Средство для определения неспецифической реактивности овец

/55 ЕНИЯ ЕТЕЛЬ ТВ АВТОРСКОМУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗ(71) Ставропольский сельскохозяйственныйинститут и Целиноградский сельскохозяйственный институт(56) 1. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций. М,: Медицина, 1985, с,81 - 82.(54) СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИОВЕЦ Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для определения физиологического состояния организма,Гемолизин - инактивированная сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана, известен в качестве средства, которое широко используется в лабораторной практике как диагностикум. Специфическая гемолитическая сыворотка, лизирующая эритроциты барана в высоком титре, применяется в реакции связывания комплемента (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. /Под ред. М.О.Биргера, - М.: Медицина, 1982, с, 464).Известно также применение гемолизина при титровании комплемента. Его активность определяют в той же гемолитической системе, которую используют для реакции связывания комплемента (стандартные эритроциты барана и антисыворотка). Об ак(57) Использование: экспериментальная и ветеринарная иммунология. Сущность определение неспецифической реактивности овец с помощью гемолизина, который используют в разведении 1:8 - 1:16. Гемолизин смешивают с периферической кровью исследуемого животного, инкубируют 18 ч при 20 - 24 С в капиллярах и учитывают результаты реакции по скорости оседания эритроцитов и степени гемолиза в опытной и контрольной пробах, По результатам реакции определяют индекс неспецифической реактивности животных. 3 табл,тивности комплемента судят по наименьшему количеству исследуемои сыворотки, которое способствует полному или 50 гемолизу сенсибилизированных эритооцитов 1) .ааюЪИзвестен способ определения иммунологической реактивности особей, включающий инкубирование проб крови с ( ) тестирующей биологической жидкостью, причем в качестве тестирующей биологической жидкости используют видоспецифическую антисыворотку, которую в соотношении 1:2 смешивают с периферической кровью исследуемого, инкубируют 18 ч при 20-24 С в капиллярах, а результаты ре-, а акции учитывают по скорости оседания эритроцитов и степени цитолиза в опытной и контрольной пробах.Недостатком этого способа является то, что для его осуществления в условиях лаборатории необходимо приготовление видоспецифической сыворотки, что сопряжено с10 большими трудностями (наличием лабораторных животных, затратой средств и времени), Кроме того, сыворотки, полученные в условиях раэличн ых лаборатоаий и в разное время, не Отличаатся стабильностью. Качество полученных антисывороток зависит от многих факторов, связанных с технологией их получения, в том числе: от степени очистки антигена, уровня иммунного ответа лабораторных животных и других.Целью изобретения является расширение арсенала средств для определения неспецифической реактивности организма и повышение возможности их практического применения.Эта цель достигается применением гемолизина в качестве средства для определения неспецифической реактивности у овец. Определение реактивности поголовья овец осуществляется 1 и чего путем смешивания гемоллтической сыворотки с периферической кровью исследуемого животного, инкубирования смеси в капиллярах с последующим учетом результатов реакции через 18 ч по степени цитолиза в опытной и контрольной пробах.Существо технического решения заклю. чается в следующем.Гемолитическую сыворотку в соотношении 1:2 смешивают с периферической кровью исследуемого животного, инкубируют 18 ч при 20 - 24 С в капиллярах, а результаты реакции учитывают по скорости оседания эритроцитов и степени гемолиза в опытной и контрольной пробах,Бидоспецифические антитела гемолитической сыворотки под влиянием комплемента исследуемого животного вступают в реакциа с эритроцитарными антигенами, что приводит к их агглютинации и гемолизу. Цитотоксические действие гемолиэина зависит ат содержания комплемента в крови исследуемого животного, а также ат функциональной активности клеток крови и гена- типических особенностей организма,Предлагаемое средство испытано на овцематках, новорожденных ягнятах и поясняется примерами.