Способ определения гликпротеинов в сыворотке крови

йо делам изобретений и открытийДата опубликования описания 29,09.82 А, Н, Галушкин) Авторизобретения филиал Всесоюзного научно-ис медицинского приборостроения Ленинградскиинститу(71) Заявит ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКПРОТЕИНОВЫВОРОТКЕ КРОВИ ПО Изобретение относится к медицинской лабораторной технике, а именно, к биохимическим исследованиям сыворотки крови,Известен способ определения гликпротеинов в сыворотке крови путем добавле 5 ния к аробе сыворотки четвертичного аммониевого соединения с последующим измерением оптической плотности реакциснной смеси. При осуществлении известного способа в качестве четвертитного аммони о евого соединения используют цетилтриметиламмоний бромистый, а для стабилизации результатов в реакционную смесь вводят глицерин уже после образования комплекса Г 3 .15Однако известный способ не позволяет осуществить тонкую дифференциацию гликпротеинов и. избирательно выделить с-гликпротеины. Плохая растворимость цетилтриметиламмония бромистого в воде О вызывает необходимость дополнительного введения этилового спирта и ацетона, которые влияют на устойчивость белков и могут привести к выпадению их в осадок,2 оме того, после разбавления водой раствор из-за плохой растворимости триметиламмония бромистого стан мутным, что значительно затруднту с ним, Известный способ не д достаточной стабильностью результатов во времени, результаты сохраняют стабильные значения не более 1 ч. Кроме тьго, спссоб отличается низкой воспрсетзводимостью результатов коэффициент вариации находится в пределах 15-20%, на это влияет большая зависимость результатов от колебаний температуры; при снижении температуры с 37 до 28 С резуольтаты увеличиваются почти в три раза.Целью изобретения является обеспечение избирательного определения Ы-гликпротеинов, повышение стабильности и воспроизводимости способа.Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения гпикпротеинов в сыворотке крови путем добавления к пробе сыворотки четвертичного аммониевого соединения с последующим иэ3 960624мерением оптической плотности реакциан- вносят в пробирку и пробирку помещаютной смеси, в качестве четвертичного ам-, в водяную баню с температурой 37 оС.мониевого соединения используют цетил- Затем в раствор вносят 0,1 мп сыворозпиридинийхлорид в этиленгликольвопной ки крови, Содержимое пробирки перемешисреде, причем содержание Волы в средевают путем встряхивания и пробирку осберут в пределах 30-40%, тавляют при 370 С в течение 30 мин;Способ осуществляют слерующим обра- По истечении 30 мни мутность раствораопределяют на спектрофотомет ре или фотокоВ качестве реактива используют цетип- лориметре при600 ф 10 нм в кюветепиридинийхлорид, .а реакцию взаимодейст с длиной хода луча 10 мл против раствия цетиппиридинийхлорида с гликпротеи- вора цетиппиридинийхпорида.нами сыворотки крови проводят в этипен- Предлагаемый способ по сравнению сгликопьводной среде. Содержание воды в известным, позволяет проводить бопееэтиленгликольводной смеси берут в пре- тонкую дифференциацию гпикпротеинов, т.е,делах 30.-40%. 1 з избирательно определять только о - - Цетилпиридииийхлорид в отличие от гликпротеины. Идентификация связанныхцетиптриметипаммония бромистого хоро- с цетилпиридинийхпоридом гпикпротеинов;шо растворяется в этиленгликоле (лучше, проводится путем электрофореза на бумачем в воде) и не вызывает дополнитепь- . ге в вероналовой буфере с рН 8,6 и окной мутности раствора, Этиленгликоль0 раске реактивом; Шиффа, Связанные с цене влияет на белки сыворотки крови тилпиридинийхлоридом гпикпротеины идени позволяет направлено изменять сте- тифицируются как с-гпикпротеины.пень взаимодействия цетиппиридинийхло- Результаты реакции остаются стабильрида с гликпротеинами сыворотки крови, ными в течение 24 ч и бопее.При небольшом объеме воды в смеси эти. 2 Воспроизводимость результатов увепиленгпикольвода между цетилпиридинийхпо- чивается более чем в пять раз, коэффици-ридом и:гликпротеинами образуется не- ент вариации способа не превышает 3%.устойчивый комплекс, мутность которого В предлагаемом способе отсутствуетрастет во времени. При слишком. бопь- влияние температуры на результаты исспешом объеме воды также образуется неус- дования (в пределах 30-40 оС).30тойчивый комплекс, мутность которого Раствор цетиппиридинийхпорида хранитуменьшается во времени, Установлено, - ся при комнатной температуре без измечто стабильные и хорошо воспроизводи- нений в течение 2,5 пет.мые резупьтаты достигаются, когда содержание воды в этиленгликопьводной сме. ф о р м у л а и з о б р е т е н и яси находится в пределах 30-40%,При этом концентрация цетиппириди- . Способ определения гпикпротеинов внийхпорида в зависимости от объема сы- сыворотке крови путем добавления к проворотки крови подбирается эксперимен- бе сыворотки четвертичного аммониевоготально. Критерием оценки при этом слу- соединения с последующим измер нием40ежит оптическая, плотность мутности расч оптической плотности реакционной смеси,вора, удобная дляработы на фотоэпектри- о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с це.ческом приборе (фотоэпектроколориметре лью избирательного определения сС-гликили спектрофотометре). Например, при протеинов, повышения стабильности и вособъеме сыворотки крови 0,1 мм удобная производимости способа, в качестве четдля работы оптическая плотность (007- вертичного аммониевого соединения ис 40,3 ед, для доноров и выше 0,3 ед. для пользуют цетилпиридинийхлорид в этиленбольных)ольных) получается при 0,244 концент- гликопьводной среде, причем содержаниеорации цетилпиридинийхлорида. воды в среде берут в пределах 30-40%,П р и м е р. Готовят 0,24%-ный раст- Источники информации,Вор цетилпиридинийхпорида на этиленгли 50принятые во внимание при экспертизе,кольводной смеси, например с 40 У-ным 1,фВо 0 орС СЪюсое",1957, М 15,содержанием воды, 5 мл этого раствора р,р, 675-682, ВНИИПИ Заказ 7252/49 Тираж 887 . Подписное филиал Г 1 ПП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4