Способ определения эпидемичности вируса гриппа

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСНИРЕСПУБЛИН А ЕНИ ТВ емиревадователь эпидеяа,ь оляков Е.Мские пред- Журналии н ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССРПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙОПИСАНИЕ ИЗО ОРСКОМУ СВИДЕТ(71) Одесский научиский институт вирумиологии им. И.И.Ме(54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭПИДЕМИЧНОСТИ ВИРУСА ГРИППА путем исследования антигенной гетерогенностипопуляций штаммов вируса, выделеннот больных, о т л и ч а ю щ и й стем, что, с целью упрощения способисследуют антигенную гетерогенностштаммов в пределах дрейфа и шифтаи по наличию гетерогенности штаммопо антигенному составу в пределахдрейфа и шифта определяют эпидемичность вируса гриппа, а по наличиюгетерогенности штаммов только впределах дрейфа или дополнительносодержащие единичные варианты с шитовыми изменениями определяют отсутствие эпидемнчности.для элюции при комнатной температуре. Через 30-60 мин проводят центрифугирование в указанном режиме иотсасывание пастеровской пипеткойэлюата. К осадку эритроцитов добав ляют новую порцию охлажденного физиологического раствора. Последующие элюаты снимают с тем же интервалом до полного истощения гемагглю.тинина. Для предотвращения пророс та в используемый физиологическийраствор и в пробирки для элюатовдобавляют смесь антибиотиков (пенициллин со стрептомицином из расчета 100-200 ЕД/мл) . Затем проводятпроверку элюатов и установление антигенной структуры популяции. Внадосадочной и промывной жидкостях,а также в полученных элюатах определяют геммагглютинирующую активность. Затем надосадочную и промывную жидкости, полученные элюаты, атакже осадок эритроцитов послеснятия последнего элюата, разводятс коэффициентом 10 до предельныхразведений, пассируют на куриныхэмбрионах и инкубируют при 35,5 Св течение 48-72 ч. Эмбрионы вскрывают, собирают аллантоионные жидкости и материал, отдельно от каждогоэмбриона, проверяют в РТГА с гепер иммунными сыворотками к эталоннымштаммам вируса гриппа. По даннымРТГА определяют. гетерогенность исследуемой популяции в пределахдрейФа, что свидетельствует о спо собности данного штамма вызватьнекрупную эпидемию, а только локальные вспышки. Проявление гетерогенности популяции исследуемого штаммакак в пределах дрейфа, так и в пределах шифта свидетельствуют о потенциальной возможности перерастаниявызванных им вспышек в широко распространяемые эпидемии.П р и м е р 1. Для изучения антигенной структуры популяции былвзят вирус гриппа серотипа А/НЗй /,эталонный штамм А/Гонконг/1/б 8.После его накопления .на куриныхамбрионах 100 мл вирусосодержащейаллантоисной жидкости адсорбировали 0 в течение 1,5 ч на свежих эритроцитах кур. Элюцию проводили в 7 млФизиологического раствора хлористого натрия при комнатной температуре.Полученные элюаты, осадок эритроци тов, насадочную и проьывную жидкости пассировали в куриных эмбрионахдо предельных разведений. Все материалы, отдельно от каждого эмбриона, были оттипированы в РТГА. Всегопри фракционировании было получено479 штамм-вариантов. Из них 372 типируются как исходный штамм, причему 75 отмечаются изменения в преде-,лах дрейфа. У 77 полученных штаммвариантов отмечаются отличия от ос. Изобретение относится к медицине,а именно, к вирусологии.Известен способ определения эпидемичности вируса гриппа путем исследования антигенной гетерогенностипопуляций штаммов вируса, выделенныхот больных 11 .Однако известный способ сложен,длителен, что затрудняет проведениепрофилактических мероприятий и своевременное приготовление вакциныиз выделенных штаммов.Целью изобретения является упрощение способа,цель достигается тем, что при осу;ществлении способа определения эпидемичности вируса гриппа путем исследования антигенной гетерогенности популяций штаммов вируса, выделенных от больных, исследуют антигенную гетерогенность штаммов в пределах дрейфа и шифта и по наличиюгетерогенности штаммов по антигенному составу в пределах дрейфа и шифта определяют эпидемичность вирусагриппа, а по наличию гетерогенностиштаммов только в пределах дрейфаили дополнительно содержащие единичные варианты с шифтовыми изменениями определяют отсутствие эпидемичности.Способ осуществляют следующим образом.Накопление вируса производят путем пассажей смывов от больных накуриных эмбрионах. Полученный материал разводят стерильным физиологическим раствором хлористого натрияс коэффициентом 10, после чего заражают куриные эмбрионы, которые инкубируют при 35 оС в течение 72 ч,Эмбрионы вскрывают, отбирают эллантоисные жидкости, давшие положительную реакцию геммагглютинации, и готовят из них пул, состоящий из равных объемов отдельных аллантоисныхжидкостей. Собирают фракции вируса.