Способ получения регулятора автолиза микроорганизмов

СОЮЗ СОВЕТСНИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИ СПУБЛИНс 12 и 1/О ТЕЫИЯ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИ ОПИСАНИЕ ИЗОБ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(561 1. С 1 ече 1 апй Я.Р., ИсКеп А,Ю Папео-Мооге Ь. ЯЬосйпап У.Р, 1 пММ; Моп.оГ а 11 ацСо 1 уяя п я 1 гер 1 ососсая Гаеса 11 я Ьу 1 ро 1 е 1 сЬос асЫ апй 1 фЫа.- "Т.Вас 1 егИ 1976,126, И 1, р, 192.2. Авторское свидетельство СССР11 759526, кл. С 07 6 7/02, 1978.(54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕГУЛЯТОРААВТОЛИЗА.МИКРООРГАНИЗМОВ предусматривающий их лизис, отделение осадкаклеток и обработку лизата органическими растворителями, о т л ич а ю щ и,й с я тем, что, с цельюповышения выхода целевого продуктаудешевления способа, а также расширения спектра действия регулятора,из микроорганизмов используют избыточные дрожжи пивоваренного производства ЯассЬагошусея сегеч 1 яае 11 лиэис осуществляют путем автолиэадрожжей при 28-32 С в течение 4-6,ч,после обработки лизата органическимирастворителями образовавшуюся твер-,дую фазу удаляют, а из жидкой фазывыделяют регулятбр автолиза.10257 Изобретение относится к микробиологической и пищевой промышленности и ветиринарии, в частности кспособам получения регулятора автолиза микроорганизмов. 5Известен способ получения регулятора автолиэа микроорганизмов путемэкстракции из бактериальных клетоклипотейхоевых кислот фенолом, хлор-,формом и Фракционирования их на сефарозе и биогеле (.1( .Недостатками этого способа являют.ся сложность и высокая стоимостьрегулятора.Наиболее близким к предлагаемомупо технической сущности и достигаемому эффекту является способ получения регулятора автолиза микроорганизмов, предусматривающий их лизис,отделение осадка клеток и обработкулизата органическими растворителями,Регулятор выделяют из ферментолизата биомассы бактерий путем экстракции 5- 10-ной трихлоруксусной (кислотой с последующим осаждениемиз экстракта 5-6 объемами органичес:ких растворителей. Ферментативномулизису подвергают суспензии биомассыс концентрацией сухих веществ 5-203.Для лизиса используют на первой ста 30дии литической Фермент, на второй -протеолитический, например яичнййлизоцим и трипсин в концентрации0,1 мг/мл,Для различных видов бактерий родаВас 11 ця для метаноокисляющих бакте 35рий У 170 и Е. со 11 К 12 выход регулятора составляет 5- 10 к сухому весубиомассы 2( .Недостатками известного способач ч 40являются ограниченныи спектр деиствиярегулятора автолиза, низкий выходи высокая себестоимость. целевого продукта, а также необходимость использования кислотоупорного оборудованияна стадиях экстракции регулятора45трихлоруксусной кислотой, отделенияэкстракта от биомассы и осаждения регулятора из экстракта органическимирастворителями.50Цель изобретения - повышение выхода. целевого продукта, удешевление способа, а также расширение спек-тра действия регулятора.Поставленная цель достигаетсятем, что согласно способу получениярегулятора автолиэа микроорганизмов, предусматривающему их лизис,242отделение осадка клеток и обработкулизата органическими растворителями,иэ микроорганизмов используют избыточные дрожжи пивоваренного производства ЯассЬагощусев сегеч 1 вае , лизисосуществляют путем автолиэа дрожжейпри 28-32 С в течение 4-6 ч, послеобработки лиэата органическими растворителями образовавшуюся твердую фазу удаляют, а из жидкой фазы.выделяют регулятор автолиза.Способ получения регулятора автолиза микроорганизмов заключается вследующем,Избыточные дрожжи пивоваренногопроизводства со стандартным для данного продукта содержанием сухих веществ7-9/) подвергают автолизупри 28-32 С в течение 4-6 ч припостоянном перемешивании, По окончании процесса автолиза жидкую фазу автолиза отделяют центрифугированием,осадок отбрасывают, а к центрифугатуприливают при перемешивании 4,5-5,5объемов органического растворителяацетона, изопропанола, этанола),Выпавший осадок отделяют и отбрасывают, а надосадочную жидкость, содержащую регулятор автолиза, упариваютили обрабатывают иным способом сцелью удаления органического раствори-теля. Полученный после удаления растворителя водный раствор регулятораавтолиза используют в жидком видеили высушивают, В первом случае предварительно. определяют содержаниесухих веществ в растворе. и дозируютпрепарат в пересчете на сухое вещество.