Способ получения пористого кремнеземсодержащего материала для хроматографии биополимеров

Союз СоветскикСоциалистическиеРеспублик ОП ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и, 747513(51)М, Кл. с присоединением заявки Ж В 01 Х 1/22В 01 0 15/08С 12 В 13/06 Гееудерстееинмк комитет СССР по делам наабретеинй н еткрытнй(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОРИСТОГОКРЕМНЕЗЕМСОДЕРЖАЩЕГО МАТЕРИАЛАДЛЯ ХРОМАТОГРАФИИ БИОПОЛИМЕРОВ1 2Изобретение относится к способу полу- дпя хроматографии биопопимеров путем чения пористых кремнеземсодержащих ма- обработки поверхности кремнезема расттериапов с модифицированной поверхностью вором гемодеза, представляющим собой и может быть использовано в хроматогра- смесь, содержащую попи-Я-внниппирропифии биопопимеров при приготовлении чис- дон, хпористый натрий и декстраны при тых вирусных препаратов дпя производ - температуре 80-130 С 12),5 о ства эффективных вакцин.Известен способ получения пористых Недостатками этого способа явпяются кремнеземов дпя разделения биопопимеров низкая стабильность хроматографических путем обработки товарных марок кремне- параметров материала, загрязнение разде-, земов неденатурированными белками ппаз- чяемых биопопимеров компонентами гемо 1 Омы крови (11. деза: поли-й-виниппирропидоном, декстраНедостатком известного способа явля- нами, хлористым натрием. Вымывание ется то, что вышеуказанный модифнци попивиниппирропидона с поверхности кремрующий агент закреппяется на поверх- незема приводит к потере разделяющей ности кремнезема при помощи чисто физи- способности в ряду биопопимеров и затруд 15ческой адсорбции и поэтому может няет в конечном итоге многократное исбыть удален с поверхности простой промыв. попьзование хроматографического матерна кой, что препятствует многократному ис- па, При разделении белков и вирусов пользованию модифицирующего материала. (штамм А = 399) на колонке е моди -20Наиболее близким к изобретению по фицированным по известному способу матехнической сущности и достигаемому ре- териапом выход вируса гриппа достигает зупьтату является способ получения по%, однако, выход в раствор пони -Я- ристого кремнеземсодержащего материапа -виниппирропидона с 1 г сорбента при7475 3элюировании 0,5 М раствора буфера срН 7,5 составляет 14,3 мг,Целью изобретения является повышение стабильности материала за счет образования прочной трехмерной полимер 5ной пленки на поверхности кремнезема.Поставленная цель достигается способом получения кремнеземсодержащего материала цля хроматографии биополимеров,состоящим в обработке кремнезема 1020%-ным раствором К -винилпирролидонав присутствии дивинильных соединений иинициаторов полимеризации, взятых в заданных количествах при нагревании,В качестве дивинильных соединений берут триэтиленгликольдиметакрилат илидиметакриловый эфир диэтиленгликоля вколичестве 5-10% (от веса Я-винилпирролидона), а в качестве инициатора полимериэацииберут порофор- М в количестве 1-2% (от веса мономера).Технология осуществления способа состоит в том, что пористый кремнезем обрабатывают раствором И -винилпирролидонав присутствии триэтипенгликольдиметакрилата (ТГМ) или диметакрилового эфира диэтиленгликоля (ДМЭГ) и инициатораполимеризации порофора В при температуре 60-80 С. Обработку кремнеземаопроводят 10-20%-ными спиртовыми рас- З 0ворами Й -винилпирролидона, количествосшивающего агента (ТГМ-З, ДМЭГ) составляет 5-10% от количества М -винилпирролидона. Количество инициатора полимеризации (порофор- Я ) 1-2% от мао 3сы мономеров. Обработку кремнеземапроводят при указанной температуре в течение 5-6 ч при отношении фаз (по объему) кремнезем-раствор 1:3-6. Далеемодифицированный кремнезем отфильтровывают, отмывают горячей дистиллированной водой от избытка полимера и используют цпя хроматографии биополимеров.