Способ разделения смеси ксантозина и гуанозина

ОП ИСАН ИЕ ИЗОБР ЕТЕ Н И Я Н АВОРСКОМУ СВИДЕ 7 ЕЛЪСТВУ(51) 16 Кл з С 07 Н 19/16 Государственный комитет СССР ао делам изобретений и открытий(45) Дата опубликования описания 07.11.81 И, Я, Штернберга и У. Я, Микстайс.(54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ СМЕСИ КСАНТОЗИНА И ГУАНОЗИНАИзобретение относится к способу разделения смеси нуклеозидов, а именно ксанчозина и гуанозина, которые, используют в биохимических исследованиях. Ксантозин получают дезаминпрованием гуанозина и прп,неполном дезаминировании необходимо разделение смеси ксантозина и гуанозина.Известен способ селективного разделения смеси ксантозина и гуанозина с применением ионообменной хроматографии 1,11.Такой способ заключается в следующем. Смесь ксантозина и гуанозина в,водном растворе после установления ,рН 6,0 - 8,5 пропускают через сильно основной анионит в форме соли, Колонку промывают водой и получают гуанозин с содержанием основного вещества 96,7% (выход,гуанозина 90,88%). Затем ионообменный материал элюируют 1 н. соляной кислотой и получают 94 г ксантозина с содержанием основного вещества 95% (выход ксантозина 89,3%).Известный способ обеспечивает разделение ксантозина и гуанозвна с помощью сорбции ксантозина на сильно основном аосионите, но он трудоемок, так как требуются приготовление, регенерация,ионообменного материала и упаривание элюато 1 в.Недостатками этого способа также являются сраанительно невысокий выход (выход,ксантозина 89,3%, гуанозина 90,88%)и сравнителыно низкая степень чистоты целевых продуктов (ксантозина 95%, гуанозвна 96,7%).Целью изобретения является повьвшениевыхода и степенями чистоты целевых продуктов и упрощение процесса, разделения компонентов,Цель достигается тем, что при осущест 1 О влении способа разделения смеси ксантозина и,гуанозинанаходящихся в водянойсреде, исходную смесь подкисляют до рН0,6 - 1,0 и перемешивают в течение 30 -35 мин при 15 - 25 С до полного растворе 15 ния гуанозина, затем отделяют ксантозин,находящийся в осадке, и доведением рН до3,0 - 6,0 осаждают дигидрат гуанозина, который извеспным опособом превращают вгуанозин.20 Гуанозин и ксантозип в холодной водепрактически не растворяются, а в процессе кристаллизации, когда растворение проводят при повышенной температуре, осаждаются совместно. Разделение смеси дости 25 гается использованием отличающейся растворимости различных форм нуклеозидов.Отличающиеся значения р 1(, для гуанозина(1,6 - 1,8) и кса 1 нтозпна ( - О) позволяютустановить рН среды 0,6 - 1,0, при котором30 весь гуанозин практически будет образовы 87876910 15 20 о Зо 35 40 45 50 55 60 65 вать протонированную, более растворимую форму и даже ори комнатной температуре может перейти в раствор. Ксантозин в таких условиях остается в осадке и может быть отделен фильтрованием от растворившегося,гуанозина, После отделения ксантозина к раствору добавляют раствор щелочи и устанавливают рН в пределе, при котором гуанозин образует нейтральную мало растворимую в воде форму, а именно рН 3,0 - 6,0, При таком значении рН количественно отделяют гуанозин от,маточника. Оба нуклеозида предлагаемым способом полу" чают хроматографичесии чмстыми без дополни тельной перекри "таллиза ции.Разделение проводят в,две стадии: 1 стадия - выделение хроматографичвски чистого ксантозина; П стадия - выделение хроматографически чистого гуанозина.Фракционированное осаждение исантозина и,гуанозина обеспечивает .высокий выход и чистоту целевых продуктов.П р и м е р 1. 2 г ксантозина и 0,44 г гуанозина суспендируют,в 40 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 0,8 1 н. соляной,кислотой при 20 С,и перемешивают в течение 30 мин, Отфильтровывают осадок, промывают соляной кислотой при рН 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Промывные растзоры не присоединяют к фильтрату. Получают 1,9 г (94%) хроматографически чистого ксантозина, содержание основного вещества 99%1 н. раствором гидроокиси натрия устанавливают рН фильтрата 6,0 и осаждают дигидрат гуанозина. Получают 0,45 г последнего. Дигидрат гуанозина превращают .з гуанозин нагреванием в течение 3 ч при 60 С. Получают 0,4 г гуанозина, выхо.