Штамм всти-301-продуцент нуклеотидов

(5 )щ кл С 12 Э 13/06 с присоелинением заявки РЙ Гооударотееииый комитет СССР ао делам изобретений и открытийДата опубликования описания 08.04 80 В, Ж. Цыренов, И, О, Пинуев, Г, Г. Гончиков,и Р. В. Булгадаева.(54) ШТАММ СОЯ 1 МЕВАСТЕК 1 ОМ БРЕ СТЕ 5 ВСТИ-- ПРОДУЦЕНТ НУКЛЕОТИДОВ Изобретение относится к области микробиологии и может быть использованодля производства нуклеотидов.Предложенный шталлм является новыми в патентной и научно-технической лите 5ратуре не описан.Цель изобретения - новый штамтлСоъте Ьстс 1 ет отт врЕсбв ВСТИ прсдуцирутощ ий нуклеотиды,Штамм выделен из экстремента аистас помощью полуэлективттой среды.Штамм Согпебас 1 е ищ оресте 5ВСТИ- продуцент нуклеотидов хранится в музее культур промышленныхмикроорганизллов института ВНИИгетуетика под номером ЦМПМВ,Культурально-морфологические призна-, ки.Яйцевидные палочки (0,6-0,9) х( 1,5- 3) мкм, иногда встречаются более круйные палочки. Заметного плеоморфизма нет. Расположены паралщ под углом друг к другу в пакетной упаковке, иног. да по одной, Споры и капсулы отсутствуют, Неподвижные.Мясо-пептонный агар. После 2-х суоток роста при 30 С образует круглыеколонии диаметром 3 - 4 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф вы -пухлый, аморфные, светонепроницаемые,мягкой маслянистой консистенции, цветжелтый,Рост по штриху умеренный, снизузатягивающийся, сверху ограниченный,рельефный, блестящий, поверхность гладкая, маслянистой консистенции, цветжелтый.- Глюкозо-картофельный агар, После3-х суток роста при 30 С образуеткруглые колонии диаметром 2-3 мм, краяровные, поверхность гладкая, рельеф выпуклый, аморфные, светонепроницаелтые,мягкой маслянистой консистенции, цветжелтый,Среда Чапека с 30 мкг/л биотина.ВПосле 3-х суток роста при 30 С образует круглые солонин лии ею 1 1,01,5 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельф выпуклый, аморфные, мягкой маслянистой консистенции, цвет желтый.Сусло-агар. После 4-х суток "роста образует точечные колонии желтого цвета,Картофель. Рост скудный. Цвет желть й.Мясо-пептонный бульон. Пятисуточная культура образует слабую равномерную муть. Пленку на поверхности не образует, Осадок желтый, легко взмучиваюшийся, 10 образует равномерную муть. 30 ленин 0,5 ати 15 мин,и добавляютколбы (0,2%) после стерилизации.ог 1Ферментационная среда (вес, );Глюкоза 10М 504 7 Н 0 1СаСР 2 Н 0 0,01 Физиолого-биохимические признаки,Грамположительный микроаэрофил,Растет при температуре 20-37 С, опти 15мум 30 С.Усваивает глюкозу, мальтозу, инозит,сахарозу. Слабо усваивает дульцит, ксилозу, арабинозу. Не усваивает маннит,сорбит, рамнозу, лактозу.20Глюкозу,- сахарозу, мальтозу сбраживает до кислоты,Ацетилметилкарбинол не образует.Крахмал не гидролизует.25Желатину не разжижает.Индол не образуется. Сероводород необразуется.Нитраты редуцирует до нитритов.Молоко не изменяет.Целлюлозу не гидролизует.Каталазная активность положительная.Ур еаза - поло жительная.Примерь. использования штамма Согу еЗБоас 1 ееио орестео ВСТИ ЗО 1П р и м е р 1. Посевная среда, вес.%:Пептон 1,5Глюкоза 2К,НРО 0,1М 504 7 НО, 0,03МаС 8 0,3Га 904 7 Н О О,О 1Био тин 30 мкг/лрн 7,3Среду разливают по 20 мл в Эрленмейеровские колбы емкостью 250 мл истерилизуют при давлении 1 ати 15 мин,Мочевину стерилизуют отдельно при даввК ПРО 1КН 2 РО1.Пептон 0,5Биотин 30 мкг/л Среду разливают по 15 мл в Эрленмейеровские колбы емкостью 250 мл,добавляют 5 н,йаОН до рН 7,6 и стерилизуют при давлении 1 ати 15 мин. Мочевину стерилизуют отдельно при давлении 0,5 ати 15 мин и добавляют в колбы (0,6%) после стерилизации. Витамины - Са - пантотенат и тиамин-НВг стерилизуют, пропуская через стеклянныйфильтр Ио 4, и добавляют также в колбыпосле стерилизации из расчета соответственно 5 мг/л и 3 мг/л.