Способ стабилизации кининов вплазме крови
Похожие патенты | МПК / Метки | Текст | Заявка | Код ссылки
Номер патента: 833208
Автор: Курган
Текст
О П И С А Н И Е833208ИЗОБРЕТЕН ИЯ Союз СоветскыхСоцывлыстыческыхРеспубпык К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 1) Дополнительное к авт, свид-ву -51) М. Кл зА 61 В ГО/00 б 0М 33/48(22) Заявлено 02.08.79 (21) 2823933/2с присоединением заявки-Гннуднустнннньй ннинтет СОВР ао делам изобретений(72) Автор. изобретен И, Курган 1) Заявитель твенный медицинский и Львовский гос) СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ КИНИН ЛАЗМЕ КРОВИ о к Изобретение относится к медицине, конкретно к методам исследования биологически активных веществ в крови.Свободные кинины крови очень быстро бразуются из кининогена под виянием ининогеназ (калликреина), обуславливают й в ничтожно малых концентрациях физиологические или патофизиологицеские реакции организма и оцень быстро разрушаются кининазами, Из-за трудности эффективного подавления кининообразующей и кининразрушающей активности уровень свобод 10 ных кининов в крови оценивают по изменению уровня кининогена. Однако отсутствие данных об исходном уровне последнего в конкретной ситуации и постоянное изменение его, делают эту оценку весьма условной.Известен способ стабилизации кининов в плазме крови 1.Для стабилизации кининов по этому способу 0,.15 мл 5/О-го трилона Б в охлажденной несмациваемой пробирке через силиконированнук иглу из кговеносного сосу- фда доводят до 1 мл и центрифугируют при Т 4 С 20 мин при 4500 об/мин. Плазму отсасывают, намл ее добавляют 8 мл 0,2%-ой уксусной кислоты, нагревают 30 мин на, кипящей водяной бане, охлаждают до комнатной температуры и рН доводят до 2 соляной кислотой. Полученную жидкость насыщают поваренной солью и экстрагируют дважды н-бутанолом, который затем испаряют в вакууме. Сухой остаток суспендируют и измеряют в нем уровень кининов на роге матки по сравнению со стандартным брадикининомОднако способ имеет ряд недостатков.Первым из них является отсутствие подавления фоновой и спонтаннои кининобразующей активности. Кроме того, в процессе воспроизводства способа, охлаждением крови и плазмы и добавлением к плазме уксусной кислоты вызывается активация кининогеназ. Уровень свободных кининов в плазме крови в норме колеблется в пределах 8 )с 10 б - 2710 6 г/л т е. в количествах, которые в сотни раз превышак)т дозы брадикинина, вызывающие пороговый и в десятки раз дозы, вызывающие патофизиоло.гицеский эффект. Поэтому выявляемые автором концентрации свободных хининов в плазме крови в норме являются резуль.титом действия активированных кинишненаз на кининоген вне организма и не отображают истинной ситуации в организме.Цель изобретения - сохранение исходного уровня кининов.Поставленная цель достигается тем, что в известном способе стабилизации кининов в плазме крови путем добавления стабилизирующего раствора с последующим кипячением пробы, пробу крови сразу после ее забора смешивают со стабилизирующим раствором, содержащим 0,04 - 0,05 мл контрикала и 0,14 - 0,15 мл смеси, содержагцейТрилона Б, г 4,5 - 5,0 Хлористого цинка, г 1,0 - 1,2 Дистиллированнойводы, мм 100,Далее пробу центрифугируют, полученную плазму разводят дистиллированной водой в соотношении 1;и кипятят в течение 1 - 2 мин, затем повторно центрифугируют.Способ осуществляется следующим образом.0,8 мл крови в момент забора смешивают с 0,2 мл стабилизатора, состоящего из следующих компонентов: 0,04 - 0,05 мл контри- кала и 0,14 - 0,15 мл смеси, включающейТрилона Б, г 4,5 - 5,0 Хлористогоцинка, г 1,0 - 1,2 Дистиллированнойводы, мл 100.Кровь забирают из сосуда силиконированной иглой в полиэтиленовую пробирку, перемешивают полиэтиленовой палочкой и центрифугируют 20 мин при 8000 об/мин до получения безтромбоцитной плазмы, Плазму в пределах 35 мин от момента забора крови разводят 1; 1 дистиллированной водой и кипятят 1 - 2 мин на открытом огне. Прокипяченную плазму центрифугируют 5 мин при 3500 об/мин и в надосадочной жидкости определяют уровень свободных кининов биологическим способом на роге матки крысы.