Способ прогнозирования рецидива тиреотоксикоза

СООЭ СОВЕТСКИХсО ИАлистическРЕСПУБЛИК 1 И 3353 ЬСТВУ забор крови,йкоцитов с поител к рецеп 8, Н 1,А-РК.хелперов,соотношение ляю и м ан Н 1.А- во Т рическшститутАИН СССченко сляю орамиецепто и Т-супрантител38, Н 1.соотн А-ПР.з антиге ошения Т-хел РЕЦПИВА медицине прогноа внеива уиэобреоСоба. Изобретение отименно зндокринользовано при вативном лечен сится к медицине, огни, и может быт ис он ическом иИузного т си е ого зоба. ель изобретения очвьше ности прогтоксикоза. Способ о иГ ецепторами. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЭОЬРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБ К АВТОРСКОМУ СВИ(71) Ленинградский педиатмедицинский институт и Инакушерстза и гинекологии(57) Изобретение отнгсится ки может быть использовано длэирования воз.:икпсвения рецццбольных тиретоксикозом. 11 ельтения - повшение точности с зирования рецидива тирео уществляют следующим образом.Определение антител к рецептору тиреотропина проводят с помощью коммерческого набора бирмы "а 11 псгойг" ФРГ. Иетод основан на вьггеснении бычь его тиреотропного гормона (БТТГ), меченого 1 1 ( 1 БТТГ) из рецепторов для тиреотропного гормона (ТТГ) на меМбранах тгреоцитов антителами к рецептору ТТГ. ем больше, антител находится в исследуемой сыворотке, тем меньше 1 БТТГ остается связанным У больного осущест выделение сыворотк следующим выявлени тору тиреотропина, антигенов, количес Т-супрессоров, выч между Т-хелперами и при обнаружении тиреотропина, Н 1,А- нов и при величине перов к Т-супрессорам, большемпрогноз 1;руют возникновение рециду больных тиреотоксикозом. По снию с прототипом увеличиваетсяность прогноза на 352. алы из набора с лиоЬилизи 1 ова ным 1 БТТГ и ТТГ рецепторами добавляют по 2,5 мл дистиллированной в ды. Для полного растворения каждую виалу оставляют стоять в течение.1 О мин, периодически встряхивая, избегая образования пены. Реагенты еле дует использовать однократно, хранение не рекомендуется. В соответствующие пробирки вносяпо 50 мл сыворотки крови больного,сыворотки для позитивного контроляр (из набора), реферанс-сыворотки(из набора). Для определения неспецфического связывания (БВ-поп эресГгс 1 пд 1 п 8) вносят 50 мл референссыворотки в отдельную пробирку.В пробирки добавляют по 101 мл Трецепторов (из набора) и тщательноперемешиварт на вертушке (Чоггех), 1707538для определения ИЯВ, в пробирку вместо ТТГ рецепторов добавляют 100 мл дистиллированной воды.Инкубируют пробирки при 20 С в течении 2015 мин.В каждую пробирку затем добавляют по 100 кл 1 БТТГ и тщательно перемешивают (Чогсех), Инкубируют при 20 в течение 2 ч. Добавляю 1 1 мл полиэтиленгликоля (ПЭГ, из набора) и тщательно перемешивают. Центрифугируют в течение 30 мин при2500 ц (рефрижераторная центрифуга). Сразу после центрифугирования тщательно аспирируют сунернатаит, Преципитат не следует аспирировать.Оставшуюся активность подсчитывают на -счетчике. Расчет проводят по формуле. Осра исследуемой сывороткЛР 1хсрш референс-сыворотких 100,где Р - содержание антител в ТТГ-ре 5цепторе,срш - количество импульсов в 1 мин.Проба считаетсяположительной, еслиРЪ 15%.