Способ определения общего содержания холестерина в биологическом материале

(23) Приоригет Опубликовано 30,05.80. Бюллетень20 вв делам изобретений н аткрмтнй(53) УДК 577,161, ,2.011 ( 088. 8) Дата опубликования описания 02,06.80,питания сельскохозяйственных жги Все союзн биохимн иологиИ,тных . , .щ е) Заявите 4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЩЕГО СОДЕР:АНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ Наиболее близким к предлагаемому способу является способ, при которбм проводят омыление липидов в биологическом материале с помощью спиртово. го раствора шелочи, экстрагирование холестерина петролейным эфиром, промыва; ние экстракта дистиллированной водой, упаривание растворителяи цветную реакцию с хлорным железом и уксусной кислотой:ЪзвеСтййй способ обеспсчивает онре" деление общего содержания холестерйна в таком биоло; ическом материале, как СйворотКа-крови, плазма, но он не примейймдля тк 5 ней животных.Недостатком его является также сравнительно низкая чувствительность цветной реакции холестерина с хлорным железом. Цель изобретения - повышение чувствительности способа при определении холестерина в тканях животных.Цель достигаетсятем, что омыление лиййдов проводят 25-30%-ным спиртовым раствором КОН в течение 12-15 ч сится к биологичести к физико-химичес ления общего содеррименяемым в наих и зооветеринарени имии, в частно пособам опред холестерина,исследовательс абораторинх.о им жаннучноных ределения об а в биологич ля предотвр компонентов Известен способ опсодержания холестеринматериале, в которомния влияния липидныхинтенсивность окрашианализов об.цие липидывыделенные с помощьюрастворителей, омыляюакцию проводят с неомй 0,05%-ным раствора в уксусной кислоте. его ком Ще на ть вания и точно, предварите органически т, и цветную ыляемой фра ом хлорного е з е м указанного способа янПоемкость, так как онварительную экстракциюорганическими раствори Недостатко ляется его тр включает пред общих липидов ми О П И С А Н И Е (17 З 7 З 59ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУн 4 8 50 10 5 61 200 250 8 400 3 73 в 1 я осуществления одновременно и гидролиза биологического материала, экстрагируют неомыляемую фракцию липидов цетролейным эфиром, промывают экстракт дистиллированной водой, упаривают раст воритель и добавляют сульфофосфованиличовый реагент для осуществления цветной реакции.П р и м е р, Среднкио пробу органов и тканей животных в количестве 0,2, - 0,3 г помещают в пробирку с 2 мл 25-30%-ного раствора КОН в воде с метанолом (1:1) и проводят одновременный гидролиз биологического ма- териала в течение 12-15 ч при 55 С в термостате. Объем содержимого пробирки доводят дистиллированной водой до 5 мл, прибавляют 4 мл петролейного эфира, энергично встряхивают и после разделения фаз верхний слой отсасывают в другую пробирку. Затем дважды проводят экстрагирование 3 мл петролейного эфира. Объединенные экстракты сначала промывают 6 мл 1 н раствора КОН, а потом 2 раза 6 мл дистиллированной воды и 0,1 объема экстракта упаривают в вакуумном шкафу при 40-45 оС или на водяной бане при температуре 55 о60 С. К сухому остатку добавляют 1 мл химически чистой концентрированной серной кислоты, выдерживают 10 мин в кипящей водяной бане или 20 мин при 105 С в термостате, В охлажден 7359 4.ную пробирку приливают 2 мл фосфованилинового реактива, состоящего из 1 части 0,6%-ного водного раствора ванилинаи 4 частей ортофосфорной кислоты, энергично встряхивают, выдерживают в течение 45 мин при комнатной температуредля развития стабильного малиновогоокрашивания в течение 24 ч и колориметрируют при длине волны 560 мм в кющ вете с толщиной слоя 5 мм против слепой пробы с 1 мл концентрированнойсерной кислоты и 2 мл фосфованилинового реактива.Положительный эффект предлагаемогоц способа по сравнению с известными состоит в том, что достигается стабильноецветное окрашивание в течение 24 ч,высокая чувствительность и, кроме того,повышается производительность на 1 0 20%, Наряду с этим, исключив предварительное экстрагирование общих липидов,на 1 анализ экономится 25 мл смесидиатилового эфира и этанола в объемномсоотношении 3:1 или 50 мл смеси хлоц2 роформа и метанола в объемном соотношении 2;1. Кроме этого все анализыможно проводить в мерных пробирках безиспользования мерных колб и целительныхворонок,30 Сравнение предлагаемого способа сизвестным способом определения общегосодержания хопестерина приведено в таблице.Формула изобретенияСпособ определения общего содержания колестерина в биологическом материале, включающий омыление липидов спиртовым раствором щелочи, экстрагирование неомыляемой фракции липидов петролейным эфиром, промывание экстракта дистиллированной водой, упаривание растворителя и добавление реактива для осуществления цветной реакции,6о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа при определении холестерина в тканяхживотных, омйление липидов проводят25-307 о-ным спиртовым раствором КОНв течение 12-15 ч для осуществленияодновременно и гидролиза биопогическогоматериала, причем в качестве реактивадпя" цветной реакции используют сульфо 1 О фосфованилиновый реагент.Составитель Ж. ЕременкоРедактор Л. Павлова Техред Н, Бабурка Корректор ,С ШекмарЗаказ 2591/4 Тираж 1018 ПодписноеЦНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж 5, Раушская"набд, 4/5СФилиал ППЛ Патент"у г, Лкгород, уйв Проектная, 4