Способ идентификации бактерий рода

. СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИН А 1 УДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР(56) Авторское свидетельство СССРФ 1235220, кл, С 12 ( 1/04,С 12 М 1/20, 1984.Руководство по микробиологическойдиагностике инфекционных болезней.(54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙРОДА К 1.ЕВЯ 1 ЕЬ 1,А(57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и касаетсяспособа идентификации бактерий родаК 1 еЪэ 1 е 11. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа, Способосуществляют следующим образом, Исследуемый материал высевают на плот(51)4 С 12 Я 1/04 // (С 12 Я 1/04, С 12 К 1:22 ную питательную среду, соде.жащую,г/л дистиллированной воды: сухой питательный агар 32,0 - 35,0; 1,-арабиноза 8,0 - 12,0; бромтимоловый синий 0,06 - 0,08; 5-аминосалициловаякислота; 4,5 - 5,5, Среда светлозеленого цвета, рН 6,8 - 7,2, Посевинкубйруют при 35 - 37 С. Вокругколоний бактерий рода К 1 еЪэ 1 е 11 образуется эона интенсивного чернокоричневого цвета диаметром 2535 мм, Идентификацию проводят водин этап без дальнейщих пересевовна специфические питательные среды,Способ высоко чувствителен и позволяет определять наличие колебанияв концентрации менее 100 кл/мл вассоциации микроорганизмов, Точность91,7 ф 2 7. Время идентификации безпредварительного выделения чистойкультуры 18 - 24 ч. 1 табл.1 1 31Изобретение относится к медицине,в частности, к медицинской микробиологииЦель изобретения - ускорение иупрощение способа идентификации бактерий рода К 1 еЬэе 11 а путем созданиясреды, обеспечивающей одноэтапноеопределение.Дифференциальную среду готовятследующим образом,В 1 л воды вносят 35 г сухого пи"тательного агара на любом гидролиэате, кипятят до полного растворения.(или автоклавируют), Добавляют 5 г5-аминосалициловой кислоты. 10 гЕ-арабинозы, 4 мл 1,6%-ного спиртового раствора бромтимолового синего, растворяют при перемешивании,Добавляют при перемешивании 1 н,раствор ИаОН до появления зеленойокраски среды, соответствующейрН 6,8-7,2 (на каждые 100 мл средытребуется около 2,5-3 мл 1 н, раствора 1 аОН). Разливают среду в стерильные чашки Петри, Среда в чашкахПетри имеет зеленую окраску, пригодна к использованию и течение 5 суток при хранении от 4 до 8 С,П р и м е р 1, Исследуемый материал - чистую агаровую культуруидентифицируемых бактерий - засевают петлей в виде бляшки диаметром5 мм на поверхность сектора питательной среды в чашке Петри (средасодержит на 1 л дистиллированнойводы, г: сухой питательный агар изрыбного гидролиэата 32; 5-аминосалициловая кислота 4,5; 1-арабиноза 8; бромтимоловыи синий 0,06рН 7,0, установлен добавлением 30 мл1 н, раствора БаОН). Инкубируют при37 С в течение 18 ч, после чего учитывают результат: на поверхности питательной среды светло-зеленого цвета вырастает в виде бляшки макроколония бактерий, окруженная зонойпитательной среды диаметром 25 мминтенсивной черно-коричневой окраски. Наличие этой зоны указывает напринадлежность исследуемых бактерийкроду К 1 еЬэ 1 е 11 а.П р и м е р 2, Исследуемый материал - мокроту больного (01-0,2 мл)засевают шпателем на поверхность питательной среды в чашкеПетри среда содержит, г: сухой питательныйагар 33,5, 5-аминосалициловая кислота 5,0; Е-арабиноза 10; бромтимоло 3874 2 5 1 О 15 20 25 30 вый синий 0,07 г, рН 6,8, Инкубирукт при 37 С в течение 24 ч, после чего учитывают результат: на поверхности питательной среды светло-зеленого цвета вырастают колонии различных бактерий, среди которых имеются окруженные четкой зоной черно-коричневой окраски среды, что указывает на принадлежность бактерий из этих колоний к роду К 1 еЬэ 1 е 11 а.