Способ консервации иммобилизованных ферментов

ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Союз СоветскикСоциалистическихРеслублик 1943280(23) ПриоритетОпубликовано 15.07,82, Бюллетень НВ 26 511 М. Кп.эС 12 Я. 11/00 А 61 К 37/48 Государственный комитет СССР ио делам изобретений и открытий. 07 (088. 8) Дата опубликования описания 15.07,82 ева к е) Заявитель Шемяк химии им 4) СПОСОБ КОНСЕРВАЦИФЕРМЕ ММОБИЛИЭОВАН м Наиболее близким к предлагаеявляется способ консервации югбилизованных ферментов путем лфильного высушивания суспенэиибилиэованного фермента, в частти пепсина, в воде или буФере,торый имеет тот недостаток, чтзависимости от использованногоиммобилизации носителя, при вышивании теряется от 10 до 90тивности 23. о к 3 в для10 Цель изобрететерь активностиванин.Цель достигается тем, что сспособу консервации иммобилизиных ферментов путем лиофольногсушивания их суспензии в воде илибуфере, у суспензии добавляют инертный растворювй наполнитель присоотношении фермент:наполиитель1:(1-20) .В качестве инертного наполнителя используют неорганические соли,например поваренную соль.В качестве инертного написпользуют аминокислоты, наглицин,огласи оровано вы 2 ммобилироко при- препараое хране- ается олнителяпример нститут биоорганичес Изобретение относится к способам консервации иммобилизованных ферментов, позволяющим избежать существенной потери активности при длительном хранении,н транспортировкепромыленно изготовленных препара-.тов иммобилизованных ферментов.Способ консервации может найти широкое применение при изготовлениипрепаратов иммобилизованных ферментов для использования их в пищевой, химической и микробиологической промышленности.Известно, что для длительного хранения белков и ферментов используют лиофильное высушивание, которое в большинстве случаев обеспечивает стопроцентное сохранение активности и нативностн препаратов. В случае потерь активности при лиофилизации в раствор фермента перед высушиванием добавляют различные инертные наполнители, растворимые вводе 113Лиофильное высушивание и зованных Ферментов также ши меняется для получения Форм тов, выдерживающих длительн ние, однако часто сопровожд частичной потерей активности. ния - уменьшение по- фермента при высуши 943280Перед последующим использованием фермента наполнитель может быть легко удален отмыванием буфером или центрифугированием.П р и м е р 1. 20 мг пепсина свиньи, иммобилизованного на аэросиле, суспендируют в 1 мл воды, содержащей инертный растворимый наполнитель в весовом соотношении к препарату иммобилизованного Фермента от 1:1 до 20:1. Смесь.лиофильно высушивают. Перед использованием препарат суспендируют в 0,01 М ацетатном буфере, рН 4,5 и удаляют наполнитель путем отмывания буфером на колонке или с помощью центрифугирования, Активность препаратов, определенная по гемоглобину в качестве субстрата, приведена ниже в виде процентного отношения активности лиофильно высушенных препаратов к активности исходного препарата до лиофилизации:Без наполнителя 9С глицином в соотношении 10:1 1620:1 25С глюкозой в соотношении 1:110:1С сахарозой в соотношении 1:1 4420:1 63С поливинилпирролидоном(МВ 25000) 1:110:1С декстраном .(МВ 500000)1:1 25 50 53 67 75 В качестве инертного наполнителяиспользуют углеводы, например глюкозу, сахарову.В качестве инертного наполнителяиспользуют водорастворимые полисахариды, например декстран.В качестве инертноГо наполнителяиспользуют полиспирты, например полиэтиленглнколь.В качестве инертного наполнителяиспользуют водорастворимые синтетические полимеры, например поливинилпирролидон.Передвысушиванием к суспензии иммобилизованного ферментав воде или буфере добавляютинертный растворимый в воде наполнитель, каторый предохраняетпрепарат иммобилизованного фермента от потери активности прилиофильном высушивании и легкоможет быть удален перед использованием препарата иммобилизованного фермента путем отмывания водой.Препараты иммобилизованных ферментов сохраняют активность, превышающую в несколько раз (в ряде случаев в 8 раз) активность препаратов,подвергнутых лиофильному высушиванию без наполнителя, 93 100 40 формула изобретения 1. Способ консервации иммобилизованных ферментов путем лиофильного45 высушивания их суспензии в воде илибуфере, о т л и ч а ю щ и й с я тем,что, с целью уменьшения потери активности фермента при высушивании, ксуспензии добавляют инертный растворимый наполнитель при соотношении фермент:наполнитель 1:(1-20).2. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве инертного наполнителя используют неорганические соли, например повареннуюсоль,3, Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве инертного наполнителя используют аминокислоты, например глицин.4. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве инертного наполнителя используют углеводы, например глюкозу, сахарозу.5. Способ по п.1, о т л и ч а ю-65 щ и й с я тем, что в качестве инерС полиэтиленгликолем(МВ 3000) 11 78С МаСР в соотношении 1:1 2110:1 31201 35 5 П р и м,е р 2. 20 мг куриногопепскна, иьиобилизованного на диатомите, консервируют аналогично иммобилизованному пепсину свиньи,Активность по гемоглобину лио- О фильно высушенных препаратов, 3:Без напблнителя. 5 ЭС глицином в соотношении 1:1 6010:1 67П р и м е р 3. 20 мгпротосубтилина, иммобилизованного на сферонеАгА 1000, суспендируют в 1 мл 0,01 Мфосфатного буфера, рН 8,0 и консервируют аналогично консервации иммобилизованного пепсина. Активностьлиофильно высушенных препаратов погемоглобину, ;Без наполнителя 80С глюкозой в соотношении 1:1С полиэтиленгликолем(МВ 3000) 86П р и м е р 4, 20 мг протосубтилина, иммобилизованного на энзакриле АА,консервируют аналогично консервациипротосубтилина, иммобилизованногона сфероне. Активность лиофильно высушенных препаратов по гемоглобину, %:Без наполнителя 74 35 С глюкозой в соотношении 1:1С полиэтиленгликолемСоставитель О.СкородумоваРедактор Н.Киштулинец Техред Ж. Кастелевич Корректор И.МУска Заказ 5037/34 Тираж 505 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5В ефилиал ППП Патентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 тного наполнителя используют водорастворивые полисахариды, например декстран6. Способ по п.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве инертного наполнителя используют поли спирты, например полиэтиленгликоль.7, Способ по н.1, о т л и ч а ющ и й с я тем, что в качестве инертного наполнителя используют водорастворимые синтетические полимеры, 10 например поливинилпирролидон,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе