделением целевого продукта.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве источника углерода используют углероды, и их концентрация в среде составляет 1 - 6 вес. %. 3. Способ по пп. 1 и 2, отличающийсятем, что содержание источника азота в сре де составляет 0,2 - 6 вес, %,
СмотретьЗаявка
1631862, 12.03.1971
МЕРК ЭНД КОМПАНИ ИНК
СТАРЛЕЙ ЭДВАРД ОЛЛЕЙ, МАТА ХУСТО МАРТИНЕЗ
МПК / Метки
МПК: C12D 9/14
Метки: 7-рв-5-амино-5
Опубликовано: 15.10.1974
Код ссылки
<a href="https://patents.su/4-446976-sposob-polucheniya-7-rv-5-amino-5.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ получения 7-рв-5-амино-5-</a>
Предыдущий патент: Способ получения поверхностноактивного вещества
Следующий патент: Способ получения (-) (цис-1, 2-эпоксипропил)-фосфоновой кислоты(фосфономицина)
Случайный патент: Поляризационный интерференционный микроскоп