П р и м е р 3, Исследуемый материал, содержащий идентифицируемые бактерии, засевают на поверхность питательной среды в чашке Петри среда содержит, г: сухой питательный агар 35; 5-аминосалициловая кислота 5,5; 1,-арабиноэа 12; бромтимоловый синий 0,08; дистиллированная вода 1 л; рН 7,2 Посев инкубируют прий35 С в течение 18 ч, после чего учитывают результат: на поверхности питательной среды светло-зеленого цвета вырастают колонии бактерий, окруженные зонои питательной среды интенсивной черно-коричневой окраски. Наличие этой зоны указывает на принадлежность исследуемых бактерий к роду К 1 еЬзхе 11 а.В таблице представлены примеры использования способа с вариантами питательной среды, приготовленной на основе "Эритроит агар сухойСпособ обладает высокой чувствительностью, позволяет обнаружить и идентифицировать К 1 еЬэ 1 е 11 при наличии их в исследуемом материале менее 100 кл,/мл,Дифференциальные признаки К 1 еЬ- э 1 е 11 (зона черно-коричневой окраски среды вокруг колоний) четко проявляются при ассоциациях с любыми бактериями, способными расти на данной средеПредлагаемый способ позволяет идентифицировать 91,7+2,0% штаммов К 1 еЬэ 1 е 11.Способ ускоряет идентификацию (через 18-24 ч вместо 48-72 ч по известному способу), которую проводят непосредственно при посев исследуемого материала на питательную среду,без дополнительных пересевов на дифференциальные среды,Формула и з о б р е т е н и я Способ идентификации бактерий рода К 1 еЪэ 1 е 11 а путем посева исследуе13874Сухой пита- тельный 13 мого материала на питательную среду,содержащую сухой питательный агар,бромтимоловый синий и дистиллированную воДу, при рН 6,8"7,2 с последующим инкубированием посевов при 35 -37. С и идентиФикацией искомых бактерий по характеру окрашивания, о т -л и ч а ю щ и й с я тем, что, сцелью ускорения и упрощения способа,в качестве источника углеводов используют Ь-арабинозу, при этом в питательную среду дополнительно вводят5-аминосалициловую кислоту при следующем соотношении входящих в нееингредиентов, г/л: 32,0"35,0 8,0-2,0 агарЬ-Арабиноза5 Бромтимоловыйсиний5-Аминосали 0,06-0,08 Посев чистой культуры К 1 еЬяде 11 Фоновая Наличие Размер колонийК 1 еЬ- яде 11,мм Посев бляшкой диаметром 5 мл зон черно-коричневой окраскапитательной Выраженность Фоновая окЬ-арабиноза,г/л 5-Аминосалициловая окраскисредывокругколонийпрочихвидовбактерий среды раска питачерно корич невой кислота,г/л тельнойсреды окрас ки пи тательной среды вокру колоний К 1 еЬ- я де 11 4,5 25-30 25-30 25-30 Светло-зеленая 10 То же2-4 То же 12 5,0 30-35, 2-4 12 Варианты питательнойсреды на основе"эритроит агарсухой 36 г/л, индикатор бромтимоловыйсиний 0,064 г/л,рН 7,0 Интенсивностьдифференциального признака - диаметрзоны чернокоричневойокраски среды вокругбляшки колонии К 1 еЬяде 11,мм циловаякислота 4,5-5,5 0 Дистиллированная вода До 1 л,посев инкубируют в течение 18-24 ч до образования темно-коричневой эоны вокруг колонии, по которой иден-. 5 тиФицйруют бактерии рода К 1 еЬяде 11 а.1 Посев смешанной культуры1313874 6Продолжение таблицы Варианты питательнойсреды на основе"эритроит агарсухой 36 г/л, индикатор бромтимоловыйсиний 0,064 г/л,рН 7,О Посев чистой культурц К 1 еЬа 1 е 11 Посев смешанной культуры(фекалии с добавлениемтест-культуры К 1 еЬэде 11) фоноваяокраскапитательнойсреды Размер колонийК 1 еЬ- а 1 еП,мм Посев бляшкой диаметром 5 мл Фоновая ок 1.-,арабииоза,1г.Ь 5-Аминосалициловаякислота,г/л раска пит ательной среды 25-30 30-352-3 ЖелтоСветло-зеленая зеленая2-3 10 сг2-3 12 25-30 П р и м е ч а н и еУчет результатов посевов через 24 ч инкубации при37 СЧувствительность среды 60-1007 по отношению кчислу колоний К 1 еЬа:е 11, выросших на питательномагаре без предложенных добавок,Составитель А. Завадская Техред А. Кравчук Корректор С.Иекмар Редактор А.Маковская Заказ 2181/26 Тираж 500ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Подписное Производственно-полиграАическое предприятие, г,Ужгород, ул.Проектная,ИнтенсивностьдиФФеренциального признака - диаметрзоны чернокоричневойокраски среды вокругбляшки колонии К 1 еЬвхе 11,мм Выраженностьчернокоричневойокраски питательнойср.едывокрукало"нийК 1 еЪэде 11 Наличиеэон черно-коричневойокраскисредывокругколонийпрочихвидовбактерий