Противоопухолевая композиция

пример, для противоопухолевой реакции, может быть уменьшена в 30-100 раз. Синергетический фармакологический эффект подтверждается как на уровне К (натураль ных убийц)-чувствительных, так и на уровнеК-стойких опухолевых или инфицированных вирусов клеток; К-стойкие опухолевые или инфицированные вирусом клетки вызываются также АК (активированными лимфо кином убийцами)-клетками, Эта активностьсовершенно однозначна с использованием в качестве маркеров моноклональных антител, в которых наблюдается значительное увеличение одновременно как К-клеток (с 15 использованием моноклонального антителаазиало-бт 1), так и ЕАК-клеток(с использованием моноклонального антитела Тпу 1, 2).Эти антитела являются легкодоступными реагентами моноклональных антител, Одно временное использовачие соединений,ко 25 30 35 40 45 50 55 терлейкинов, таких как 1 - 2 в качестве компонента лимфокина, является эффективным средством для регулирования развития опухоли человека, в частности рака легких и почек и злокачественной меланомы, или при других расстройствах.Композиция, являющаяся предметом изобретения, представляет собой днРНК и интерлейкин, применяемые одновременно или последовательно, концентрации которых приводят к увеличению содержания как К-, так и АК-клеток в организме без увеличения токсичности, Одновременно с использованием вышеупомянутой дн РН К/лимфокин-терапией, настоящее изобретение включаеттакжеприменение материала, который ингибирует активатор циклооксигеназы, В качестве примера настоящее изобретение включает одновременное применение индометацина, ингибитора простагландина, при этом высвобождается "управляющий" простагландин и полученная в результате К-клетка снижает реакцию регулирования,Таким образом, естественные ингибиторы искомых К-клеток уничтожаются и популяция К-клеток соответственно увеличивается.Количество компонентов комбинации варьируется в соответствии с клиническими наблюдениями и результатами терапии. Общие количества днРНК дают пиковую концентрацию в крови 0,1 - 1000 мкг днРНК на 1 мл в системном кровообращении сразу же после применения. измеренную в точке, удаленной от места вливания, Если лимфокином является интерферон, в предпочтительном варианте а- интерферон, то обеспечивается количество 0,01-100000 ИРЕд на 1 мл жидкости организма пациента. Когда лимфокином является 1:2, то применяемое количество лежит в области. от примерно 10 11 - 2 единиц на 1 кг массы2пациента до значения, приближающегося к неприемлемым уровням токсичности, которое.может быть очень высоким, например 10 единиц, Самые эффективные, с приемлемыми значениями токсичной реакции, величины лежат в области примерно 10 - 103 4 1 -2 единиц на 1 кг массы тела.Исследования нэ живых организмах и в лаборатории подтверждают, что днРНК (и плохо сочетаемые дн Р Н К, в частности) обладают синергетическим фармакологическим действием в общем случае. с интерлейкином (в частности, с 1 - 2), которые приводят к усиленной биологической реакции противоопухолевой, противовирусной, иммуномодуляторной) с значительно более низкой токсичностью, Доза 1.-2, необходимая, наторце уменьшают биологический уровень различных естественных антагонистов К- клеток (таких, как простагландин), еще более улучшает синергетический эффект.ДнРНК действуют как биохимические катализаторы, увеличивая селективное уничтожение клеток опухолей применяемых 1 - 2, продуцируемым ЕАК-клетками, без токсического действия. Этот факт установлен при проведении исследований на культурах клеток, Линию клеток рака почек человека, обозначаемую через 7860, выращивают в стандартных чашках Петри и подвергают воздействию различных потенциальных клеток-убийц, Периферийные клетки крови, полученные от здорового человека, именуют клетками-эффекторами клетками-убийцами), а клетки рака почек - клетками-жертвами. Степень уничтожения последних (именуемая цитотоксичностью) измеряют различными методами, включая