Способ получения гликопептидов

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИЕСПУЬЛИк 17 5) КОМИТЕТИ ОТКРЫТИЯМ ГОСУДАРСТВЕННЬПО ИЗОБРЕТЕНИПРИ ГКНТ СССР БРЕ НИ КОМУ С ЬСТВУ К АВ(57) Изобретениечастности получе КОПЕПТ н он. снрн 1нсн-ооннянил-О-изо к синтезу гликойти применение и ветеринарии в рида , (и) энного димемл й-метил-15 мин и лацетата. Выют, промыва мл гексанв, г (99) М-месахарида Я. вышение выходалена диаграмма,ение ч-ацетилй -ацетилмура 1козаминил- ф(56) Биоорганичес. 1813-1858.ЛУЧЕНИЯ ГЛ касается гликопептидов,ния соединений общей ф Изобретение относитс пептидов, оторые могут н в медицине, иммунологии качестве иммуномодуляторЦель изобретения - по и упрощение процесса.На чертеже представ поясняющая способ.Пример 1,Получ глюкозаминил-(1 о 14)- мил-ф 1-4)-й-ацетилглю 07 К 9 00 1 08 А 61 К 37/О где и = 1 или 2; чНЯ - остаток аминокислоты или пептида ф-лы-Аа-Оейо;1 -Аа-Ое-Сlп или -Аа, применяемых в иммунологии и ветеринарии в качестве иммуномодуляторов, Цель - повышение выхода целевого продукта и упрощение процесса, Его ведут реакцией Й-ацетилсахара (или его соли с органическим основанием) с защищенной аминокислотой или пептидом в присутствии конденсирующего агента - ъ,пентафторфенилкарбоната или ди(4-хлор,3,5,6-тетрахлорфенил)карбоната при их молярном соотношении (1-1,3):(1-1,2):1 при 0-20 С с последующим отщеплением защитных групп и хроматографической очисткой целевого продукта, Кочденсацию ведут в присутствии основания в среде растворителя (диметилформамида). Эти условия позволяют использовать более доступные вещества, обеспечивают лучшую экологию процесса. повышают выход целевого продукта на 10-25, снижают продолжительность процесса с 28 до 5-10 ч и сокращают число хроматографических очисток. 1 табл 1 ил. 1-4)ч -а цетилмурамилала1глутаминовой кислоты (В).9,74 г (10 мМ) тетрасаха растворяют в 25,0 мл перегн тилформамида, добавляют 4 морфолина, перемешивают выливают раствор в 200 мл эти павший осадок отфильтровыва ют 4 х 50 мл этилацетата, 2 х 5 высушивают и получают 11,65 тилморфолиниевой соли тетра11,65 г ( 10 мМ) соединение Ч растворяют в 100 мл диметилформамида, добавляют 4,0 г (10 мМ) дипентафторфенилкарбоната (11 а) и перемешивают при 18-20 С в течение 1 ч, Затем к реакционной массе приливают раствор 5,2 г (1 О мМ) трифторэцетата ) -злзнил-изоглутаминовой кислоты дибензилового эфира(Ч и 2 г (20 мМ) тризтиламина в 15 мл диметилформамида. Перемешивают в течение 5 ч, растворитель упаривают, к оставшемуся маслу приливают 200 мл диминерализованной воды, раствор экстрагируют 2 х 50 мл гексанв, к водному слою добавляют 5 г палладиевой черни, 4 мл муравьиной кислоты и пропускают в течение 1,5 ч ток газообразного водорода. После отделения катализатора фильтрат упаривают до половины обьема и наносят на колонку обьемом 1 л, содержащую анионит сефадекс Ав ацетзтной форме. Колонку промывают 2,5 л деминералиэовзнной воды, затем злюируют гликопептид градиентом вода - 0,15 М уксусная кислота. После упаривания фракций, содержащих гликопептид Ч, и лиофилиээции остатка получают 7,5 г 1 Ч (61,3, считая нв тетрэсахарид И (п).