Способ фракционирования гуминовойкислоты

Сафз Сфветсиих Социалистических РеспубликОП ИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОИЖМУ С ОЗЛЬСТВУ(51 М. Ю.з б 01: И 31/08 с присоединением заявки Мх -ГосудврстаенныА комнтет С С СР по делам зобретенА н открмтА(088. 8) Дата опубликования описания 200331(72) Авторьа изобретения кЬ 4 Ревоййииабая."тленный Московский ордена Ленина, ордена Октябрь и ордена Трудового Красного Знамени госууниверситет им. М. В. Ломоносова(54) СПОСОБ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ ГУМИНОВОЯ КИСЛОТЫ на стеклянную колонку размером 250,заполненную декстрановым гелем. Анализ проводят с использованием проточного спектрофотометра ОЧ-Иото г э при длине волны 260 нм, блока управления йБС, перистальтического насоса РФирмыЛКБ-приборф (Оррза 1 а,Ьюедеп. Швеция).На чертеже изображены гельхрома 10 тограммы гуминовой кислоты чернозема прн использовании в качестве элюентов трис-буфера (а), 0,5 М (б),1 М (в), бМ (г)7 М (д) растворов мо, чевины.5 На оси абсцисс обозначен элюционный объем (Ч) в мл, т. е. объем выходящего из гелевой колонки раствора,Фракционируемого вещества. По осиординат отложена оптическая плотность 20 .(0) выходящего элюционного растворавещества, Каждый элюционный пик гуминовой кислоты на гельхроматограммахсоответствует согласно теории гельхроматограФии определенной гомоген ной молекулярно-массовой фракции. Высокомолекулярные Фракции гуминовойкислоты 1 и 2 при Фракционированиивыходят из колонки при меньших объемах элюции. Относительно низкомоле кулярные фракции 3 соответствуют отИзобретение относится к сельскомухозяйству и микробиологической цромьхаленности, в частности к выделениюи определению состава и свойств гуминовых соединений, а именно к Фракционированию гуминовой кислоты.Известны способы Фракционированиягуминовой кислоты, включающие выделение гуминовой кислоты из почвы,обработку элюентом и хроматографирование на декстрановом геле, в которых в качестве элюента используютО, 1 и, йаОН и трио-НС 2 буфер1 Ди ЯОднако известные способы не позволяют достаточно качественно Фракционировать гуминовую кислоту.Цель изобретения - повьхаение качества Фракционирования.Поставленная цель достигается тем,что в качестве злюента используют водный раствор мочевины с концентрацией 6-7 М.П р и м е р. Гуминовую кислоту получают экстракцией 0,1 н.йаОН после декальцинирования Йа 5 ОФ из внце. лоченного чернозема. Препарат высушивают в вакуум-эксикаторе в атмосФере Р О и хранят в бюксе. Гуминовую кислоту в количестве 5-10 мг растворяют в 2 мл элиента и наносят ШПудруносительно большим объемам выхода вещества,При элюции из гелевой колонки гуминовой кислоты трис-НС 3 буФером наблюдается необратимая адсорбция вещества на матрице геля, Величина адсорбции составляет 6,2. Гельхроматограмма (рис. а) размыта, в объеме (Ч)20-60 мл выходит относительно маловещества, отсутствует четкость разделения Фракций 1 и 2. Наблюдается размытый "хвост" в объеме 100-140 мл, 30который относится к веществу низкомолекулярной Фракции 3, обратимовзаимодействующей с гелем.Применение 6-7 М раствора мочевины, как элюента для Фракционирования,позволяет полностью исключить адсорбцию гуминовой кислоты на геле, чтоприводит к повышению точности гельхроматограФии, Молекулярно-массовыефракции кислоты выходят из колонки смалым разбавлением в виде узких элюционных пиков ,рис. г, д). Исключение адсорбции на геле приводит посравнению с известным способом к увеличению выхода фракции 1 и 2 ,рис. а,г, д) Для Фракции 3 отсутствует размытый "хвост" вещества (по сравнениюс известным способом), Величина оптической плотности снижается для этойФракции до нуля при У равном 83 мл,что говорит о том, что все вещество ЗОгуминовой кислоты вышло из гелевойколонки. 6-7 М растворы мочевины позволяют получить идентичные результаты Фракционирования гуминовой кислоты. Эти концентрации являются оптимальными, так как при концентрации меньше 6 М часть гуминовой кислоты необратимо адсорбируется на геле ,при концентрации мочевины 0,1 М до 5 М адаорбируется ат 43,2 до 1,3 гумино Овой кислоты),Как видно на примере использования 0,5 М и 1 М мочевины (рис. б, в),гельхроматограммы не очень четкие.В объемах 100-140 мл обнаруживается растянутая эона вещества, относящая- ся к фракции 3, а величина элюционных пиков Фракции 1 и 2 больше, чем в случае известного способа (рис. а), но меньше, чем в случае 6-7 М моче- вины (рис. г, д), Это связано с адсорбцией гуминовой кислоты на геле при низких концентрациях мочевины.Концентрация выше 7 М не целесообразна, так как образуется пересы- ценный раствор мочевины, из которого последняя выпадает в осадок за счет кристаллизации.Использованием 6-7 М раствора мочевины в качестве растворителя и элюента удалось полностью избавиться от адсорбции препарата на матрице геля и получить достаточно высокую степень разрешения для молеку-. лярно-массовых Фракций гуминовых кислЬт. Отсутствие обратимой и необрати-, мой адсорбции гуминовых кислот на геле и хорошая эФфективность разделения молекулярных фракций при элюции 6- 7 М мочевиной дает воэможность в дальнейшем исследовать все составные молекулярно-массовые Фракции гуминовых кислот, их влияние на развитие микроорганизмов и почвенное плодородие.Формула изобретенияСпособ фракционирования гуминовойкислоты, включающий выделение гуминовой кислотЫ из почвы, обработкуэлюентом и хроматограФирование надекстрановом геле, о т л и ч а ю -щ и й с я тем, что, с целью повышения качества фракционирования, в качестве элюента используют водный раствор мочевины в концентрации 6-7 М,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Молекулярные веса, размеры иконфигурация частиц ГК, -"Почвоведение",1971, 9 11, с. 43-57.2. Ви 11 й. 5 Ровнее А. М, Ве 1сйговайо 9 гайу о 1 Ь 1 ще ас 1 д",-,1. 5 о 115 с 1, 1971, М 22, р, 237-249 (прототиг,59/5 5 ПП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектн л Тираж 907 ВНИИПИ Государств по делам Изобр 13035, Москва., МПодписноеного комитета СССРений и открытийРаушская наб д.