В предлагаемом способе, нарядуь с предупреждением конкретной активации процессов кининообразования . и частичным подавлением кининаз трилоном Б, в отличие от известного способа, уже в момент забора крови временно полностью подавляют кининобразование контрикалом и полностью окончательно подавляют кининразрушаюшую активность хлористым цинком и трилоном Б. В отличие от 30 минутного прогревания на кипящей водяной бане с целью подавления кининразрушающей активности, применяют кипячение полученной плазмы на протяжении 1 - 2 мин на открытом огне в пределах до 35 мин после забора крови для окончательного подавления кининобразования. Указанные приемы обуславливают стабильное сохранение свободных кининов в плазме при Т 0 + 6 С на протяжении 5 - 6 сут..Насадочная жидкость прокипяченной плазмы, в отличн. от сильгскислотной жид 1 О 15 отсюда концентрация свободных кининов20 (КК) в исследуемой плазме составит; КК = 0,044 нг/мл 35 40 падения давления крови возрастает в 400 -500 раз и становится одинаковым в венозной и артериальной крови. Резкое увеличение уровня свободных кининов отмечено при 45 50 форм улс изобретения 25 ЭО кости, иолу часм(Й послоорабогки плазмы ио известному способу биологи чки кснтактна, что позволяет прямо, оиредля гь кинины на роге матки крысы бз ирдва. рительного экстрагирования их н.бутанолом.Определение концентрации свободных кининов в насадочной жидкости ирокиияценной плазмы проводят биоло ическим методом на роге матки крысы, Сначала определяют порог стандартногс брадики нина(ПБ), используя его раствор в концентрации 1 нг/мм. Затем определяют пороговое количество насадочной жидкости прокипяченной плазмы (ПП), вызывающее сокращение рога, Для расчета исходной концентрации свободных кининов в исследуемой плазме порог брадикинина в нанограммах делят на коли. чество миллилитров надосадочной жидкости и умножают на 2,2, т. е. на коэффициент разведения плазмы в процессе обработки.Например Г 1 Б = 0,01 нг; Г 1 П = 0,5 мл; КК = П 4-"- "2,2; КК = (0,01: 0.50) 2,2ПП илр В случае высокого содержания кининов в надосадочной жидкости прокипяченной плазмы, последнюю разводят и полученный результат умножают сначала на кратность разведения, а после на коэффициент 2,2. Определение стабилизированных предлагаемым способом свободных кининов показывает, что уровень их в плазме венозной крови собак в горме колеблется в пределах 55 10 - 75 1 О г/л и в артериальной от 0,000 до 25 10 г/л. Аналогичные результаты получены при обследовании здоровых людей. В условиях внутривенного введения собакам больших доз экстракта головного мозга, уровень свободных кининов в момент других патологических ситуациях в эксперименте и клинике. Г 1 редлагаемый способ вниду его надежности и доступности может быть применен в клинической практике. Способ стабилизации кининов в плазме крови путем добавления стабилизирующего раствора с последующим кипячением пробы, отлицающдйся тем, что, с целью сохранения исходнгго уровня кининов, пробу крови сразу после ее забора смешивают со стабилизируюцим раствором, содержащим 0,04833208 Составитель О. ЛенчицкаяТехред А. Бойкас Корректор Ю.МакаренкоТираж 687 ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий13035, Москва, Ж - 35, Раушская иаб., д. 4/5Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 Редактор Е. Кннив Заказ 3843/2 0,05 мл контрикала и 0,14 - 0,15 мл смесивключающей:Трилона Ь, г 4,5 - 5,0Хлористого цинка, г 1,0 - 1,2Дистиллированнойводы, мл 00далее пробу центрифугируют, полученнуюплазму разводят дистиллированной водой в соотношении 1: 1 и кипятят в течение 1 - 2 мин, затем повторно центрифугируют.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе. 1. ОпаЬапу А. 01 а 11 де, А. А згпре писгогпейод ог йе ейппа 11 оп о разгпа сп 1 пз. - Рйаггп. Кез Совацпз, 1970,2, р. 165 - 68.
СмотретьЗаявка
2823933, 02.08.1979
ЛЬВОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙМЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ
КУРГАН МИХАИЛ ИГНАТЬЕВИЧ
МПК / Метки
МПК: A61B 10/00
Метки: вплазме, кининов, крови, стабилизации
Опубликовано: 30.05.1981
Код ссылки
<a href="https://patents.su/3-833208-sposob-stabilizacii-kininov-vplazme-krovi.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентов СССР">Способ стабилизации кининов вплазме крови</a>
Предыдущий патент: Способ подбора пары донор-реципиентдля трансплантации почки
Следующий патент: Способ определения непереносимостик нестероидным препаратам
Случайный патент: Устройство для автоматической переездной сигнализации