Способ диагностики демиелинизации нервной ткани

ОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ Соеэ СоветскмкСоциалистическихРеспублик п 1874 О 32во делам изобретеиий и открытий(72) Авторы изобретения П, Г, Назаров и И. Ф. ПеревозчиковаФгОрдена Трудового Красного Знамени научйо-,исследовательский институт экспериментальной медицнны(54) СГ 10 СОБ ДИАГНОСТИКИ ДЕМИЕ 1 ГИНИЗА 11 ИИ НЕРВНОЙ ТКА 1 ИИзобретение относится к биологиипреимущественно к иммунопатологии,и может быть использовано в медицине для оценки демиелинизирующей активности сыворотки крови людей и животных с демиелинизирующими заболеваниями нервной системы,Известен способ диагностики демиелинизации нервной ткани, заключающийся в культивировании в течение48 ч кусочков коры головного мозгаФОвзрослых животных (крыс) в среде,содержащей испытуемую сыворотку больного, с последующей гистологическойобработкой и изучением кусочков подмикроскопом 1.15Однако непригодность этого способа для массового применения в лечебньм учреждениях обусловлена тем, чтонервная ткань чувствительна к маОлейшим изменениям условий среды. Сначала ткань должна адаптироваться кусловиям среды, для чего ее выдерживают 24 ч в синтетической питатель 2ной среде, состоящей из ингредиентов высшей степени химической чистоты, с добавлением ростостимулирующих факторов биологического происхождения, при поддержании строго определенного состава газовой фазы культур. Часть культур (20-307) к концу исследования гибнет, несмотря на соблюдение всех требований по их поддержанию, в связи с чем необходимы затраты на постановку дополнительных (запасйых) культур. По истечении первых 24 ч инкубациисреду асептически заменяют свежей 1 добавляя при этом исследуемую сыворотку больного и комплементт и кусочки ткани культивируют в присутствии сыворотки еще 24 ч. Общая продолжительность инкубации, таким образом, составляет 48 ч, После этого кусочки ткани фиксируют, производят гистологическую обработку, делают срезы ткани на микротоме, окрашивают их и изучают под микроскопом.Морфологическая оценка дпмиелинизации имеет при этом качественное выражение (степень демиелинизации выражается в крестах, например в ,+, ,), поэтому точность оценки зави-."сит от квалификации исследователя,Таким образом, известный способзатягивает процесс диагностики и имеет сложную технологию.Цель изобретения - ускорение иупрощение способа.Указанная цель достигается тем,чтопри осуществлении способа путем инкубации крови обследуемого с нервной тканьювзрослых животных,инкубацию ведут в течение 1-3 ч в присутствии НЗ холестерина, определяют его включение в нерную ткань и при снижении включенияпо сравнению с контролем диагностируют демиелинизацию нервной ткани.Способ осуществляют следующим образом,Инкубацию кусочков нервной ткани сисследуемой сывороткой и комплементомпроизводят в течене 1-3 ч в присутствии холестерина - Н. Оценка демиелинизации при том основана на измерении снижения радиоактивности кусочков, пр нзводимом с помощью бета-счечика. Концентрация холестерина -Нв среде мояет составлять от 0,5 до3 микрокюримлХолестерин-Н включается в миелиновыл оболочки кусочков нервной ткани,после чего производится индикация гореждения миелина (демиелинизации)исследуемоЪ сывороткой,Вместо гистологической обработкикусочки ткаша. промывают в физиологическом растворе в течение часа для удудаления избытка холестерина -Н , по3ле чего радиоактивность кусочков ткани измеряют с помощью бета-счетчика.П р и м е р. Производилось исследование демиелинизирующей активностисывороток морских свинок, больных45экспериментальным аллергическим энцефаломиелитом (ЭАЭ) на пике заболевания,при наличии выраженной неврологической симптоматики (исхудание, параличнижних конечностей, нарушение функ- Оции тазовых органон) .Сыворотки животных сохраняли замороженными при -20 С до использования.оНепосредственно перед использованием сыворотки разморажнвали и прогревали при 56 С 30 мин.Кусочки нервной ткани размером,1 акмэ вырезали из коры мозжечка взрос% подавления вклюВключение Ис о холестерина- Н(имп/мин) ульуемыеывоотки ния хо стерни-Н сыворотками О в 80 Ф 12 120 АЭ зд ых во 20 7813+94 У 0 874032 4лых крыс,(возраст около 2 месяцев) ипомещали по 5-10 шт. в стеклянные флаконы (типа пенициллиновых) с 1 мл питательной среды.Состав среды: среда Игла с добавлением 37-ного раствора глютамина(1 мл на ОО мл среды) и 40%-ного раствора глюкозы (1,6 мл на 100 мл среды)- 60%, исследуема. сыворотка - 257.,10 комплемент свежая сыворотка морскойсвинки -5-157 Общий объем сывороткив питательной среде доводили до 407.нормальной сывороткой морской свинки, прогретой.при 56 С 30 мин. Кроме15 того, в среду добавляли раствор холестерина - Н до конечной концентрациив,5-3 микрокюри на мл среды.Кусочки нервной ткани инкубировали вв этой среде при 37 С в течение 1-3 ч.ощ Затем кусочки переносили пасте- .ровской пипеткой на лист фильтровальной бумаги и бумагу помещали в ванночку с физиологическим раствором на1 ч при комнатной температуре дляудаления из ткани невключившегосяизотопа, Каждые 20 мин производилисмену физиологического раствора,Затем бумагу высушивали, вырезат-. ли из нее участки с кусочками нервной ткани и с помощью бета-счетчикаизмеряли радиоактивность каждого ку"сочка,Для получения сравнительных данных параллельно проводилось такое жев- исследование, но вместо сывороткиживотных с ЭАЭ в питательную средудобавляли сыворотку здоровых животных,В таблице приведены данные радиа- оактивности кусочков нервной ткани,с- инкубированных с исследуемыми сыво 40ротками (импульсы аа 1 мин и % подавления включения холестерина -Нсыворотками животных .Заказ .9110/7 Тираж 690 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 13035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная 4 5Предлагаемый способ обеспечивает возможность быстрого определения демиелинизирующей активности сыворотки в течение нескольких часов) у больных с подозрением на демиелинизирующий процесс в нервной системе, что особенно важно для постановки верного диагноза и своевременного начала лечения; высокую чувствительность и объективность, позволяющую выявлять количественные различия с демиелинизирующей активности сывороток; простоту постановки исследования, исключающую сложный и капризный этап культивирования нервной ткани.формула изобретенияСпособ диагностики демиелинизации нервной ткани путем инкубации крови 874032 6обследуемого с нервной тканью взрослых животных, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, инкубацию ведут в течение 1-3 ч в присутствии НЗ холестерина, определяют его включение в нервную ткань и при снижении включения по сравнению с контролем диагностируют демиелинизацию нервной14 тканиИсточники информации,принятые во внимание при экспертизс 151 К 1 егпап 1. А.,РеИ 1 й О, й. Органная культура центральной нервной системы взрослых крыс;"Ехр. Менго 1" 1971, т. 32, с, 111-120.