Способ регенерации носителей для иммобилизации ферментов

, 936987верхоСтл которого покрыта пленкой,1 имеющеи в цепи полимера активный бром.0,048 г цианистого калия растворяют в 20 мл этанола (0,3 раствор) и добавляют к вышеупомянутому продукту. Полученный таким образом носитель промывают этанолом до исчезновения ионов цианида в промывном растворе, Получают носитель, активи рованный цианидом калия.Количество активных групп на носителе определяют путем перемешивания носителя в растворе метиламина в течение 60 мин и обратного титрования непрореагирующих аминогрупп 0,1 н.раствором соляной кислоты, Сос держание активных групп в регенерированном носителе 35-40 мк-экв/г.20К 1 г регенерированного носителя добавляют 2,5 мл боратного буфера с оН 8,0, содержащего 60 мг трипсина и 3 мг ингибитора трипсина,Реакцию иммобилизации проводят при ком 25натной температуре в течение 20 ч.После этого препарат промывают последовательно боратным буфером с рН8,0, 1 м раствором хлористого нат.рия и боратным буферомФерментативную активность препа 30рата определяют на 23-ном раствореказеина с рН 8,0 при 30 ПС,Активность препарата трипсина,полученного на регенерированном носителе равняется 9,0 Е/г, выход активности 11,03,Операционную стабильность препарата трипсина оценивают по остаточнойактивности при проведении промывкипрепарата 2 ф ным раствором казеина 40с рН 8,0 в колонке в течение 20 чсо скоростью протекания казеина0,2 мл/мин при 20 С. После такой промывки сохраняется 813 от исходнойактивности. 45Активность препарата трипсина, полученного связыванием фермента наносителе, изготовленного на основесилохрома покрытого эпоксидной смолой,отвержденного полиэтиленполиаминоми активированного бромцианом (первичный ферментный препарат на данном носителе), равняется 12,0 Е/г, выходактивности 14,63 и после промывки2 ь-ным раствором казеина сохраняется 5569,0 от исходной активности.П р и м е р 2. 5 г инактивированного ферментного препарата на фоснове сипихрома, покрытого эпоксидной смолой, сначала кипятят в 18 мл0,63-ного раствора брома в четыреххлористом углероде в течение 40 мин,как в примере 1, а затем обрабатывают 0,4-ным раствором цианистогокалия в этиловом спирте, как в примере 1,Содержание активных групп в регенерированном носителе 47-50 мк-экв/г.10 г регенерированного носителясмачивают 25 мл раствора панкреатина(60 мг/мл) в буфере с рН 8,0. Реакцию иммобилизации проводят при20 С в течение 20 ч. После инкубациипрепарат промывают последовательноборатным буфером с рН 8,0, 1 м раствором хлористого натрия и боратнымбуфером.Ферментативную активность препарата определяют на 2-ном раствореказеина с рН 8,0 при 30 С, Активность препарата панкреатина равняется41,8 Е/г, выход активности 1 й,После промывки 2 Ф-ным растворомказеина сохраняется 49, 74 от исходной активности.После инактивации ферментного препарата 5 г материала повторно обра-, батывают бромом и цианидом калия.Иммобилизацию панкреатина проводят вышеописанным способом.Активность препарата панкреатина равняется 37,2 Е/г, выход активности 17,2. После промывки 2-ным раствором казеина сохранялось 34,53 от исходной акйвности.Активность препарата панкреатина, полученного связыванием фермента на носителе, изготовленного на основе силохрома, покрытого эпоксидной смолой, отвержденной полиэтиленполиамином и активированного бромцианом (первичный ферментный препарат на дан ном носителе), равняется 37,6 Е/г, выход активности 17,73 и после промывки 23-ным раствором казеина сохранялось 45,2 Ф от исходной активности,Таким образом, предлагаемый способ позволяет регенерировать различные активные группы на органоминеральных носителях с инактивированным ферментным препаратом, что обеспечивает получение высокоактивных и стабильных иммобилизованных ферментных препаратов на основе органоминеральных носителей.Составитель Н. СтрогановаРедактор Н. Бобкова Техред И. Рейвес Корректор 6. Макаренко Заказ 4308/8 Тираж 583 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д 4/5 е в ш ае Шфилиал ППП "Патент", г. Ужгород; ул. Проектная, 4 936987 бных препаратов на основе органоминеральных носителей, последние снаСпособ регенерации носителей цала кипятят в растворе брома в чедля иммобилизации ферментов путем тыреххлористом углероде, а затем об" обработки носителей раствором реа-рабатывают раствором цианистого гента, о т л и ч а ю щ и й с я калия в этиловом спирте.тем, что, с целью увеличения коли- Источники информации,чества активных групп на носйтеле принятые во внимание г ри экспертизе для получения высокоактивных и 1.Патент Великобритании И 1365886,стабильных иммобилизованных фермент о кл. С 07 6 7/02, 1974 (прототип).