Способ определения резистентности организма

9) (1),А 61 К 39/О ОБ ТЕЛЬСТВ Мд 35.Голик,ут тельно опредепя я Е.М.овый мет я завершен - Медицина. ия, 1958,ого показат с истентность СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИХРЕСПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕНКЦЙ КОМИТЕТ СССПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ.И ОТКРЫТИ ОПИСАНИЕ Н АВТОРСКОМУ С(56) Берман В.Б., СлавсЗавершенный фагоцитоздический принцип изученной фагоцитарной реакциЭпидемиология. ИммунолоУЗ . 8-13,(54) (57) СПОСОБ ТЕНТНОСТИ ОРГАНИ деление активных филов с последую показателя резис ч а ю щ и й с я повышения точнос ПРЕЛЕПЕНИЯ РЕЗИСМА, включющий опреи неактивных нейтрощим подсчетом в нихентности, о т л и -тем, что, с цельюи способа, дополнив крови общее коов, общее содержаактивность лизоцигглютинина, подсчиь резистентности дляя крови, суммируютателе резистентностиют сниженную резисего значении выше личество леикоциние нейтрофилов,ма и содержаниетывают показател и при общем пока ниже 110 определ тентность, а при 140 - повышенную1. 1180000Изобретение относится к медицине, ка в частности к иммунологии, и может ча быть использовано для прогнозирова- щи ния, профилактики и лечения несге- Пе цифических заболеваний различной эти-жи ологии, тиЦель изобретения - повышение точ- кл ности способа определения резистент- но ности организма. поСпособ осуществляют следующим 1 О по образом..Затем в сухую центрифужную про бирку помещают 0,5 мл крови и получают сыворотку путем центрифугированиясо скоростью 1500 об/мин. В отдельную пробирку отбирают 0,2 мл полученной сыворотки и добавляют в нее 55 1,8 мл 0,57.-ного раствора хлориданатрия (для получения разведения сыворотки 1:10) и тщательно перемешивают. Затем в шесть отдельных пробирок У обследуемого осуществляют забор пробы крови из концевой Фаланги пальца при помощи меланжера до отметки 0,5. Затем в этот же меланжер дополнительно вводят до отметки 1, 1 разбавляющую жидкость, представляющую собой 37-ный раствор уксусной кислоты, окрашенный 1%-ньм раствором метиленовой сини. Затем, осуществляя колебательные движения меланжера в течение трех минут, перемешивают находящиеся в нем жидкости. Полученную смесь вводят в камеру Горяева и общепринятым способом осуществляют подсчет лейкоцитарных клеток. Для этого параллельно с забором пробы крови для определения общего. количества лейкоцитов у обследуемого берут мазок крови путем нанесения капли крови на предметное стекло с последующим распределением ее по предметному стеклу специальным шлифованным стеклом. Полученный мазок высушивают, фиксируют, красителем, приготовленным по мето ду Май-Гронвальда, и окрашивают по методу Романовского-Гимзе.Получечный мазок промывают, высушивают на воздухе и производят подсчет форменных элементов лейкоцитар ной формулы под микроскопом с иммерсионной системой.Далее приступают к определению фагоцитарной активности нейтрофиловфагоцитов по методу Бермана и Слав- ской, основанному на фазности фагоцитарной реакции. Для этого в центрифужную пробирку, содержащую 0,3 мл пробы крови, вносят О, 1 мп 37-ного раствора цитрата натрия. Пробирку цвнтрифугируют 20 мин со скоростью 500 обмин. Надосадочную жидкость сливают, а в осадок вносят 0,1 мп .10 миллиардной взвеси Рас. Со 1 х (штамм 276) и термостатируют прио37 С в течение 45-60 мин при встряхивании взвеси через каждые 15 мин. После термостатирования несколько пель взвеси переносят на агар в шку Петри и распределяют при помопредметного стекла. Затем чашкутри помещают в термостат и выдервают 2 ч при 37 С, После термостаорования к поверхности агара приадывают слегка прижимая обезжирене подогретое предметное стекло, сле чего стекло быстро снимают, лученный мазок высушивают, фиксируют и окрашивают методом, аналогичным использованному при окраске препарата для подсчета лейкоцитарной формулы, и исследуют под микроскопом с иммерсионной системой с целью подсчета количества активных нейтрофилов, т.е. нейтрофилов, в прото- плазме которых были обнаружены микробные тела, и неактивных нейтрофилов, т.е. захвативших микробных тел. Суммарное количество активных и неактивных нейтрофилов не превышает 100 нейтрофилов, Затем в активных нейтрофилах подсчитывают количество жизнеспособных и нежизнеспособных микробных тел. На основании полученных результатов вычисляют фагоцитарное число по формуле 100 а в где ц - количество активных нейтро. Филов;- количество неактивных нейтрофилов; фагоцитарный индекс по формуле С + йгде С - количество жизнеспособныхмикробных тел;д - количество нежизнеспособных микробных тел;и коэффициент завершенности фагоцитоза по формулеПоПо где Ь - активность лизоцима;П - оптическая плотность доотермостатирования в пробе;П, - оптическая плотность послетермостатирования в пробе; наливают по 1 мл 0,57-ного раствора хлорида натрия. Из пробирки, содержащей сыворотку в разведении 1:10, отбирают 1 мл и наносят на первую про 5 бирку ( 1 ), содержащую чистый физиологический раствор, перемешивают, отбирают из нее 1 мл и вносят его в следующую ( 11 ) пробирку и т.