с 90%. Содержание основного вещества 100%.Прим е р 2. 1,5,г ксантоэина и 0,53 г гуанозина суспендируют в 50 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 1,0 1 н. соляной кислотой при 15 С и перемешивают,в течение 30 мии. Отфильтровывают ысантозин, промы 1 вают соляной кислотой при рН 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Промывные воды к фильтрату не присоединяют. Получают 1,44 г (95%) хромаготрафически чистого ксантозина, Содержание основного вещества 99%.1 н. раствором,гидроокиси натрия устанавливают рН фильтрата 3,0 и осаждают дигидрат гуанозина, Получают 0,55,г последнего. Дигидрат гуанозина превращают в гуанозин нагреванием в течение 3 ч при 60 С. Получают 0,48 г (91%) хроматографически чистого гуанозина, Содержание основного вещества 100%.П р и м е р 3. 4,0 г исантозина и 1,0 г гуанозина суспендируют в 100 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 0,6 1 н. соляной кислотой при 28 С и леремешивают в течение 30 иин. Отфильтровывают ксантозин, промывают на фильтре разбавленной соляной кислотой при рН 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Промывные растворы не присоединяют к фильтрагу. Получают 3,80,г (96%) хроматографически чистого ксантозина. Содержание основного вещества 99%.1 н. раствором гидроокиси натрия устанавливают рН фидырата 4,5 и осаждают дигидрат гуанозина. Осадок промывают на фильтре водой и этиловым спиртом. Получают 1,03 г хроматографически чистого дигидрата гуанозина. Последний, превращают в гуанозин нагреванием в течение 3 ч при 60" С. Получают 0,9 г хроматографически чистого гуапозина. Выход 91%. Содержа,ние основного вещества 1009%.П рим ер 4, Смесь 1 г ксантозина и 3 г гуапозина суспендируют з 150 мл инсгн - лированной воды, устанавливают рН 1,0 ;при 20 С и перемешивают в течение 30 мин. Затем фильтруют, промывают разбавленной соляной кислотой (рН 1,0), водой, этиловым спиртом. Промывные растворы к фильтрату не присоединяют, Получают 0,79 г (78%) хроматографически чистого ксантозина. Содержание основного вещества 99%.Устанавливают рН фильтрата 5,0 и отфильтровывают гуанозин, Получают 3,09 г (91% ) хроматографически чистого дигидрата гуа нозика. Содержание основного вещества 100%.П р и м е р 5, Смесь 2,0 г ксантозина и 1,0 г гуанозина суспендируют в 100 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 0,6 при 20 С и яеремешивают в течение 35 мин, затем фильтруют, осадок,промывают разбавленной соляной кислотой (р Н 1,0), водой, этиловым спиртом. Промывные растворы к фильтрату не присоединяют. Получают 1,86 г (94%) хромагографически чистого,ксантозина, Содержание основного вещесгва 99%.Устанавливают рН фильтрата 5,0 и отделяют гуанозвн, Получают 1,02 г (90,5%) хроматографически чистого дигидрата гуанозина, Содержание основного вещества100%. П р,и м е р 6. Смесь 10 г ксантозина и 1 г гуанозина суспендируют в 100 мл дистиллированной воды, устанавливают разбавленной соляной кислотой рН 10 при 18 С и перемешивают в течение 30 мин затем фильтруют, промывают разбавленной солянкой кислотой, водой, этиловым спиртом. Промывные воды к фильтрату,не добавляют, Получают 9,6 г (95%) хроматографически чистого ксантозина. Содержание основного вещества 99%.Устанавливают рН фильтрата 3,0 и отделяют гуанозин, Получают 1,01 г (90%) хроматографически частого дигидрата гуанозина. Содержание оснсеного вещества 100%.878769 Формула изобретения Составитель Г. КонноваТехред А. Камышникова Корректор И. Осиновская Редактор 3. Бородкина Заказ 1752/1291 Изд.639 Тираж 419 ПодписноеНПО Поиск Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Тип. Харьк. фил. пред, Патент 1. Способ разделения смеси ксантозина и гуанозина, находящихся в водной среде, отл и ч а ющи йся тем, что, с целью повышения выхода и качества целевого продукта,и упрощения процесса, исходную смесь подкисляют до рН 0,6 - 1,0 и перемешивают в течение 30 - 35 мин при 15 - 25 С,затем отделяют ксантозин, находящийся в осадке, и доведением рН раствора до 3,0 - 6,0 осаждают дигидрат гуанозина, который лревращают в гуанозин.5 Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:1. Патент Японии73/21960, кл. 16 Е 33, опублик. 1973 (прототип),