Фракционирование проводят на свежих или формализированных куриныхэритроцитах, предварительно отмытыхстерильным Физиологическим растворомхлористого натрия. Вирус адсорбируют на куриных эритроцитахв течение 1,5 ч при +4 С. Соотношениевирусосодержащей жидкости и эритроцитов равно 10:1. После адсорбциисмесь центрифугируют при 1,5 тысячоб/мин в течение 5 мин. Снимают надосадочную жидкость. Для промыванияк эритроцитам добавляют охлажденныйдо +4 С физиологический растворхлористого натрия в соотношении 2:1,смесь размешивают и центрифугируютпри 1,5 тысяч об/мин в течение 5 мин.После снятия промывной жидкости кэритроцйтам добарчяют охлажденныйфизиологический раствор в соотношении 1:0,7, размешивают и оставляют875847 дилось в строгом соответствии сметодом, описанным в примере 1. Прифракцконировании было получено 342штамм-варианта. Из них 268 типкруются как исходный штамм, причемтолько у 70 наблюдаются изменения впределах дрейфа. Изменений в пределах шифта на наблюдается. Четырештамма-варианта были неткпируемиП р и м е р 3. Для изучения анткгенной структуры популяции вируса гриппа серотипа А/НЗМ 2/ был взят штамм А/Виктория/3-75, выделенный от больного. Фракцконированке популяции данного штамма проводили в строгом соответствии с методом, описанным в примере 1, Всего прк фрак ционированик было получено .365 штамм-вариантов. Из них 355 типкруются как исходный штамм, причем у 260 отмечаются изменения в пределах дрейфа, Штамм-вариантов с шифто выми изменениями прк фракционировании указанной популяции выделено не было. 10 штамм-вариантов оказались неткпируемымк. Из полученных данных видно, что у популяции штамма-аналога 55 А/Виктория/3/75, вызвавшего толькоСоставительРедактор Е, Зубкетова Техред М,Костик мк. Следовательно, популяция штамма вируса гриппа аналога А/СССР/77 не давшего крупных эпидемий, а ограничевшегося только вспышками различной кнтсу явности проявляет, в отличие от эпйдемкческкх штаммов, незначительную гетерогенность только в пределах дрейфа.Таким образом, предложенный способ прост, не требует длительного времени, экономичен, что позволяет дать заключенке о способности популяции штамма вызвать эпидемию или локальную вспышку и своевременно решить вопрос о необходимости приготовления вакцины к данному штамму. Корректор А. Дзятко Заказ 10698/6 Тираж 523ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 новного штамма в пределах шифта, причемвыделяются штамм- варианты с отличиямив пределах всего серотипа. По полученным данным можно отметить,что популяция штамма вируса гриппа .А/Гонконг/1/68, давшая пандемию, 5проявляет ярко выраженную гетерогенность в пределах дрейфа и шифта. 11 р и м е р 2. Для изучения антигенной структуры популяции вирусагриппа серотипа А/НЗИ 1/ был взятштамм А/Порт Чалмерс/1/73, выделенный от больного. Фрак 1 ронированиепопуляции указанного штамма проводили строго в соответствии с методом,описанным в примере 1, Всего при фракционировании получено 709 штамм-вариантов.Из них 656 типируются как исходныйштамм, причем у 486 отмечаются изменения в пределах дрейфа, 9 штаммвариантов имеют отличие от исходного штамма в пределах шифта, причемотмечено, что выделенные штаммы относятся к сероподтипам АО, А 1 иА/Англия/64. АналоговА/Сингапур/1/57, А/Гонконг/1/68 25и А/Виктория/35/72 выделено не было.По полученным данным отмечено, чтопопуляция вируса гриппа штамма-аналога А/Порт Чалмерс/1/73, отличающегося меньшей эпидемичностью, чемА/Гонконг/1/68, проявляет ярко выраженную гетерогенность в пределахдрейфа, но гетерогенность в пределах шифта выражена у популяцииштамма А/Порт Чалмерс/1/73 в меньшейстепени, чем у А/Гонконг/1-68 .1,26 и 16,07 соответственно),ограниченные вспышки и не получившего широкого распространения, гетерогенность в пределах дрейфа выражена меньше, чем у его предшественников А/Гонконг/1/68 и А/Порт Чалмерс/1/73, гетерогенность по типу шифта для штамма А/Виктория/3/75не установлена.П р и м е р 4. Для изучения антигенной структуры популяции вируса гриппа серотипа А/110 И 1/ был взятштамм-аналог А/РВ/34, выделенныйот больного. Фракционирование проводилось в строгом соответствии с методом, описанным в примере 1, Всего при фракционировании было получено 409 штамм-вариантов. Из них 406типируются как исХодный штамм, причем только у 176 наблюдаются незначительные изменения в пределах дрейфа. Штамм-вариантов с выраженнымиизменениями в пределах шифта не выделено. Нетипируемых было выделено 2 варианта. Таким образом, можно отметить, что в отличии от эпкдемическкх штаммов, штамм-аналог А/Р 0 -8/34, вызвавший только ограниченную вспьюку, проявляет гетерогенность популяцкк только в пределах дрейфа,П р и м е р 5, Для изучения анткгенной структуры популяции вируса гриппа серотипа А(Н 1 М 1) был взят штамм-аналог А/ССС/77, выделенный от больного. Фракционирование прово