использование сверхжизнеспособных штаммов или радиоизотопов, Погибшие клетки опухоли высвобокдают ранее поглощенные радиоактивные метаболические предшествующие соединения и не могут далее поглощать внеклеточные питательные вещества. Например, амплиген, плохо сочетаемая днРНК, увеличивает активность человеческихАК-клеток (полученных иэ крови здорового человека) значительно больше, чем с использованием только 1=2, При концентрации 1 -2 в 1000 единиц на 1 мл уже достигается максимальная гибель клеток, и невозможно ее поднять еще больше при помощи днРНК. Катализатор, днРНК, в этой системе,если он используется один, плотностью инертен. Следовательно, воздействие на клетки опухоли не является результатом простого арифметическогосуммирования 2 маргинально активных агентов.В отдельных экспериментах также показано, что днРНК (плохо сочетаемая д РНК) не заставляет лимфоциты продуци р вать 1 - 2. Дн РН К может работать в систе е лимфокин 1 Е - 2 при помощи различных д угих средств, включая изменение плотност некоторых антигенов на клетках-жертв х таким образом, что эффективность 10 д йствия клеток-убийц возрастает. Кроме то о, днРНК и 1 - 2 вместе могут изменять э фекты после гибели клеток, например ув личение связывания клеток эффекторовк ртв или увеличение продуцирования раз л чных цитотоксичных факторов, или увеличение циркуляции клеток-убийц от однсй клетки-жертвы опухоли к другой клеткежртве опухоли.Исследования на животных показывают 20 бд ее высокую выживаемость и уменьшен е скорости распространения опухоли, О ухоль меланомы человека, именуемаяР", вводят в подушечку лапки мышей неск льких групп. Мыши не могут отторгнуть 25 ка чужеродную человеческую опухоль. У необработанных мышей клетки опухоли быст о размножаются, распространяются в ле кие, и животные погибают. Обработанньм мышам вводят дозы в 10 - 10 едизн ц/кг 1 -2 (примерно 2500 единиц на м шь) и днРНК (500 мкг), что эквивалентно примерно 100 - 300 мг для пациента массой 60 кг. Оба биологических препарата дают дв раза в неделю, 3Показано . значительное снижение метастазов в легких животных, обработанных днРНК плюс 1=2, что очевидно является неожиданным по сравнению с результатам, полученными при применении двух этих 40 аг нтов отдельно. Такое уменьшение метаст эов в легких коррелирует с увеличением вы ивания. Аналогичные результаты получ ны для интерферона (альфа) 2000 ЕИР (е иницинтерферона), когда плохосочетае ма днРНК (500 мкг дважды в неделю) в ко бинации приводит и дальнейшему увели ению ингибирования опухоли р0,02).Ва ным фактором является то, что комбина ии лимфокина днРНК) не вызывали об на уживаемой токсичности у животных.Преимущества терапевтического синергизма на уровне человека., :Терапия с использованием комбинаци, являющейся предметом изобретения, 55 снижает токсичность лимфокинов в общем случае и 11. - 2 в частности в клинической медицине, 1:42 является эфективным при низких дозах только 10 - 10 единиц на 1 кг,эесли его используют в комбинации сднРНК,5 в то время как при использовании беэ днРНК он совсем неэффективен при таких безопасных дозах,При вирусных расстройствах могут быть получены аналогичные терапевтические преимущества. Например, терапевтические вмешательства, которые воздействуют только на иммунные дефициты (чувствительны к 1 - 2) при НИ-инфекциях, оказывается, являются производящими обратный эффект, Считается, что клетки-помощники Т 4 с ТАС-рецепторами чувствительны к лимфокину 1 - 2, но в жертвах вируса СПИД - 1 - 2 вызывают размножение клеток, которые являются непосредственно уязвимыми для НИ-инфекции, и в результате наблюдается ухудшение состояния пациента. При помощи добавления дн РН К и 1 - 2 можно добиться расширения и улучшения спектра 1 - 2 и, потенциально, доугих лимфокинов, таких как интерферон и ТНФ, в качестве полезных противовирусных агентов,Плохо сочетаемая двунитевая РНК является известной формой макромолекулярной РНК, в которой дестабилизация