Способ определения личиночной диапаузы у мух

ООЗ СОГЗЕ ТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИЕСПУБЛИК 671211 А 9) 5 А 01 К 67/00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН АВТОРСКО ВИДЕТЕЛЬСТВУ М 31й институт ясная м и объект энтоеских исследо- ИЯ ЛИЧИНОЧк разведению пособам опреСОСТОяния на ния является цесса. Опредегоетеро е две пробы оряемм с дению преде- насекои уском абраааайаааЪ(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕННОЙ ДИАПАУЗЬ У МУХ(57) Изобретение относитсянасекомых, в частности к сделения физиологическосекомых, Целью иэобрупрощение и ускорение и Изобретение относится к ра насекомых, в частности к способа ления физиологического состояни мых. Цель изобретения - упрощенение процесса определения. Способ осуществля ют следую Для получения пробы кутикулу личинки надрезают и вытекающей гемолимфой заполняют лейкоцитарный меланжер до метки 0,5. При недостаточном объеме гемолимфы, полученной из одной особи, для получения пробы используют несколько личинок. Затем пробы разбавляют до метки 11 1 ф-ным раствором уксусной кислоты в физиологическом растворе для Сар)Ога СлЕдУющего состава, г; МаС 8,86, КС 2.86, СаСг 1,13, глюкоза 9,72, дистиллированная вода до 1 л, Заполненный меланмер встряхивают в теление диапаузы проводят путем определения концентрации гемоцитов в гемолимфе насекомых. Концентрация, превышающая 15 тыс. кл, мм, свидетельствует об отсутствии либо о прекращении диапауэы. При концентрации менее 9 тыс. кл, 1 мм для установления наличия диапаузы изучаемых насекомых нагревают путем погружения в воду и по увеличению концентрации гемоцитов в 2 - 3 раза судят о наличии диапаузы. Способ дает количественную характеристику диапаузы у мух, обеспечивает резкое соращение затрат времени до 1-2 ч на определение диапаузы, упрощает процесс путем исключения необходимости использования сложных технических средств.3 табл. чение 1 мин, затем выпускают первы капли и третьей каплей разведенной заполняют счетную камеру с сеткой Г ва, После оседания клеток на дно ка производят их подсчет на площади 1 помощью микроскопа, а затем определяют расчетную концентрацию гемоцитов в 1 мм гемолимфы . При необходимости личинки перед получением пробы гемолимфы нагревают путем погружения в горячую воду при 60 С на 2 мин. Для достоверного определения средней концентрации гемоцитов достаточно 5-10 параллельных измерений.Для формирования диапаузы личинки выкармливают мясом и содержат в стеклянных банках с влажными опилками при 12 С и 12-часовом освещении. Диапаузирующиеинки для холодовой сенсибилизации сожат при 6 . 1 С в течение 3 мес, а затем1671211 Таблица 1 переносят на реактивацию в исходные условия. Для получения бездиапаузного развития личинки содержат при 20 С. В табл.1 дана зависимость изменений концентрации гемоцитов в гемолимфе С.ч с 1 па от возраста особей.Из табл.1 видно. что если при бездиапаузном развитии (примеры 1-8) концентрация гемоцитов возрастает до 20-24 тыс. клеток в 1 мм, а затем в ходе окукливания резко падает, то при наступлении диапаузы (примеры 9-19) она остается примерно на одном уровне в пределах 5 - 9 тыс, клеток в 1 мм . Однако начиная с 16-го дня развития нагрев перед получением пробы гемолимфы (примеры 20 - 30) вызывает у личинок, детермированных к диапаузе, повышение концентрации гемоцитов до 15-18 тыс. клеток в 1 мм, т.е. в 2,1 - 2,9 раэ позсравнению с необработанными особями, что свидетельствует о наступлении диапаузы,В табл.2 показано изменение концентрации гемоцитов при прекращении диапауэы у личинок, прошедших холодовую сенсибилизацию при 6 С и перенесенных на реактивацию в 12 С (примеры 31 - 39), Видно, что по мере реакгивации концентрация гемоцитов в гемолимфе необработанных особей повышается до уровня концентрации у особей, которые были нагреты пред получением пробы, а затем падает аналогично тому, как это происходит при бездиапаузном развитии, Таким образом, у необработанных особей величина концентрации гемоцитов, которая превышает 15 тыс. клеток в 1 ммз, свидетельствует либо от отсутствии. либо о прекращении диапауэы. В табл,З приведено изменение концентрации гемоцитов о гемолимфе при прекращении диа паузы после холодовойсенсибилизации у личинок, перенесенных5 иэ 6 в 12 С, т.е, оптимальная температуранагрева насекомых,Выбор интервала температуры, при ко, торой происходит нагрев личинок передполучением пробы гемолимфы, обусловлен10 тем, что при нагреве ниже 55 С повышениеконцентрации гемоцитов носит временныйхарактер, быстро возвращаясь к исходномууровню после прекращения нагрева(табл,З). При температуре более 60 С резко15 увеличивается число неклеточных объектов,затрудняющих подсчет гемоцитов. При нагреве в интервале температуры 56-60 С повышение концентрации гемоцитовсохраняется в течение продолжительного20 времени после прекращения нагрева, а количество неклеточных объектов незначительно,Формула изобретенияСпособ определения личиночной диа 25 паузы у мух, включающий изучение физиологического состояния насекомых, о т л ич а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощенияи ускорения процесса, изучение физиологического состояния насекомых проводят пу 30 тем определения концентрации гемоцитов вгемолимфе насекомых, при этом при концентзоации, превышающей 15 тыс. клеток в1 мм, судят об отсутствии либо прекращении диапауэы, а при концентрации менее 935 тыс. клеток в 1 мм для установления нализчия диапаузы изучаемых насекомых нагревают путем погружения в воду при 55-60 Сна 2-4 мин и по увеличению концентрациигемоцитов в 2-3 раза судят о наличии диа 40 паузы.1671211Таблица 3 П р и ме ч а н и е . Прочие условия проведения примеров аналогичны условиям примера 1.Составитель А.Сафонкин Редактор Н.Лазаренко Техред М,Моргентал Корректор О.Кравцова Заказ 2780 Тираж 361 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035. Москва. Ж, Раушская наб 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент". г, Ужгород, ул,Гагарина, 101