д. аналогичным образом до последней пробирки, 1 О из которой после перемешивания отбирают 1 мл с целью достижения равенства объемов во всех исследуемых пробирках.В каждую из пробирок вносят бак териальную смесь, приготовленную следующим образом.В пробирку со скошенным мясопептонным агаром вносят культуру Вас. Со 1 (штамм 276) и пробирку помещао. ют в термостат ( =37 С) на 24 ч. Через 24 ч известным способом готовят 10-миллиардную взвесь бактерий.В каждую пробирку с указанным разведением сыворотки вносятпо две 25 капли полученной взвеси бактерий с последующим выдерживанием их в термостате при 37 С в течение 24 ч.оЧерез 24 ч определяют титр нормального агглютинина по последней щ пробирке, в которой еще обнаруживают агглютинат,После этого приступают к определению активности лизоцима. Для этого из оставшейся сыворотки отбирают О, 1 мл и вносят в пробирку, содержащую 4,9 мл 0,57-ного раствора хлорида натрия. В эту же пробирку затем вносят 1 мл 10-миллиардной взвеси бактерий М.Еузос 1 есссия, перемешивают и осуществляют первичное фотоколориметрировапие. Затем пробирки с бактериальной взвесью термостатируют при 37 С в течение трех часов0и повторно фотоколориметрируют. При 45 этом в качестве контроля используют физиологический раствор, содержащий 1 О-миллиардную взвесь М.Еузодесйсоз без сыворотки. Активность лизоцима вычисляют по формуле501,2 Епоказатель резистентностн; относительный статистический вес 1 -го показателя; гдеР а, - величина-го показателяу пациента в момент обследования;а - известная из практики ве 1личина-го показателя., соответствующая наименьшей реэистентности оргакниэма;а - известная из практики ве 1личина-го показателя, соответствующая наибольшей резистентности организма,При значении показателя резистентности ниже 110 определяют сниженную резистентность, а при его значении вьппе 140 - повышенную резистентность.Величины относительных статистических весов (К) каждого из семи показателей приведены в таблице Показатель Коэффциент завершенностифагоцитоза 50 фагоцитарное число 30 Общее содержание нейтрофилов 25 Активность лизоцима 14 Содержание агглютинина Общее число лейкоцитор Фагоцитарный индекс 40 Пр и м е р 1. "ольного К. с диагнозом: острый язвенно-некротический Р - оптическая плотность до теркомостатирования в контроле;Рк, - оптическая плотность послетермостатирования в контроле.Показатель резистентности вычисляют по формуле:с, - 1 с,(а- а, )ак - ач Р1180000 О 0,40 160 69 3,4 4 О Составитель Г,КрюковаРедактор Н,Бобкова Техред А.Кикемезей Корректор А.Тяско Заказ 5782/3 Тираж 721 ПодписноеВНИИПИ Гасударственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д.4/5 Филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул,Проектная,4 гингивостоматит обследовали с целью определения резистентности предлагаемым способом.Показатели кровиОбщее число лейкацитов,лейкоцитарные клетки/л 13,5 109Общее содержание нейтрофилов,% 74Активность лизоцима,% 23Содержание агглютинина, титр 80Фагоцитарное число,% 40Фагоцитарный индекс,ед бКоэффициент завершенности фагоцитоза Вычисленный показатель резистентности составил 74,72.Следовательно, у больного была 20 оценетта сниженная резистентность орга изма. Резистентность организма, оцененная по известному способу, также оказалась сниженной. 25Иосле проведенного лечения у больного наблюдалась полная эпителизацияэлементов поражения, В этот периоду него повторно бьцта определена резистентность. ЗОПоказатели крови:Общее число лейкоцитов,лейкоцитарные клетки/л 6,7" 109Общее содержание нейтрофилов,% 63Активность лизоцима,% 79Содержание агглютини- ,на, титрфагоцитарное число,7Фагоцитарный индекс,ед.Коэффициент завершенности фагоцитоза 0,78Вычисленный показатель резистентности составил 126,6. У больного была оценена нормальная резистентность. При оценке резистентности по известному способу она по-прежнему оставалась ниже нормы.Больной К. бып вызван для контрольного осмотра через две недели после полной эпителизации элементов поражения.Показатели крови:Общее число лейкоцитов,лейкоцитарные клетки/л 6,8109Общее содержание нейтрофилов, % 67Активность лизоцима,% 84Содержание агглютинина, титр 160Фагоцитарное число, % 75Фагоцитарный индекс,ед. , 3,2Коэффициент завершенности фагоцитоза 0,93Вычисленный показатель резистентности составил 14 1,0. Оценена повышенная резистентность организма. По известному способу резистентность бьцта оценена также повьпненной.Положительный эффект предлагаемого способа подтверждается тем, что из 16-ти обследованных больных предлагаемым способом результаты оценки резистентности в норме. В то же время определение резистентности извест. ным способом позволило лишь у шести обследованных лиц установить нормаль" ную резистентность, у остальных бьцто показано снижение резистентности, что составляет 37,5% случаев.Следовательно, использование предлагаемого способа повьппает точность определения резистентности организмапо сравнению со способом, основывающимся на определении коэффициентазавершенности фагоцитаза, в 2,7 раза.