Способ определения изоиммунологической совместимости крови донора и реципиента

(51)5 С 0 4 РМИТЕт СССР Ий И ОтНРЫт ГОСУДАРСТВЕННЫ ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕ(5 тнои на нически о нстикого.И Л 1 нов идов Шаноян илова Д,рекции в серд Методич(46) 15.09 (21) 39266 (22) 10.07 (71) Моско исследоват тут им, М. (72) Л.А.С (53) 65.3 (56) Дмитр Самсонова ды исследо логических сосудистой рекомендац.85вский облаельский клиФ.Владимирумбатов и Л73 (С.5,8)нева Ь.АН.Н Самувания и коросложненийхирургии.ии.М., 198 ПРЕДЕЛЕНИЯ ЯЗОИММУНОЛОСТИМОСТИ КРОВИ ОНОРА4) СПОСОБ ОГИЧЕСКОЙ СОВМЕ Д И РЕЦИПИЕНТА(57) Изобретение относится к медицине, точнее к гемотрансфуэиологии, касается способа определения изоиммунологической совместимости крови донора и реципиента. Цель изобретения - предотвращение посттрансфузионньм реакций. Для этого проводят реакции агглютинации по эритрацитарноантигенным системам, определяют совместимость по белково-плазменным ан-тигенным системам, применяя реакции связывания комплемента в .смешанных образцах плазм крови реципиента иЯИзобретение относится к медицине,в частцостй к гемотрансфуэиологиии касается способа определения иэоиммуцологической совместимости кровидонора и реципиента,Цель изобретения - предотвращениепосттрансфуэионцых реакций, .Конкречцый пример осуществленияспособа. 10Для операций ца сердце с искусственным кровообращением донорскуюкровь подбирали следующим, образом.У больного (реципиента) перед операцией определяли группу по системе 15ЛВО и реэусцую принадлежность крови.То же проделывали с кровью каждогодонора. Для выявления сенсибилизацииорганизма больного с появлением реэусцых (неполных) и других антител, 20если ц анамнезе имелись указания царанее перенесенные гемотрацсфузии,то эа неделю до операции проводилитестирование по Кумбсу. Непосредственно перед операцией определяли ицдивидуальную совместимость крови каждого донора в отдельности с кровьюреципиента по антителам системыАВО, а также 11,Б, Эту пробу ставилица плоскости прц комнатной температуре в солевой среде, эа агглютицаЬей следили и течение 5 мин. Приэтом ца стекле сначала смешивалиэритроциты каждого донора в отдельности с сывороткой кровибольного,затем эритроциты больцого с сыворот-кой крови каждого донора, Появлениеагглютицатов зритроцитой в обесцвеченной жидкости означает несовместимость крови данного донора с кровью 40больного. Далее определяли совместимость крови доноров с кровью реципиента по резус-фактору, причем это,делали с помощью 2 проб, а именнос помощью применения желатины (в45, пробирках) и с помощыа применениянепрямой пробы Кумбса, Пробы с желатиной ставили в термостат в агглютинациоцных пробирках (по числу доноров) при 46-48 С на 10 мии, Появление в пробирках плавающих хлопьевозиачало несовместимость. Для постановки непрямой пробы Кумбса сначалатрижды отмывали эритроциты каждогодонора в центрифужцых пробирках, затем отмытые эритроциты ццкубировалис сывороткой реципиента в термоста"оте при 37 С .в течение 45 мцн, после,чего инкубцронанные эритроциты вновь подвергали трехкратномуотмыванию ц к отмЬтым эрцтроцитам добавляли сыворотку для пробы Кумбса, представляющую собой кроличью антисыворотку к глобулинам человека. Если при размазывании ца стекле образовывались агглютинаты эритроцитов, то кровь такой пробы признавалась несовместимой по системе резус- и другой спе" цифцчности.Дополнительно определяли совместимость каждого донора в отдельности с реципиентом по плаэменно-белковым антигенным системам, используя с этой целью реакцию связывания компле" мента (РСК). Техника поставноки РСК в предлагаемом нами способе заключалось в следующем,В сухие цецтрифужные пробирки набпралц по 8-10 мл крови реципиента и каждого донора в отдельности. Пробы крови центрифугировали 10 мин до образования прозрачной плазмы.