Неспецифическе связывание должно 0быть (9%, оно рассчитывается по ФормулеЧш Н 8 ВОбщая активностьОпределение антигенов системы Н 1 А 35осуществляют при помощи панели типирующих сывороток ЛенНИИ гематологии встандартном микролимфоцитотоксическомтесте двуступенчатым методом.2 мл гепаринизцрованной крови(100 ЕД гепарина на 10 мл крови) смешивают с равным объемом среды Хенксаи наслаивают на градиент плотностификолл-верографин (плотность 1,076 -1,077); центрифугируют 30-40 мин при200 , аспирируют лимфоциты, находящиеся в интерфазе, и переносят в мерную пробирку; добавляют 2 объема трисбуфера и центрифугируют 10 мин при200 я, супернатант удаляют, а осадокресуспендируют в растворе Хенкса,доводя концентрацию лииоцитов до2-4 х 10 кл/мл.Типирующие сыворотки в количестве1 мл вносят в лунки планшетов Терааки под вазелиновое масло.Лимфоцитарную взвесь вносят в теже лунки по 1 мл н инкубируют в течение 30 мцн при 22 С вместе с типирующей сывороткой, В каждую лунку добавляют по 5 мл свежеразмороженного кроличьего комплемента и инкубцруют прц 20 аС 1 ч.Планшеты встряхивают для удаления ваэелинового масла, вносят в каждую лунку 1 мл трипанового голубого, через 10 мин избьггок краски удаляют стряхиванием и учитывают реакцию, клетки, разрушенные антцтелами, окрашены в голубой цвет и имеют нечеткие контуры.Определение Т-хелперов (Т) ц Т- супрессоров (Тс) производят с помощью коммерческих моноклональных антител (МАг) ОКТи ОКТ(Огсо Пда 8 позстсз) в комплементзависимом микролжйоцитотоксическом тесте.Для этих целей лимфоциты перцФерической крови выделяют ца градиенте плотности Фиколл - верографин по методу Воуцщ А.Лимфоциты собирают из цнтерфазы с помощью пастеровской пипетки, дважды отмывают в среде 199 и ресуспендируют в среде РРИТ, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки в концентрациь (2-4)х 10 кл/мкл.В лунки планшета Терасакц вносят под слой вазелинового масла по 1 мкл Маг в разведениях (1:4)-(1:640) в среде РРГ 1 Т 164) с 10% эмбриональной телячьей сыворотки, используя 3 лунки для каждого разведения. В каждую лунку добавляют по 1 мкл лимфоцитарной взвеси в концентрации 2-410 кл,мкл и инкубируют прц комнатной температуре в течение 1 ч. В каждую лунку добавляют по 5 мкл цельного кроличьего комплемента и инкубируют 2 ч при комнатноц температуре. Затем в каждую лунку вносят по 2 мкл 5%-ного раствора эоэина на Физиологическом растворе, цнкубцруют 5 мин при комнатной температуре, добавляют по 1 мкл 37%-ного формальдегида (РН,0).Клеточную суспензию иэ каждой лунки переносят в камеру Горяева с помощью микрошприца, где и учитывют результаты реакции, подсчитывают количество нежизнеспособных (окрашенных) и живых клеток (н". 200 клеток).Рея льтат рассчитывают по ФормулеА-ВЦИ=- -100100-,-Вгде А - количество нежизнеспособных1707538 Послеоперационный период без осложнений, эаживление рег ргищцш. Выписанана 8-й день после оперативного вмешательства.Осмотрена через 1 месяц после операции. Жалоб нет, больная в эутиреоидном состоянии.Произведено определение антителк рецептору тиреотропина, иммуногенетическое типирование по антигецамсистемы Н 1 А, определение субпопуляций лимФоидных клеток методами, описанными выше.Результаты: ТКАВ - 23%; Н 1.А генотип: А 1, 19 В 7, 40 СУ 4, ЭК 1,4,Т /Т - 1,4. Результаты соответствуютпрототипу исследования.Осмотрена через 1/2 года послеоперации, Жалоб нет. Больная в состоянии клинического эутиреоэа.Лабораторные исследования: погло"щение1 6 ч - 14%, 12 ч - 21%,24 ч - 28%, 48 ч - 18% (И 35%мас)Т - 2,1 нмоль/л (1=1,5-2,7); Т -1 30 нмоль /л (И=105-1 7 О) .Осмотрена через год после операции. Клинический эутиреоз. Т -2,2 нмоль/л; Т 4 - 120 нмоль,:.