Способ изготовления вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур

. ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ ПРИ ГК НТ СССРИСАНИЕ ИЗОБР ИДЕТЕЛ ЬСТВ АВТОРСКО Изобретейие относится к ветеринарной мйи вирусы с биолотической активностью вирусологии и биотехнологии, в частности к - (10-10)ЛД 50 или ЭИД 50, при этом в ка 4,0 5,4способу изготовления вирусвакцины против честве стабилизатора используют стерильинфекционного ларинготрахеита (ИЛТ) кур, ное обезжиренное коровье молоко (обрат) в и может быть использовано в научных и соотношении 1;1, Однако эти вакцины облапроизводственныхлабораториях; занимаю-дают выраженной реактогенностью и низщихся изготовлением биопрепаратов., кой иммуногенностью.Известны способы изготовления виру- .Известен также способ изготовления свакцины против ИЛТ кур, включающиесухой вирусвакцины против ИЛТ кур из кловЫращивание вируса в различных системах на "НТ" штамма "ЦНИИПП", включающий (культурах клеток и куриных эмбрионах) с . выращивание его на 10-дневных куриных последующим сбором вируссодержащего эмбрионах в течение 120 ч, инкубироеание материала, его стабилизацию и высушива- . прй 33,5+0,5 С, охлаждение при+2 - 6 С в ние под вакуумом, . ,.:, течение 6 - 12 ч, сбор вирусного материала,Все вакцины идентичны, так как выра- его размол на коллоидной мельнице (К щивание вакцинныхштаммов проводит по: 100/О, К 60/3) при роторе, ввинченном до общепринятой методике, используют штам- деления 0,1-0,52 в течение 10-12 мин, филь 1: "; . ". :.2(71) Всесоюзный научно-исследовательский (57) Использование: ветеринарная вирусоинститут ветеринарной вирусологии и мик-логия и биотехнология; Сущность изобретеробиологии .; :.- .: ния: при изготовлении вирусвакцины в (72) А.А, Шевченко, Ю;С, Дутко, Н.А. Изото- качестве стабилизирующей защитной срева, В.М. Евсеев, Н,В. Малоголовкййа и М.А. ды используют стандаргйую лактозопепЛавров .-:. :.:тонную смесь в соотношений 1:2 с вирусным (56) Демин М;А. и др, Усовершенствование;: материалом и лиофилизируют по предлагатехнологии изготовления вакцины против,. емому режиму в течение 60-65 ч, В отличие инфекционйоголаринготрахеита, тезисы от известных эмбриональнйх вакцин продокладов научной конференции, посвящен- тив ИЛТ кур вирусвакцина; полученная по ной 30-летию ВНИИВВиМ. Покров, 1988, предлагаемому сйособу, ареактогеннэ, выс.84-85,:.: : ,-,:.:.:.:,- сокоиммуногенна, более экономична, соДмитриева Л.АМалушко В.В, Вирусо- -храняет биологическую актйвность и вакцина против инфекционного ларингот- иммуногенную эффективность в течение 12рахеита птиц.-Ветеринария, 1986, й 6, с мес хранения при 2 - 6 С, 1 табл.32-34.раживание при- 50 С втечение 12-48 ч, 20 полки сублимационной камеры охлаждают до -40 - 44 С, затей ампулы с вакцйной помещают а камеру. В течение 74 ч температуру полок в камере доводят до 0 С,выдерживая материал в зоне эвтектических температур (- 37-39 С) в течение 50 ч, Затем в течение 18 ч температуру полок в камереподнимают до+ 23 С и удерживают на этом уровне до конца лиофилизации. Температуру конденсатора в процессе лиофилиэации 30 поддерживают в пределах 70-75 С, вакуум. 60-100 мкм, Весь цикл лиофилизации длится 112 - 114 ч. Длительный процесс лиофили- зации влияет на физические показатели(растворимость, относительйую влажность) 35 и биологические свойства (активность, иммуногенность, реактогенность). При хранении снижается биологическая активность на 1,5 - 2,0 39 ЭИД 5 о/мл,40 Технология получения обезжиренного коровьето молока сложная, Она включает получение и сепарирование свежего молока до йолучения обрата с жирйостью не выше 0,1 О(стерилизацию при 110 ОС текучим паром дробно, триждй, каждый рэз по 20-40 45 мин с интервалом 24 ч, Обезжиренное коровье молоко должно иметь величину рН не ниже 6,6, плотность в пределах 1,029-1,034,храниться при температуре 4 - 6 С не более 50 1,5 мес. Это не всегда гарантирует его хорошее качество, так как среда нестандартная и имеет различный состав компонентов, который зависит от качества кормов, условий содержания дойорови времени года. Кроме того, использование обезжиренного коровьего молока в качестве защитной среды приводит к удорожанию конечного продукта зэ счет расходов на содержание доноров, длительную подготовку молока и его хранение. трование через два слоя стерильной марли, смешивание с равным количеством стерильного обезжиренного коровьего молока, замораживание при -40-50 С в течение 12- 48 ч, высушивание под вакуумом 60 - 100 5 мкм в течение 112 - 114 ч, Вакцина имеет активность 10- 10ЭИД Бо/мл, применяется только ээрогенно, обладает слабой реактогенностью, В процессе хранения а течение 6 - 9 мес при+ 4-6 С инфекц 5 ионная 10 активность снижается до 10-10 2 ЭИД 50/мл.