Получаемый регулятор может бытьиспользован как для повышения, так идля снижения интенсивности автолизаклеток бактерий, дрожжей и грибов..Направленность и сила воздействиярегулятора зависят от субстрата (автолизирующегося микроорганизма),Результаты влияния регуляторана интенсивность автолиза микроорганизмов приведены в таблице,П р и м е р 1 ,10 л избыточных, дрожжей с содержанием сухих веществ 74 подвергают автолизу в течениеч при 32 С при постоянном перемешивании, после чего жидкую фазу автолизата отделяют центрифугированием, осадок отбрасывают, Объем центрифугата 8,2 л. Центрифугат охлаждаютодо 5 С и при перемешивании приливают1025724 ф 100 30 Вариант Микроорганизмы без регулятора( контроль) с регулятором 7,8 Баса.р 1 ап 1 агцп 8 РАЗЕ.со 15. М 17 6,9 5,0 45,1 л холодного иэопропанола. Выпавший осадок отделяют центрифугированием и отбрасывают, а из фугата удаляют изопропанол отгонкой на водяной бане. Полученный после отгонки иэопропанола водный раствор регулятора автолиза лиофилизируют. Выход препарата 151,2 г или 21,6/ к весу сухой биомассы избыточных дрожжей.Для определения действия регуля тора на автолиз микроорганизмов приготавливают водные суспензии их биомассы со стандартной оптической плотностью 0,95-1,05 при измерении на ФЭКМ и при длине волны 540 нм в 15 кювете толщиной 5 мм. Затем состав.-, ляют реакционные смеси из равных объемов стандартной суспенэии и водного раствора регулятора концентрации 2 мг/мл ( конечная концентрация 20 регулятора в реакционной смеси 1 мг/мл). В контрольном опыте к стан. дартной суспензии приливают равный объем воды, Измеряют исходную оптическую плотность реакционной смеси 25 (3 ) и оптическую плотность после инкубации в течение 1 ц при 37 О 3,). Вычисляют интенсивность автолиза 3 1=оПолученные результаты приведены в таблице, варианты 1 - 9,Из данных таблицы следует, что добавление регулятора в вариантах 35 1-3 приводит к полному торможению автолиза, в вариантах 4 - 6 интенсивность автолиза снижается в 1,8- 10,4 раза, а в вариантах 7-9 повышается в 2,9-3,1 раза.П риме р 2 , 2 л избыточных пивных дрожжей с содержанием сухих веществ 93 подвергают автолизу в течение 6 ч при 28 С и постоянном .перемешивании, затем жидкую Фазу ав Аэр, Гое 1 Ыив ГП 1020 толизата отделяют центрифугированиеми охлаждали до 3"С. Объем центрифугата 1,56 л. К ценфрифугату приливаютпри перемешивании 7 л холодного аце,тона, Выпавший осадок отделяют центрифугированием и отбрасывают, а иэцентрифугата удаляют ацетон отгонкой.на водяной бане. Полученный после отгонки ацетона водный раствор регулятора автолиэа содержит 3,644 сухихвеществ, объем раствора 1 л. Выходпрепарата 36,4 г или 20,23 к весусухой биомассы избыточных дрожжей.Действие полученного жидкого препарата на автолиэ микроорганизмовопределяют так же, как в примерепредварительно приготовив раствор регулятора с концентрацией сухих веществ 2 мг/мл.Полученные результаты приведеныв таблице, варианты 10-14,Регулятор вызывает полное подавление автолиза в вариантах 10 и 11,в вариантах 12-14 интенсивность автолиза повышается в 1,46- 12,3 раза,Таким образом, предлагаемый способ получения регулятора автолиза по сравнению с известным позволяет получать препарат, с помощью которого можно как повышать, так и понижать интенсивность автолиза в зависимоати от таксономической принадлеж ности микроорганизма. Кроме того, регулятор автолиза может быть использован для воздействия не только на бактерии, но также на дрожжи и грибы, что расширяет сферу его применения. Предлагаемый способ обеспечивает выход регулятора около 201, цто значительно превышает выход по известному способу5- 10 Ф); Себестоимость препарата понижается в 3,7-7,4 раза. Интенсивность автолиза, Ф1025724 Продолжение таблицы ее ее ее е ЕеЕ Интенсивность анализа,Микроорганизмы Вариант 27)1 2,6 Ьас 1. Геипеп 1 90 ТС 4 12,2 Е.со 1 д МВЕ 600 93 17,С ВЬойо 1 оги 1 а ацгапС 1 аса Метаноокисляющие бактерии У 170 29,0 ЯассЬагощусев сегеч 1 я 1 ае 12 4,8 2,4 6 9 10 0 0 7,0 12 Э. яиЪГ 11 я В 2Заказ 4497/20 Тираж 523 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам. изобретений и открытий113035. Москва, Ж, Раушская наб., д.4 ф/5 е Филиал йПП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, ЯассЬагощусев ц.пхЕ. со 1 М 17Аяр. 1 оеИйивГП 1020 без регулятора с регулятором контроль