Штамм термофильной бактерии нэнг 6108-продуцент -амилазы

т СВСС" " Я, .н ЙеТЕИИЯ Союз СоветскихСоциалистических 1,6610 Республик 4 ВТОР СКОМУ СВИДНВЛЬ СУЗУ 61) Дополцителы 22) Заявлено 12.0 к авт. свил(23) Гриоритет сударственнвй немет СССР а делам нзесретеннй и етнрвтнйк)ллетень Х,е Дата опубликования описания 15.05(роду(Ов брожеци и Ицститхт микрооиологии АН СССР54) 1 Т(с(,ММ Г.1 ЧОФИ,1 Ь 1 ОГ 1 В."БАКТЕРИИ Б(С 1 Ш, г) 1.з,Я.(с Г С 1.8 1:-)НГ Г)-108-ПРОЛУЦГГ)Т (А -ЛМИ,г) АЗГ) Из 00 рете(п 1( 03(с сгс 5 к микробиоло иЧЕСКОй ЦРОМЫЦЛСпоети. ТосЦЕЕ, К ПО,УЧЕ- цик) )п)во 0 цтс)мх;д г(рмофильцои бактерии Бдс(пк (1(д; )д;(спв 1:)1 Г 6-108, используемого лл О)дз(цдция фермента а-ами,)з)1, цап)н(мер, в производстве спирта лля РДЗжнжСЦИЯ КРс)ХМДЛИСГОГ 0 СУС;1 Д И В тЕКС- тильцой пр ьп)3)3( ц(п)с г)( лля рдсц)лихтов- К 1 1 Т К с 3 1С1 .ИВВ(. стц 1 Рс(зг и ч 1(ыс ц(т с 1)1 х)ь тс Рх 10пг ь- ЦОЙ ОД КТО)ИИ ВДС 1(1 ПЬ (1 с 1 В(с 31 СПК ИСПО,1 Ь 3 св - Мо)3,1,)я О )ВЗс 1 я ф( с)Е 3(Тс 1 а - с 1 М(3, с 1 - зы 1, 2.Изесть 30 313(:.3,;мы имеют цсв сок(ю а. с 1 МИГ 1 с 1 ЗЦУК) ДКИ БИО(ГЬ, 3 ТО ЦЕ ПОЗВОГ 151 ЕТ ИЦ. тсцсифицировдт(, 31)ц сы разжижения крах - М а;1 И С Т 010 (. , (, с) И Р с 1 С Ц 1,1 И Х 10 В К с Т К с 1 Ц Е Й .Целью из )б)спи; яв, 5( гся цог(х и ц)е ЦОВО 0 П 1 Т;3, ссз ( ) с)11 КИ,1 И ЙИОХ 13113 ЧССКИ 1 И СБОЙСТВс 1(и. 0Г(с 1 дс(.03 Е 0 ВЫСОКО СсОСОО цостыо к оио(3133 с.х а-дмилазы и. гем са- МЫМ, К ИЦ ГСЦС(3(Г:033(И 1 сОЦЕССа )аЗЖИЖЕ- ция крдхмас 3("гоО сусла и увеличе)ппо выхода спирт,(.ШТс) (3)1 Г(3 оф ИГ(ЬНОЙ ОДКТЕ 13)ИИ Вс 3 С. Й с 3. (а 1 сгв Н;,)Н 1 6- 08 - пролуцент амилазы выделен иутсх .(вукрдт)Ого воздей(твия му -гдгс)хи; 3(оныхбихинох ца первой ступени селекции и нитрозогуанилином без применеци х(хт(гсцных факторов -- на второй ступени селекции.Штамм термофильной бактерии Вас 1 цвв(а сцв ННННГ 6-108 -- продуцент а-амилазы хранится в Институте микробиологии ;к(лсмии и) к СССР.Морфологические признаки.Нд кртофель)О-пептоннох агаре и на сицгетическо дгаризоваццой среле в присутствии тидмица, пара-аминобензойной кис,оты, бпоти 33, лапина, фенилаланина и метицицд при 60 С 48-час культуры образуют пдлочковилць(е клетки, соединенные в цепочк(с из тр(.х и оо.се клеток. Размеры клеток (5,0 6,0) Х (0,6- 0.8) мк. Спорообразовдцис слдоое, споры цилиндрические разчерох 1 5;)( 0 8 мкРост цд жилких срелах. На картофель О-цеито)30)1 бульоне при 60 С через 24 час появляется хлопьевилньй осадок, который через три - и:есть дней значительно увеличивается. Вез взоалтывдния среда прозрачная. На синтетической среле с мальтозой через 24 чдс образуется нежный осадок, на пятые)песгые сутки на поверхности среды образу 661014ется тонкая пленка, осадок значительно увелицивается.Рост на твердых средах. При посеве штрихом на картофельно-пептонно(м агаре рост интенсивный, плоский, светлый, бежевый, сла бо блестящий, край волнистый, поверхность мелозернистая. На синтетической среде рост такой же, цо менее интенсивный.При посеве уколом на картофельно-цептонном агаре на поверхности рост интенсивный, плоский, светлый, бежевый, слабо блестящий; по уколу рост слаоый, воронкообразный, с разрывом среды. На синтетической агаризованной среде рост на поверхности средний, по уколу в . оцень слабый с небольшим разрывом среды. 15Гигантская колония через 65 цас роста на картофельно-пептоццом агаре округлая, плоская, светлая, бежевая, центр колонии более плотный, цем края, края колонии фестонцатые, поверхность (Слко-зернистая. Диаметр колонии 15 - 17 мм. На синтетической 20 агаризовацной среде колония такая же, но диаметр ее равен 1012 мч.