П р и м е р 2. Получение М-ацетилглюкозэминил-М-ацетилмурамилаланил-О 1изоглутаминв. (ГМДП) (ЧИ).5 г (10,0 мМ) дисэхарида И (и 1) растворяют в 100 мл перегнанного диметилформамидэ, добавляют 4,4 г (11,0 ОмМ) соединения П а и 1,2 мл (11,0 мМ) М-метилморфолинэ. Перемешивают при 18-20 30 мин и приливают раствор 4,6 г (11,0 мМ) трифторацетатв 1:эланил-О-изоглутамина у-бензилового эфира (ЧИ) и 2,4 мл(22,0 мМ) М-метилморфолина в 20 млдиметилформамида. Через 4,5 ч растворитель упаривают. Обработку далее проводят, как описано в примере 1. После упаривания фракций, содержащих ГМДП, и лиофилизации остатка получают 4,27 г (57,0(,) ГМДП ЧИ с содержанием основного вещества 99,56 (по данным ВЭЖХ),П р и м е р 3. Получение соединения ЧН.1,5 г (3,0 мм) соединения Н (и) растворяют в 30 мл перегнанного диметилформамида, добавляют 1,3 г (3,0 мМ) ди 14-хлор,3,5,6-тетрафторфенил)-кэрбонэта Пб и 0,45 мл (3,0 мМ) тризтиламинэ, Через 2 ч приливают раствор 1,3 г (3 мМ) соединения ЧГП и 0,9 мл (6 мМ) триэтиламина и 5 мл диметилформвмида, Перемешивают Ь ч, растворитель упвривэют и дэльнейвую обработку проводят, квк описанопримере 1, Получают 1,4 г (62,2) ГМДП с содержанием основного вещества 99,1 (по ВЭЖХ). 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 П р и м е р 4. Получение соединения ЧП, 1,2 г(20 мМ) М-метилморфолиниевой соли дисахарида 1 (п" 1) растворяют в 250 мл диметилформамида. добавляют 8,0 г(20 мМ) соединения 111 а и перемешивают в течение 30 мин. К реакционной массе добавляют раствор 8,5 г (20 мМ) соединения ЧП) и 4 мл (40 мМ) М-метилморфолина в 20 мл диметилформамидз, Через 5 ч растворитель упаривзют, Дальнейшую обработку проводят, квк описано в примере 1. Получают 9,7 г(64,7) ГМДП с содержанием основного вещества 98,96 (по ВЭЖХ).П р и м е р 5. Получение соединения ЧИ.60 г (0,1 М) М-метилморфолиниевой соли И (и) загружают в реактор емкостью 15 л с рубашкой и механической мешалкой и растворяют при перемешивании в 10 л смеси растворителей диметилформвмид-ацетонитрил 1:4. Реакционную массу охлаждают до 5-10 С и при перемешивании из мерникв добавляют раствор 48 г (0,12 М) соединения Ив в 0,2 л диметилформамидэ в течение 30 мин,Охлаждение снимают, перемешивание продолжают 1 ч, затем к реакционной смеси иэ мерника медленно приливают в течение 30 мин раствор 51 г (0,12 М) трифторацетатв ЧИ 1 в 0,2 л ацетонитрилэ, содержащий 26 мл (0,24 М) М-метилморфолинв. Перемешивэнив продолжают 5 ч, рзстворитель упариввют, смолообразный остаток растворяют в 1 л дименерализованной воды и экстрагируют зтилацетатом 2 х 400 мл. Далее обработку проводят, как описано в примере 1, учитывая масштабирование синтеза. Получают 48.7 г (62) гликопептида ЧИ.П р и м е р 6. Получение М-ацетилглюкозаминил-М -ацетилмурамилаланина Х),Аналогично опыту, описанному в примере 3, из 0,5 г (1 мМ) дисзхарида Н (п), 0,43 г (1 м М) соединения Пб, 0,45 мл (3 мМ) тризтиламина и 0,35 г (1 мМ) и-толуолсульфоната бензилоеого эфира ).-алзнина (Х) получают 0,31 г (55;6) М-зцетил-глюкозаминил-М -ацетилмурамил-аланина Х),П р и м е р 7. Получение соединения ЧП.