Способ выявления пищевого аллергена

) (11 С 01 М 33/483 //С 01 И 21/А 61 В 10/00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯПРИ ГННТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ Т СВИДЕТ ВТОР СКО 28-14(57) Иэоне, а импищевыхния является пов ЛЕНИЯ ПИЩЕВОГО АЛЛЕР ся к меди иотно пособ ов, Ц шени бретение енно к с аллерген м выявления лью изобрететочности. Для натощак собие 3 мп, развоа 1:1, распремл, после чельную) добавляу больногослюну в кол утро чест ог н аствором о флакон дят е деляю и-ю про нтр го милюминес ные показ аллергена при увели 2003 и боП р и ее.е р 1. Реб 1 г.4 мделениеповторнуюка, жидк тскоематери с, поступилБ 1 сжалобрвоту, беспой частый стул уществля ледующим посо бр м т забор сек кта (слюну,ьное содер иство ребенВ анамнезе У больного производя та пищеварительного тра желудочный сок, дуоденал жимое), разводят его, р на отдельные пробы, .доб вые аллергены и проиэво(гнейс,лергическ аспределяют авляют пище дят замер х очныи стр нфекционн 6 ольнь Контакт не дня ь отрицает. В пищево Изобретение относится к медицине именно к способам выявления пищеж аллергенов. Целью изобретения является по шение точности и специфичности способа,2ют О,1 мл физиологического раствора, в остальные - по 0,1 мл исследуемых пищевых аллергенов: 2-я проба - аллерген коровьего молока, 3-я - желтка куриного яйца, 4-я - белка куриного яйца, 4-я - рыбы хек, 5-я - картофельного аллергена, Пробы инкубируют в термостате в течение 1 ч 30 мин, после чего добавляют 0,2 мл ЭХ-ного раствора перекиси водорода, производят замер хемилюминесценции за 10 с и вычисляют средние значения за 1 с. Получены следующие результаты; хемилюминесцентное свечение контрольной пробы 68750 имн/с, 2-й пробы 64300, 3-й 67958, 4-й 124322, 5-й 59996. Выявлен аллерген, которым является белок куриного яйца, То есть при увеличении хемилюминесценции по сравнению с контролем на 200 а н более выявляют аллерген. Точность диагностики при использовании способа составляет 993. ценции. Сопоставляя полученатели с контролем (пробы беэ), выявляют пищевой аллергенчении хемилюминесценции наребенка были включены следующие блюда: манная каша, яйцо, рыбное филе, картофельное пюре, печенье, творогПереедание, нарушение режима дня ре 4 бенка мать отрицает.Объективно: ребенок очень беспокоен, стучит ножками, кричит. Кожные покровы бледные. Сердце, легкие - без , особенностей, Живот вздут, пегли тон кого кишечника урчащие, стул жидкий, , желтый, с прожилками слизи. Иочеиспускание в норме. Общий анализ крови - без патологии, При бактериологическим исследовании кала патологическая мик рофлора не обнаружена. На основании клинико-анамнестических данных, а также исключения инфекционного генеза заболевания заподозрено наличие пищевой сенсибилиэации. 20Для диагностики зтиологически зна,.чимого аллергена ребенку проведено исследование согласно предлагаемому изобретению, С этой целью у ребенка утром натощак собрана слюна в коли честве 3 мл. Слюну развели раствором Ханкса 1.1, распределили на пробы в специальные флаконы по 1 мл, после чего в первую пробу (контрольную) добавили О, 1 мл физиологического раствора, в остальные (опытные) по 0,1 мл исследуемых пищевых аллергенов; 2-я проба - аллерген коровьего молока,3-я - желтки куриного яйца, 4-ябелки куриного яйца, 5-я - рыбы хек, 6-я - картофельного аллергена. Пробы инкубировали в термостате в течение1 ч. 30 мин, после чего добавляли 0,2 мл 37.-ного раствора перекиси водорода и производили замер хемилюми 40 несценции за 10 с, вычисляя средниепоказатели за.1 с, Получены следующиерезультаты: хемилюминесцентное свечение контрольной (первой) пробы 68750 имп/с, 2-й пробы 64300 имп/с, 3-й 67958 имп/с, 4-й 124322 имп/с,5-й 59966 имп/с, 6-й 69600 имп/с.Следовательно, перекисная хемилюминесценция 4-й пробы, содержащей антиген белка куриного яйца существенно выше по сравнению с контролем, в то время50как хемилюминесцентное свечение других проб, содержащих пищевые аллергены, существенно не отличаются от контроля.551па основании полученных данныхсделано заключение о наличии пищевойсенсибилизации к белку куриного яйца,Точность диагностики пищевой сенсибилизации по предлагаемому способу подтверждена другими методами исследования.При аллергическом обследовании определены; увеличение концентрации УдЕ до 420 ед/мл, повышение показателя повреждения нейтрофилов с аллергеном белка куриного яйца 187, теста угнетения миграции лейкоцитов с аллергеном куриного яйца 607., Проведение кожных проб, также как и исследование по способу-прототипу (постановка провокационного теста), оказались невозможными в связи со значительно выраженным обострением .аллергического энтероколита,Проведение неспецифического десенсибилизирующего лечения, а также элиминация установленного этиологически значимого пищевого аллергена привели к полному выздоровлению ребенка.