Предлагаемый способ обеспечивает получение стабильного модифицированного пористого кремнеземсодержащего материала, при использовании которого цля разделения белков и вирусов (штамм А =399) выход вируса достигает 100%, аколичество поли- Я -винилпирролидонавыходящего в раствор при элюировании,уменьшается по сравнению с известнымспособом с 14,3 до 0,4 мг. Высокая.стабильность материала, полученного попредлагаемому способу, обусловлена образованием прочной трехмерной полимерной сетки на поверхности кремнезема засчет как адгезии, так и прививочной сополимеризации Й-винилпирролидона и ши 13сшивающего агента на поверхности кремнезема.П р и м е р 1, 50 мл пористогокремнезема - макропористого стекла сосредним радисом пор 900 Л и объемомпор 2,15 см /г заливают 330 мл12%-ного спиртового раствора М-винилпирролицона, содержащего 1,75 г триэтиленгликольциметакрилата и 0,74 гпорофора - И . Смесь выдерживают приперемешивании и нагревании сначала в тесчение 2 ч при 65-70 С а затем 4 чпри 80 С, Модифицированное пористоестекло промывают дистиллированной водой и выдерживают в избытке кипящейдистиллированной воцы в течение 1 ч(соотношение фаз кремнезем:вода = 1:8-10). Далее продукт промывают дистиллированной водой и загружают в хроматографическую колонку 13 х 0,6 см. На колонку наносят 1 мл суспензии вирусагриппа (штамм А = 399) и ведут элюирование 0,05 М раствора буфера с рН 7,5в присутствии 0,15 М НаС 1(со скоростью1 см/мин). Выхоц вируса 100%. Вымывание растворимых фракций полимера 0,4 мгна 1 г модифицированного кремнезема.П р и м е р 2 . 35 мл пористогокремнезема - макропористого стекла сосредним радисом пор 1150 А и объемомпор 0,75 см /г, заливают 180 мл15%-ного спиртового раствора Й -винилпирролидона, соцержащего 2,3 ТГМи0,46 г порофора- Я, Далее реакционнуюсмесь обрабатывают и испытывают полу-ченный продукт, как указано в примере 1.Выход вируса 100%. Вымывание растворимых фракций отсутствует.П р и м е р 3. 50 мл пористогокремнезема, указанного в примере 2,заливают 200 мл 20%-ного раствораМ -винилпирролидона, содержащего3,6 г ДМЭГ и 0,3 г порофора -Н, Далее реакционную смесь обрабатывают ииспытывают, как указано в примере 1,Выход вируса 100% . Вымывание растворимых фракций полимера отсутствует, После 5 разделений выход вируса не изменяется.Таким образом, предлагаемый способполучения пористого кремнеземного материала позволяет получить стабильный препарат цля хроматографии биополимеров,который в отличие от известных материалов аналогичного назначения не загрязняет разцеляемую смесь полимерными продуктами и сохраняет свою разделяющуюспособность после многократного использов ания, 5 7475При плановом выпуске гриппозной вакцины 1 млн, доз в гоа с использованием материала, полученного предложенным способом ожиааемая экономия составит ориентировочно 500-800 тыс. руб.5формула изобретения 1. Способ получения пористого кремнеземсодержащего материала для хроматографии биополимеров, включающий обра ботку кремнезема раствором Й -замешенного производного пирролидона при нагревании, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения стабильности материала за счет образования прочной трехмерной полимерной пленки на поверхности кремнезема, обработку ведут 10-20%-ным раствором 1 Ч -винилпирролидона в присут 13 6ствии дивинильных соединений и инициа-,торов полимеризвции.2.Способпоп. 1, отлич аюш и й с я тем, что в качестве дивинильных соединений берут триэтиленгликольднметакрилат или диметвкриловый эфираиэтиленгликоля в количестве 5-10% отвеса Й -винилпирролидонв, а в качествеинициатора полимеризации - порофор -Нв количестве 1-2% от веса мономера.Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1. Мчедлишвили Б. В. и др. МатериалыХУП Научной сессии института полиоме-лита и вирусныхэнцефалитов АМН СССР,М., 1972, с. 14-16,2. Авторское свиаетельство СССРМ 467883, кл. В 010 15/08, 24.11.7224,11.72 (прототип).Составитель Г. Андреева Редактор Н. Потапова Техред А. куликовская Корректор Ю. Макаренко Заказ 4123/2 Тираж 809 ПодписноеЦНИИ ПИ Государственного .комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патентф, г. Ужгород, ул. Проектная, 4