Через полтора года после ., ер циибольная в эутиреоидном состоянии,Т - 1,9 нмоль/л, Т - 11 О нмоль/л.Таким образом, использование предлагаемого способа обеспечивает повышение точности прогнозирования возникновения рецидива тиреотоксикоза на 35%.по сравнению с известным способомблагодаря выявлению всего комплексанарушений иммунного гомеостаза, чтопозволяет использовать его в клинической практике для диспансеризациилюдей группы риска, имея целью раннююдиагностику и коррекцию возникшегонарушения, С помощью предлагаемогоспособа точность диагностики составляет 81,.4%, а с помощью известного -46, 1%. Формула изобретения П р и и е р 2. Больная И., 21 г,поступила в хирургическую клинику22.12.87 г. с диагнозом: ДТЗ 111.Тиреотоксикоз 11, в состоянии меднкаментсчного аута.еоза для оперативноголечения,26.1 2, произведена субтотальцая резекция щитовидной железы с оставлениему левого верхнего полюса 6 г ткани щитовидной железы. Способ прогнозирования рецидива тиреотоксикоза, включакгий забор крови у больного, вьщеление сыворотки и определение в ней антител к ре",сптору тиреотропина, о т л и ч а ю ц и й с я тем, что, с целью повцпения точности способа,из крови больного дополнительно вьщеляют лимЬоциты и определяют антигены Н,А-В 8, Н.А-ПК,клеток в опыте, %;В - количество нежизнеспособныхклеток в контроле, %;ЦИ - цитогоксическпй индекс,П р и м е р 1. Больна 3. 18 лет,5поступила в клинику кафедры хирурги"ческих болезней Р 1 ЛПЖ 18. 06.88 г.для оперативного лечения с диагнозом:ДТЗ. Тиреотоксикоз П. ОЬтальмопатия П, 0в состоянии медцкаментоэного эутиреоэа.22.06.88 г произведена субтотальная резекция щетовщной железы с оставлением у левого верхнего полюса 6 г 5ткани железы. Послеоперационный период без осложнений. Выписана на 8-йдень после оперативного вмешательства,зажицленце пег ргднцю, Осмотрена через 1 месяц после операции. Больнаяв эутиреоидцом состоянии. Проведеноопределение антител к рецепторам тиреотропина, иммуногенетическое типирование по антигонам Н 1 А и субпопуляцийлимФоцитов описанными выше методами. 15Результаты: ТКАВ - 18%, НЬА енотипА 2, 19 В 8, 17 СИЗ Ж 1,3, Т /Тс, 2.В виду того, что данные соответствовали предлагаемо:у методу, прогнозирована высокая степень риска воэникцо-Овения рецидива тиреотоксикоза.Осмотрена через 6 месяцев послеоперативного вмешательства, Жалобы цасердцебиение, чувство жара, повышенную возбудимость. Объективно: эмоциональна лабгпьна, тахикардия 95 Ъ,тремор пальцев рук, увеличения тиреоидцого остатка не выявлено.При контрольном лабораторном обследовании обнаружено: поглощение 1 ,О1316 ч - 64%, 12 ч - 78%, 24 ч - 76%,48 ч - 52% (М - 35, мас)3,4 нмоль/л (И=1, 5 - 2, 7); У - 190 нмоль/л(Б=05-70) .Диагностировац редщив тиреотокси-коза. Больная направлена в эцдокринноеотделение для проведения тиреостатической терапии.7 1707538 8количество Т-хелперов, Т-супрессоров, Н 1.А-В 8, Н 1.А-ПК антигенов и соотношевычисляют соотношение между Т-хелпения Т-хелперов к Т-супрессорам, боль- рами и Т-супрессорами и при выявле- шем 2, прогнозируют рецидив тиреотокнии антител к рецептору тиреотропина, 5 сикоза у больного.Составитель В.ЛитовченкоРедактор Н.Лазаренко Техред М.Моргентал . Корректор А.ОбручарЗаказ 264 Тираж Подписное чКИПИ Государственного коглтета по изобретениям и открытиям прн ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 45 Ероизводственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101