двойной спирали предотвращает спаривание оснований, Плохо сочетаемая днРНК является хорошо известной благодаря ее свойствам индуцирования интерферона, что указывает на механизм, не связанный с самой индукцией интерферона,Общим терапевтическим осуществлением плохо сочетаемой двунитевой РНК является синтетическая днРНК, образованная при помощи формирования комплексов полирибонинозиновой и полирибоцитидиловой уридиловой кислоты, такой как г/пг/Сх, Ч или 6/и, где х - принимает значение от 4 до 29, например г/и г(С 2 Ч)п (амплиген). Основное терапевтическое преимущество плохо сочетаемых днРНК над другими формами натуральной и/или синтетической днРНК заключается в их более низкой токсичности для животных и человека. Далее ранние комплексы днРНК способны возбуждать различные, связанные с интерфероном, эффекты, но токсичность таких соединений мешает какому-либо клиническому применению при лечении рака или связанных с ним расстройств,Под "плохо сочетаемой днРНК" подразумевают ту РНК, в которой водородная связь связывающая основания) между составляющими нитями является относительно неповрежденной, т.е, прерывается в среднем меньше, чем на одну пару оснований на каждые 29 последовательных остатков оснований. Термин "плохосочетаемая1836103 днРНК" необходимо понимать соответствующим образом.ДнРНК может быть комплексом полиинозината и полицитидилата, содержащим долю урациловых оснований или гуанидиновых оснований, например, от 1 в 5 до 1 в 30 таких оснований (поли 1, поли С 4-29 хЧ или 6), Плохо сочетаемой днРН К может быть поли 1,поли С, Ч, в котором отношениеС и Ч составляет примерно 13 и 1, а коэффициенты отложения полии поли С, Ч оба меньше 9 и содержатся внутри единиц друг от друга, т,е, в предпочтительном варианте от 6,5 примерно до 7,5.Дн РН К может иметь общую формулу г/и (С 12-1 ЗЧ)л, ДРугие подходящие примеры дн Р Н К описаны ниже. 710 -710 МЕ 40 Составитель Е. Лебедеваж Техред М,Моргентал Корректор Л. Пилипенко Редактор Заказ 2992 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 Плохо сочетаемые днРНК используемые в предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения, основаны на сополинуклеотидах, выбранных из поли (Сл, Ч) и поли(Сп, 6), в которых и - целым числом от 4 до 29, и являются плохосочетаемыми аналогами. комплексов полирибоинозиновой и полирибоцитидиновой кислот, образованных при помощи модификации г/и гСЛ с целью присоединения непарных оснований (урацила или гуанина) вдоль нити пол.- ирибоцитидилата (гСп). В качестве альтернативы днРНК можно получить из поли (1), поли. (С) днРНК при помощи модификации рибоэиловой основы полирибоинозиновой кислоты (г/и), например, при помощи включения 2-0 - метил рибозиловых остатков, Из этих плохо сочетаемых аналогов г/и гСп предпочтительными являются те, которые имеют общую формулу г/и г(С 12 Ч)л. Специальными примерами плохо сочетаемойднРНКдля использования всоответствии с настоящим изобретениемявляются:5 поли(1) поли(С 4, Ч),поли поли(С 7, Ч),полиполи(С 1 з, Ч)поли поли(С 22 Ч)поли поли(С 2 о, 6),10 пОли поли(С 29 е 6) иполи(1) поли(Ср/23,6р).Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением включает днРНК, в предпочтительном варианте15 плохо сочетаемую, лимфокин и, необязательно, соединение, которое ингибирует активатор циклооксигеназы, в качествеактивных компонентов вместе с фармацевтическим носителем или разбавителем.20 Использование изобретения позволитулучшить лечение рака, вирусных инфекцийи иммунорегуляторных расстройств у человека.Формула изобретения25 Противоопухолевая композиция, содержащая лифокин, в частности, интерлейкин 2, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с цельюпридания ей противовирусного и иммуномодулирующего свойств, она дополнитель 30 но содержитднРНК формулы г/пг(С 12 - Ч)п, ав качестве лимфокина содержит а-интерферон или интерлейкинпри следующемколичественном соотношении компонентов, мг35 ДнРНК формулыгп г(С 12-Ч)