П р и м е р 1. Готовили различные разведения гемолизина на физиологическом растворе и ставили реакцию капельной гемагглютинации с кровью исследуемого животного, Гемолитическую сыворотку для реакции связывания комплемента использовали в разведении 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, 1/128,Одну каплю крови исследуемого животнога наносили на предметное стекло, затем добавляли одну каплю гемализина, быстро перемешивали стеклянной палоч 15 20 25 30 35 40 45 50 55 кой и через 3 - 5 мин учитывали результатыреакции в крестах,Как видно из приведенных данных втабл, 1, наибольшее разведение гемолизина, с которым набгнодается агглютинация эритроцитов исследуемых проб крови, составило 1/128, Однако у некоторых кивотных (М 35; 9586; 4570 и др.) реакция была отрицательной. Наиболее выраженная реакция, интенсивностью не менее двух крестов, отмечалась в разведении гемолитической сыворотки, равном 1/16. Б связи с этим для определения иммунологической реактивности животных была взята гемалитическая сыворотка 1;16.П р и м е р 2. В капиллярную пипетку аппарата Панченкова 1/2 абьема 50 мм набирали гемолизина и выливали в лунку предметного стекла. Затем этой же пипеткой набирали кровь (1,00 мм) и тоже выливали в лунку. Кровь исследуемого животного тщательно перемешивали с антисывороткой и полученную смесь набирали в пипетку и ставили в штатив. В связи с тем, что гемализин смешивался с кровью исследуемого животнога в разведении 1:2 его рабочее разведение было 1;8.Ставили также контрольную пробу для каждого киватнога Отдельна, В контроль ном капилляре вместо гемалитической сыворотки использовали физиологический раствор,Учет реакции (контроль и опыт) проводили через 18 ч па скорости оседания зритроцитов (высота столба осевших эритроцитов), а также степени циталиэа.Индекс неспецифической реактивности определяли по формулеИНР =(А - Б). А+(С - О): С,где ИНР - индекс неспецифической реактивности;А - . высота столба осевших эритрацитов в опытном капилляре;В - высота столба осевших эритрацитав в контрольном капилляре;С - степень гемолиза в крестах в опытном капилляре;Э - степень гемолиза в крестах в контрольном капилляре.Результаты учета реакции по отдельным животным представлены в табл, 2,Как видна из приведенных данных в табл. 2, высота столба осевших эритроцитов в опытном и контрольном капиллярах у животных была различной. Наиболее существенная разница отмечена у животного К.4027 (7 мм в контроле и 67 мм в опыте), чта соответствовало самому высокому индексу реактивности, У животного Ь 10 С 1 разница была менее существенной т.е, 1 мм, а ии1773409 Таблица 1 Инвентарный номерживотного Но- мер 1 2 3 4 8 9 10 11 14 15 16 17 18 декс неспецифической реактивности составил 0,07.П р и м е р 3. По изложенной методике была проведена оценка неспецифической реактивности 92 овцематок и ро.кденных 5 ими 97 ягнятах, В результате исследований (табл. 3) установлено, что средние значения индекса неспецифической реактивности у . овцематок были значительно выше, чем у 10 ягнят.Как видно, различия между группами животных не олько по средним величинам, 15 но и характеру распределения величин статистически достоверны. Дисперсия показателя реактивности у ягнят была более выраженной, чем у маток, Коэффициент вариации индекса неспецифической реактив ности у ягнят составил 98,6;ь, а у маток 65 1,При сопоставлении результатов реакции у овцематок и рожденных от них ягнят усгановлено, что у ягнят случаев гемолиза 25 эритроцитов при добавлении гемолитической сыворотки не наблюдалось, У овцематок наоборот такие случаи регистрировались более чаще, Видимо это следует объяснить отсутствием комплемен та в крови у новорожденных ягнят.Поскольку система комплемента играет важную роль в поддержании гомеостаза по 09661 Б/35 1294 04033 9586 2177 4570 07941 02966 2464 4815 2257 07276 4593 07050 1520 1644 0706 1971 9981 казатели этой реакции отражают особенности реактивности организма,Таким образом, предлагаемое средство при использовании его с целью определения неспецифической реактивности позволяет значительно расширить возможности практического применения, особенно при массовом обследовании поголовья.Использование известного диагностикума в качестве средства для определения неспецифической реактивности имеет преимущества, так как он выпускается биологической промышленностью, стандартизирован и имеется в любой районной лаборатории.Поскольку гемолитическая сыворотка проявляет своедействие в присутствии комплемента, стало быть от реактивности комплемента, содержащегося в крови исследуемого животного, зависит проявление агглютинации и гемолиза, обусловленного действием антител, С другой стороны результаты реакции зависят также от специфики антигенов, адсорбированных на поверхности эритроцитов. Формула изобретения Применение гемолизина в качествесредства для определения неспецифической реактивности овец.1773409 Таблица 2 Табл и ца 3 Составитель А, ДмитриевТехред М.Моргентал Корректор Л. Ливринц Редактор Л. Волкова Заказ 3882 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101 Критерий различийДостоверность тб = 6,70 Р0001 Х" 1:54 Р 005