Способ получения полипептидов

СОЮЗ СОВЕТСНИХОО 5 НОСВЧекнииРЕСПУБЛИН 5 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ ОБРЕ ОПИСАНИЕК АВТОРСХОМУ СВИД ЬСТ ПОЛИПЕП измельа, цен(21) 2942205/28-13(56) 1. Ноорег Т.А. ерцгдИсайдоп апд ргоребэппе ЕЬуиовз.п,Апп Ю.Л1975, 249, 125-144.(54)(57) спосов получТИДОВ путем гомогенизченной ткани железы т 24.а 1. "ТЬегй 1 ез ог Ьо. Асад Зе 1 459 А трифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощения способа и выделения полипептидов основной природы, ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии. хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетономИзобретение относится к химикофармацевтической промышленностии касается получения физиологически активных препаратов для леченияиммунодефицитных состояний. 5Известен способ получения полипептидов путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса,центрифугирования, удаления осад- ка, обработки надосадочной жидкое Оти ацетоном с последующей Фильтрацией Ц .Однако указанный способ является трудоемким, имеет сложную многостадийную технологию производства 15и не позволяет получать ряд биологически активных веществ, содержащихся в тимусе.Цель изобретения - упрощение, способа и выделение полипептидов 20основной природы,Цель достигается тем, что приосуществлении способа получения полипептидов путем гомогенизации избмельченной ткани железы тимуса, цен. 75трифугирования, удаления осадка,обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей Фильтрацией,ткань тимуеа после гомогенизацииэкстрагируют разбавленной уксусной З 0кислотой в присутствии хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстрактцентрифугируют и дополнительно об, рабатывают ацетоном.Способ поясняется следующим примером.П р и м е р 1. Исходное количество тимуса 500 г, Ткань тимусаочищают от сосудов, сгустков крови,жировой клетчатки, промывают водой, 40затем ацетоном и помещают в соотношеонии 1:4 при 4-10 С. Через 24 ч ацетон сливают а ткань тимуса взвешивают и гомогенизируют. Гомогенатпомещают в ЗХ-ный раствор уксусной 45кислоты из расчета 1 часть гомогената на 6 частей раствора кислоты(рН=3,5-4,0). К раствору кислоты добавляют ЕЬС 1 из расчета 1 г 2 пС 1на 1 л ЗХ раствора кислоты. Экстракцйю проводят в течение 72 ч. По окончании экетракции субстрат центрифугируют при ЗООО об/мин в течение20 мин. К супернатанту добавляютацетон в соотношении 1,5 (1 часть 55супернатанта и 5 частей ацетона).Осадок промывают ацетоном и высушивают на Фильтре. Получают 5,0-5,5 г белого порошка, содержащего физиоло гически активные вещества тимуса. Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученный порошок растворяют в 550 мл 5 Х уксусной кислоты, Раствор препарата стерилизуют Фильтрацией и разливают в стерильные флаконы по 1 мл, затем лиофилиэируют и закрывают стерильными резиновыми пробками. В результате в одном флаконе содержится 10 мг веществ, выделяемых из тимуса.П р и м е р 2. Исходное количество тимуса 10 кг. Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови, жировой ткани, промывают водой, затем ацетоном и помещают в ацетон вссоотношении 1:4 при 4-10 С, Перед экстракцией ацетон сливают, а ткань тимуса взвешивают и гомогениэируют, Гомогенат ткани тимуса помещают в ЗХ-ный раствор уксусной кислоты из расчета 1 часть гомогената на 6 частей раствора кислоты (рН=3,5-4,0), К раствору кислоты добавляют 2 пС 1 из расчета 1 г 2 пС 1 на 1 л ЗХ-ного раствора кислоты. Экстракцию проводят в течение 72 ч в емкости с ме - шалкой для периодического перемешивания субстрата. По окончании экстрак-. ции субстрат центрифугируют при 3000 об /мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1:5. Осадок промывают ацетоном и высушивают на фильтре. Получают 100-110 г белого порошка, содержащего физиологически активные вещества тимуса. Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученный порошок растворяют в 11 Х и 5 Х-ной уксусной кислоте. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в стерильные флаконы по 1 мл, затем лиофнлизируют и закрывают стерильными резиновыми пробками. Один флакон препарата содержит 10 мг веществ, выделенных из тимуса. Полученный тималин представляет собой комплекс веществ (нуклеопептидов и полипептидов) со следующими характеристиками. При изучении в эксперименте установлена высокая биологическая активность препарата (стимуляция клеточно" го иммунитета, процессов регенерации и гомопоэза). В терапевтических дозах препарат не обладает токсичес934589 Состав тималина Максимум Молекуоглоще- лярная ия в уф- масса пектре (500) (НМ) Иэозлектрическаяточка(0,2 ед.рН) Компонент Содержание компонентов, вес. Х пределсреднеколебания 660 клеопептиды 75 6 80 слые полипеп 15 10-20 0 5000 2 т Основные полипептиды 5 0 5000 3 е 5 Редактор Л.Письман ТехредМ,Гергель КорректорАфОбручар аказ 4497/3 Тираж 722 . Подписно ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП " ент г. Ужг ул. Нр ектная,кими свойствами и не вызывает аллер" гических реакций.Результаты экспериментального и клинического изучения показали, что препарат обладает выраженной биологической активностью, которая выражается в усилении иммунологической реактивности (увеличение количества лимфоцитов, Т-лимфоцитов, антителообразующих клеток в. селезенке в 4ответ на введение тимусзависнмого антигена) и сможет найти широкое применение в медицинской практике для лечения и предупреждения ряда заболеваний человекаСпособ получения тималина позволяет выделять нуклеопротеиды и пептиды основной природы, отличается простотой, содержит меньшее количест О во операций (6 стадий).