Ферментация. Культуру согрпгдас 1 еяип61 есе 5 ВСТИс двухсуточного коосяка (рыбный гидролизат РПА; 30 Спетлей переносят в колбы с посевнойсредой, которые помещают на круговуюкачалку. Спустя 24 час культивированияна посевной среде при 30 С этой средой(10% инокул 1 руют колбы с ферментационной средой. Ферментацию на круговойкачалке проводят в течение 3-х суток ивносят в колбы по 30 мг аденина и0,15 сл ксилола. Затем ферментациюпродолжают еше сутки,Определяют нуклеотиды в культуральной жидкости.Клетки удаляют центрифугированием,флоккулируюшие белки - нагреванием вкипящей водяной бане в течение 5 минпосле подкисления до рН 4. Затем нуклеотиды экстрагируют 0,6 н. НС 10 . Обработанную таким способом культуральную жидкость подвергают хроматографи -ческому анализу, Нисходящая бумажная,хроматография в системе изомаслянаякислота: ледяная .уксусная кислота:1 н. МН ОН: 10: 1: 5. Пятна нукле-4отидов на бумаге просматривают в УФна ультрахемископе, элюируют 3 мл воды в кипящей водяной бане в течение30 мин. Количественное определениенуклеотидои производят по Еемеренном на спектрофотометре, с помо -шью переводных коэффициентов. Ионообменную хроматографию проводят на смоле АВ(С 1-) в системе НС 1: ЬС 1в линейном градиенте. Выход АТФ, АДФ, АМФ составляет соответственно 1,5, 0,55 и 1,5 мг/мл. При робавлении гуанина - 0,92 мг/мл ГТФ, 0,42 мг/мл ГДФ и 0,7 мг/мл ГМФ. При добавлении оснований искусственного происхождения, таких как б-мер-. каптопурин, 8-азаденин, 4-тиоурацил, сумма нуклеотидов в виде нуклеозидмонофосфата составляет 1-2 мг/мл.7211 желтыи. Составитель С, МалютинаРедактор Н, Вирко Техред М. Петко Корректор М. Шароши,Заказ 604/22 Тираж 522Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Филиал ППП "Патент", г, Ужгород, ул, Проектная,4 НсОХь.30 а 1 ие ре 1 лагаемого штал 1 ла позволит уростить технологию получения различных нуклеотидов в производственных условиях для получещя препаратов, используемых в медицине. 5 Формула изобретения Штамм СоиупаВас 1 е ип 1 ОреСе 5 оВСТИ- продуцентА Тф - аденозинтрифосфатА Дф - аденозиндифосфатАМФ - аденозинмонофосфатГТФ - гуанинтрифосфатнуклеотидов. Хранится в Музее культурпромышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика" под номеромЦМПМВ.Культурально- морфологические признаки,Яйцевидные палочки (0,6-0,9) х( 1,53) мкм, иногда встречаются более крупные палочки, Заметного плеоморфизманет, Расположены парами под углом другк другу в пакетной упаковке, иногда поодной. Споры и капсулы отсутствуют. Неподвижные.Мясо-пептонный агар. После 2-х сутокроста при 30 С образует круглые колонии диаметром 3-4 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф выпуклый,аморфные, светонепроницаемые, мягкоймаслянистой консистенции, цвет желтый.Рост по штриху умеренный, снизу затягивающийся, сверху ограниченный,рельефный, блестящийповерхность гладкая, маслянистой консистенции, цвет желтый.Глюкозо-картофельный агар. После403 - х суток роста при 30 С образует круг 61 6лые колонии диаметром 2-3 мм, края ровные, поверхность гладкая, рельеф вы - пуклый, аморфные, светонепроницаемые, мягкой маслянистой консистенции, цвет Среда Чапека с 30 мкг/л биотина,о.После 3-х суток роста при 30 С образует круглые колонии диаметром 1,01,5 мм, края ровные, поверхность гладкая,рельеф выпуклый, аморфные, мягкой маслянистой консистенции, цвет желтый.Сусло-агар. После 4-х суток ростаобразует точечные колонии желтого цвета.Картофель. Рост скудный. Цвет желтый.Мясо-пептонный бульон. Пятисуточнаякультура образует слабую равномернуюмуть. Пленку на поверхности не образует.ОсадоК желтый, легко взмучивающийся,образует равномерную муть.Физиолого-биохимические признаки.Грамположительный, микроаэрофил.Растет при температуре 20-37 С,оптимум - 30 М.Усваивает глюкозу, мальтозу, инозит,сахарозу. Слабо усваивает дульцит, ксилозу, арабинозу, Не усваивает маннит,сорбит, рамнозу, лактозу,Глюкозу, сахарозу, мальтозу сбраживает до кислоты.Ацетилметилкарбинол не образует,Крахмал не,гидролизует.Желатину не разжижает.Индол не образуется.Сероводород не образуется.Нитраты редуцирует до цитритов,Молоко не изменяет.Целлюлозу не гидролизует,Каталазная активность положительная,Уреаза - положительная.