При изготовлении этой вакцины используют в качестве стабилизирующей защитной. среды, при,:лиофилизации, 15 обезжиренное коровье молоко (обрат) - пищевой продукт, нестандартный компонент. Лиофильное высушивание проводят по сле-дующему режиму: предварительное зэмоЦель изобретения - ускорение способа,снижение ареактивности и повышение стабильности при хранении целевого продукта,Поставленная цель достигается тем, чтов качестве стабилизирующей защитной среды вирусвакцины используют не пищевойпродукт, а стандартную 10-ную лактозопептонйую смесь" в соотнощении 1:2 к вируссодержащему материалу, Такая вакцинасохраняет биологическую и иммуногеннуюактивность в течение,12 мее хранения при2-6 ОС, ареактогенна для цыплят с 15-дневйого возраста,П р и м е р, При иэготовлейии вирусвакцины против инфекционного ларинготрахеита кур используют клон НТ штэммаЦНИИПП вируса ИЛТ(регистрационный Ь61 в коллекции ВГНКИ) с биологической активностью 10 . -10ЭИД 5 о/мл, В качестве6,8 7.0стабилизирующей защитной среды высуши-вания 10 смесь стайдартиых компонентовлактозы (ТУ 6-09-2293-79) и пептойэ (ГОСТ .:13805-76) отечественногопроизводства,взятых в соотношении 1.1, которую добав-ляют к вируссодержащему материалу в соотношении, 1;2, Затем фасуют при помощидозатора(АТ) в с 1 ерильные ампулы по 4 млили флакойы по 6 мл,лйофилйзэцию проводят при вакууме 100 мкм, зэмораживэютпри - 48 С в течейие 9 ч,затем выдерживаютматериал при - 30 С в течение 40 ч, послечего доводят температуру до 22 ОС в течение16 ч и йроводят Досушивание.Это позволило ускорить способ изготов- .ленйя вирусвакцины, снизить ареактивность. и повысить стабильность при .:хранении целевого готового продукта, чтоподтверждено опытами по Сравнительнойоценке вакцины с предлагаемой защитнойсредой и режимом лиофилизации, а также сизвестной, (обезжиренным коровьим молоком) и известным режимом лиофилизации.Эти данные приведены в таблице,Иэ таблицы видно. что лиофильное высушйвание вирусвакцины с обезжиренным,коровьиммолоком, в качестве защитной.среды, в соотношении 1:1 с вирусным сйрьем происходит в течение длительного времени 112 й 2 ч. Отрйцательное давление в.процессе сублимационной сушки составляет 90+5 мкм. Замораживание проводят приминус 40+2 С в течение 42.2 ч, выдержи-вают материал в зоне эвтектической температуры (минус 37+2 С) в течение 50+1 ч,после чего доводят температуру до плюс22+1 С в течение 62 ф.2 ч й йроводят досушивание. Длительный процесс лиофилизации влияет на растворимость (времярастворения 4+1 мин), массовую долю влэ5. 1750683 бги (1,2+0,5,), изменяют иммуйобиологиче- : водительность трудав 1,5 - 2 раза; снижаютские свойства препарата (активность сни-ся зкономические затраты за счет использожается на 1,5-2,0 ц ЭИД 5 о/мл), а зто вания стандартной защитной среды и негативно отражается на иммуногенной зф- исключениянестандартного пищевого профективности препарата, Срок хранения и 5 дукта - молока,примененияегоснижаетсядо 7+2 мес, ., . Формула и.зобретенияПри использованйи предлагаемой за-:.,Способ изготовления вирусвакциныщитной средй в виде 10-ной смеси лакто- " против инФекцйонного ларинготрахеита зы и пептона,- взятыхв соотноШеййи 1:1 и кур,включэющий выращивание вируса инсмешанной с вирусным материалом 1:2 сни фекционйого ларинготрахеита кур штамма жает .расход среды вдвое, лиофильное вы-: ", ЦНИИПП, его стабилизацию и лиофилиза- сушивание по предложенному режимуцию,отличаащий.ся тем,что,сцелью : протекаетна 60 чбйстрееистабильнее;это" ускорения способа, снижения ареактивноспособствует сниженйю арективности"и йо-. "стии повышения стабильности при храневышениюстабйльности прихранении гото нии целевого продукта, в качестве ., вого продукта, При изготовлении стабилизируюЩей среды используют 10 ОДпредлагаемой вакцины используется более.ную смесь лактозыи пептона, взятых в соэкономическая, удобная, доступная, стан- отношении 1;1, которую добавляют к дартная стабйлизирующая лактозопептон-:;вируссодержащему материалу в соотноше: ная смесь; исключаетСя" из технологии 20 нии 1:2, лиофилизацию проводят привакуу-пищевой продукт(молоко); вакцина в пред":. ме 80-160 мкм, замораживание -при минус ложенном соСтаве ареактогенйа, иммуно-:, 45-50 С втечение 8-10 ч, затем выдержива: генна, легко растворима, имеетхороший .: ют материал при -28-32 ОС в течение 40-45вид, сохраняет биологйческие свойства в . ч, после чего доводят температуру до плюс течение 12 мес хранения при 2-бфС: при 25 22-23 ОС в течение 15-18 чи проводят досуизготовлении вакцины повышается произ- .шивание, "