Иэ каждой пробирки в видалевские пробирки переносили по О, 1 мл плазмы и добавляли по 0,4 мл физиологического раствора. В эти же пробирки добавлял по 0,5 мл разбавленной физиологическим раствором (1:5) плазмы реципиента. К набору видалевских пробирок (по числу доноров) в штатив добавляли еще одну пробирку для контроля положительной реакции связывания комплемента, в которой в таких же объемах соединяли плазму одного из доноров с сывороткой для реакции Кумбса. Штатив со всеми пробирками ставили в холодильник на 18 ч для инкубации, Параллельно готовили 37-ную взвесь бараньих эритроцитов в физиологическом растворе, для чего у животного, путем венопункции забирали 5 мл крови в центрифужную пробирку. Кровь центрифугировали в течение 5 мин, образовавшуюся сверху плазму сливали, а эритроциты на дне пробирки подвергали трехкратному отмыванию физиологическим раствором. Для этого пробирку доверху наполняли физиологическим раствором, центрифугировали и раствор сверху сливали, оставляя на дне пробирки эритроциты. В заключение для получе" ния 37.-цой взвеси эритроцитов в чистую пробирку переносили 2 капли эритроцитов и 1 О капель физиологического раствора.14 26236 Ф о р м у л .а и э о б р е т е. н и я Составитель С.МельниковаТехред М.Дицык , Корректор О.Кравцова Редактор Н.Козлова Заказ 3325 Тираж 527 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб. д. 4/5 ЮЮФВЮПроизводственно-полиграфическое предприятие, г, Ужгород, ул. Проектная, 4 Далее следовал основной этап постановки РСК. Иэ холодильника извлекали штатив с набором пробирок сосмешанной плазмой реципиента и каждо 5го донора в отдельности. В каждуюиз этих пробирок добавляли по 0,5 млвзвеси эрнтроцитов барана, В контрольной пробирке содержалось по 0,5 мл, плазмы одного нэ доноров, сыворотка для 10реакции Кумбса и взвесь эритроцитовбарана, Штатив с этими пробиркамиставили в термостат для инкубацииов течение.60 мин при 37 С, после чего пробирки извлекали и оценивали 15результаты реакции связывания комплемента. Реакцию признавали положительной, если эритроциты барана оселина дно пробирок и не подверглись гемолиэу; если же произошел их гемолиэ, 20то РСК считали отрицательной,Гемолиз эритроцитов может бытьполный (лаковая кровь) или частичный. В последнем случае степень гемолиза оценивается знаками плюс (от 25одного до пяти) . При положительнойРСК кровь данного донора несовместима с кровью реципиента, при отрицательной реакции связывания комплемента - совместима с кровью реципиента,и может быть перелита ему. Следуетподчеркнуть, что данное тестирование определяет совместимость лишьпо белково-плазменным антигенным си стемам, поскольку при этом можно судить, что при смешивании плазмы донора и реципиента произошло (положительная РСК) или не произошло взаимодействие между антигенами и антителами совпадающей иммунологической 40специфичности, содержащимися в укаэанных плазмах. Если взаимодействиепроисходит, то образуются комплексыантиген-антител и на поверхности. комплексов фиксируются молекулы ком 4племента.В отсутствиесвободного комплемента в,среде гемолиэ эритроцитов барана не может произойти,.На 500 кардиохирургических операций, выполненных в условиях искусственного кровообращения (разновидность массивной гемотрансфузии) с общепринятым агглютчнационным тестированием совместимости крови доно- ров и реципиентов по эритроцитньм антигенным системам ЛВО, резус и др.; т.е. беэ применения РСК постстрансфузионные осложнения типа синдрома гомологичной крови встречались в 2,5 Х случаев. В сопоставляемой серии операций в числе 85, в которых для искусственного кровообращения в изоиммунологическом подборе совместимой донорской крови применялись те же методики агглютинационного тестирования и дополнительно для совместимости по плазменно-белковым ан". тигенным системам применялись реакции связывания комплемента, ни в одном случае пострансфузионных осложнений типа синдрома гомологичной крови не наблюдалось (ОЖ). Способ определения изоиммунологической совместимости крови донора н реципиента путем проведения агглю-, тинационных реакций по эритроцитарно-антигенным системам, о т л и - ч а ю щ и й с я тем, что, с целью предотвращения посттрансфуэионных реакций при массивных гемотрансфуэиях, дополнительно определяют совместимость по белково-плазменным анти- генным системам с применением реакции связывания комплемента в смешан" ных образцах плазм крови реципиента и донора.