Таким образом, точность способа в данном примере подтверждена целым комплексом методов аллергологического обследования,. а также положительным клиническим эффектом от проведения элиминационного теста, в то время как обследование по способу-прототипу оказалось практически невозможным. Это подтверждает преимущество данного способа по сравнению с.прототипом.П р и м е р 2. Ребенок Ж. Коля, поступил в гастроэнтерологическое отделение ДБ У 1 с жалобами на периодические боли в животе с преимущественной локацией в области правого подреберья, Боль обычно возникала после еды по типу колик. В настоящее время состояние ребенка удовлетворительное. Кожные покровы обычной окраски, мальчик удовлетворительного питания, Тоны сердца звучные, ритмичные, В легких веэикулярное дыхание. Живот мягкий, болезненный при пальпации в области правого подреберья, Стул и мочеиспускание в норме, Общ. ан. крови: лейк, 5,5- 10 /л, гемоглобин 120 г/л, лейкоцитная формула: Э, п, с, л, м, СОЭмм/ч. Протеинограмма: общ. белок 48 г/л, апьбумины 62,7 Х глобу" лины 37,3, 06, 7 Х; с 10,5; ф 14 Х, 5,8 Е, Печеночные пробы: билирубин в норме. При лабораторном исследовании дуоденального содержимого: все три порции желчи прозрачны, лейкоциты 1, 2 в п/зр., содержание белка в пределах нормы,Для диагностики пищевой сенсибилизации желчь ребенка, полученную5при дуоденальном зондировании взятодля проведения хемилюминесцентногоисследования по предложенному спосо бу. Желч развели раствором Хенкса1:10 и распределили на пробы по 1 мл.Дальнейшее исследование проведено согласно указанной методике.В результате проведенных исследований получены данные о значительномповышении хемилюминесцентного свечения пробы, содержащей белок коровьегомолока (189333 имп/с) по сравнению сконтролем (43200 имп/с), в то времякак хемилюминесцентное свечение проб,содержащих другие пищевые аллергены, 20практически не отличалось от контроля. На основании указанных данныхустановлен диагноз пищевой сенсибилизации к белку коровьего молока,Комплексное аллергологическое обследование, проведенное ребенку, подтвердило точность способа. При постановке скарификационных проб с пищевым аллергеном положительная реакцияна белок коровьего молока (4"). Уровень УдЕ 490 ед/мл. ППМ на белок коровьего молока 27 ., РБТЛ с ФГА 240,с белком коровьего молока 72 , реакция торможения миграции лейкоцитов5835Учитывая удовлетворительное состояние ребенка, ему был проведен провокационный тест на молоко по прототипу,Ответная клиническаяреакция на введение специфического пищевого аллергена проявлялась однократной рвотой,генералиэованными болями в животеспастического характера. Элиминацион-ная диета с применением неспецифических десенсибилиэирующих средств оказала положительный результат, Следовательно, в данном примере точность предлагаемого способа под 2 6тверждена постановкой кожных проб,комплексным. аллергологическим обследованием провокационным тестом. Однако проведение провокационного теставызвало значительное обострение заболевания, что еще раз подтверждаетпреимущества данного способа по срав-,нению с прототипом.Таким образом, данный способ обладает целым рядом преимуществ.Высокая точность и специфичностьдиагностики. Обследовано 79 человекс пищевой сенсибилизацией. Точностьдиагностики подтверждена комплексомаллергологических методов исследования и составила 99 . Данные представлены в таблице.Высокая объективность метода. Ре- .гистрация результатов проводится с помощью печатного устройства аппаратадля измерения хемилюминесценции и независит от субъективных факторов (исследуемого и исследователя),Всеобщая допустимость для больных,отсутствие противопоказаний, побочныхявлений, осложнений.Широкая информативность, посколькуспособ позволяет одновременно исследовать неограниченное число пищевыхаллергенов. Формула изобретения Способ выявления пищевого аллергена путем проведения аллергических проб со стороны местного иммунитета пищеварительного тракта, о т л и - ч а ю щ и й,с я тем, что, с целью повышения точности и специфичности способа, проводят измерение иницируемой перекисью водорода хемилюминесценции смеси стандартного пищевого аллергена и секрета пищеварительного тракта в соотношении 1:10 и при уве-, личении хемилюминесценции по сравнению с контролем на 2003 и более выявля 1 от аллерген пищевой сенсибилизации.11532872 Проба с пиГруппы обследованных Р Частотаположи- тельных Проба без.аллергена Число обсле щевыми аллергенами дованных реакций, Е 34 64420+98 15896+110 (0,001 100 0,001 100 (0,001 100 (0,001 98 )0,05 0 . 15 15 15 20 188395+1401252201156248200+14062000+96 ФР " достоверность различия результатов между контрольной Редактор О.Спесивых Заказ 8094/51 Тираж 789 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 Щща с пищевой сенсибилизацией.м лочнойк белку куриного яяцак рыбек;белку мясаЗдоровые лица53210+13267910+12859770+24560300+77 Составитель Э.ЦыгановТехред Л,Олийнык Корректор М.Максимишинец