Аналогично опыту, описанному в примере 2, из 5 г (10 мМ) соединения И (п 1), 5,2 г (1,3 мМ) соединения П а, 1,4 мл(13 мМ) М-метилморфолина и 4,2 г (10 мМ) соединения ЧИ 1 с 2,2 мл (20 мМ) М-метилмормолина получают 3,8 г (50,6;6) ГМДП.П р и м е р 8, Получение соединения ЧП, Аналогично опыту, описанному в примере 2, из 5 г (10 мМ) соединения П (п), 5,2 г (13 мМ) соединения Па, 1,4 мл(13 мМ) М-метилморфолина, 5,5 г (13 мМ) соединения Ч 1 Ис 2,8 мл (26 мМ) И-метилморфолинв получают 3,4 г(45,36) ГМДПП р и м е р 9, Получение соединения ЧИ.Аналогично опыту, описанному в примере 2, из 1,0 г(2 мМ) соединения И (п), 0,72 г (1,8 мМ) соединения И 1 в, 0,2 мл (1,8 мМ) й-метилморфолинв и 0,76 г (1,8 мМ) соединения ЧГИ с 0,4 мл (3,6 мМ) 1 ч-метилморфолина получают 0,7 г(46,6, считая нв И; 52, считая нв ЧИ) ГМДП.Соотношения реагентов и выход целевых продуктов в примерах 1-9 приведены в таблице.Все образцы гликопептидов анализировались ВЭЖХ (содержание основного вещества 2. 99, см. чертеж). Температуры плавления, удельное вращение и хромвтографическвя подвижность в тонком слое соответствуют константам для веществ полученных по способу-прототипу.Таким образом, рвзрвботан новый способ синтеза гликопептидов формулы 1, отличающийся от способа-прототипа использованием в качестве конденсирующего агента более доступных симметричных карбонатов пентагалогенфенолов формулы И. обеспечивающий охрану окружающей среды благодаря простому отделению конденсирующего реагента от продукта реакции зкстракцией из водного раствора органическим растворителем.Осуществление предлагаемого способа позволяет повысить выход гликопептидое на 10-25 и упростить процесс их получения за счет уменьшения его продолжительности с 26 ч по способу-прототипу до -10 ч и сокращения числа хромвтогрвфических оч игрок.Формула изобретения Способ получения гликопептидов общей формулы 1- сюон сн,ОйН НРН-СВ 1где и" 1;1 чНВ - остаток аминокислоты или пептидв формулыМ 1 вц, М 1 вп или 1 А 1 в, 5 взаимодействием 1 ч-ацетилвминосахарв общей формулы И 10сн сною где и"1 или 2, с защищенной аминокислотой или пептидом в органическом растворителе в присут ствии конденсирующего агента и органического основания при 0-20 С с отщеплением защитных групп и хроматографической очисткой целевого продукта, о тл и ч а ю щ и й с я тем. что, с целью повыше ния выхода и упрощения процесса, в квчестае конденсирующего агента используют симметричные карбонаты пентвгалогенфенолов формулы 1 И 30 гдев)хР;б)х О,а в качестве М-вцетиламиносахара - непос редственно й-ацетиламиносвхвр или его соль с органическим основанием и при молярном соотношении й-вцетиламиносахвр или его соли: симметричный карбонат пентвгалогенфенола: защищенная аминокис лота или пептид равном 1:(1-1,2);(1-1,2), при этом отщепление защитных групп ведут непосредственно после взаимодействия.1705303 ф Соединение 1предварительно переводили в соль с Я-метилморфолином,едактор Л, Веселовска ректор М. Максимишин каэ 168 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СС 113035, Москва. Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина,оставитель ехред М,Мо Волковатал