Физиологические признаки.Штамм гидролизуст крахмал, рсдуципт нитраты в нитриты, молоко це свертывает, казеин гидролизует слабо, желатину це разжижает. Выдерживает концентрацию хлористого натрия до 3,0) ца картофельно-псцтонном оульоце.Отношение к источникам углерода.Штамм утилизирует с образованием кис- ЗО лот: глюкозу, фруктозу, ча)позу. галактозу.ксилозу, арабицозу, чальтозу, сах(розу, 1(с,.1- лооиозу, рафинозу, кра;чал; х) жс утилизцрует лактозу, це утилизируст нслгюлозу. 1 спользует в качестве источников углерода маннит, хуже - сорбит, очень с,або-ицулцц, органические кислоты.Отношение к истоццикам азота.Штамм ассимилирует пептоц, моцевину, аммонийные соли неорганицеских кислот, некоторые аминокислоты, в частности аспарагиновую и глутамиювуо кис,Оты, валин, гистидин, изолейциц, мстиоциц, орнитин, серии.фенилалациц, цистеин. Нитраты испо ьзст гораздо хуже.Штамм термофильной оактерии Вас 11 ц (азЕа 1 Сцв НЕНГ 6-08 испытан в лабора торных условиях.Для глубинного культивирования штамма была применена среда следующего состава, вес. ОЙ: пецтон0,3; мальтоза0,7; ХН)хОз О,1; ХаС 0,05; СаС 2 - 0,01;Мд 50, - 0,01; адНРО 4 - 0,01; МпС 1 г 0,005; СаСОз - 0,1; тиамин, пара-аминобензойная кислота в концентрации 2 мг).1; Оиотин - 0,3 (мг)л; аланин, фенилаланиц и хетионин - по 3 мг)л (Г)1=форма).Выращивание проведено в колбах на качалке при 240 об/мин. Максимальное накопление а-агмилазы в культуральной жидкости наблюдали к6 цас роста штамма.а -амилазную активность определяли иодомстрицеским методом, разработанным во Всесоюзном научно-исследовательском институте продуктов брожения.Разжижающук) способность определяли на вискозиметре Оствальда, используя в кацсствс су(истрата О)(;-цый нерастворимый крахмал, время гидролиза 10 чиц, цри 75 С.Г(ри разведении ю(льтх ральной жидкости итамха в 350 - -400 раз наблюдали падение вязкости церас.гворимого 1 О о-ного крахмала ца 83 ц)о, а у исходной культуры такое же падение вязкости крахх)ала -- только при развед(ции се в 100 разТаким Образом новый цггамч обладает разсцжсноп(ей способностью в 3,5 4,0 раза Оолыцсй, цех исходная культура в тех же Х СЛОВИ 51 Х.Лктивцс)ст цовогс) цта)чма составляет 46 60 с,(ьмк хль,)1,1-;1 цц. и ц 1,7- 2,2 раза ыц 1(, цсм у исходной с)гьтур ца ацалогиццой среде.1 ри зтс)ч ц 1 ачх Вас 11 ц (а (а(сиз ЕГЕ 1 6-108 сохцИя(г:)ысокуо (-а пилазцук);ктцц 1с 1 ц)и 5(рцю, 1,5 гс) (а, т.е. яв- , 5(гггси сг( бил ь 11 ы ) 1 О Ос но в 11 ы х 1 биОх им и - С.СКИ 1 СИОИс."1 В(Х 1 И цр(;("(1 Н,1 цет СОООЙ цгц 1 х 1 (.О стоикхи Ор)Ог)О)и 1 ес 451)и, кх,ьтур 1, Иыхи и физи(п)лс)гицсскичи свойствачи, заклюцающичцся ц юцыценной способности к с)ИОСццтСзу О,-;.чилазы.Фс)1).1(ь (н)ос) 1)( тс. н)с)11(1)ч тсрмофпль О бак(рци Вас 11 цв (1 а; а.спв Е 11.1 6-108 1 родунсцт (-ами. ( а; ы храпигс 51 вИ(гичтс;исробиог 10 ии ЛЕ 1 СССР.Морф,О ицескис признаки итахма: ца карт(гфельцо-пецтоццоч агарс ц ца сицтетицс(кой ааризоваццой срсдс в присутствии тиамцца, цара-амицобсцзойцой кислоты, биогцца, ала ница, фсилалацина и четионица цри 60 С 48-цас культуры образуют цалоцковцдцые клетки, соедццецныс в цспоцкц из (рсх и Оолсс ,)сток. Р(з)ер к,сток (5,0- 6,0) Х (0,6 0,8 .чк. Сцорообразование слаОос, сИ)ры пилицдрицсскис разчером 1,5 Х ;)С 0,8 мк.Рост ца жидких среда:с. На картофельно-пептоццоч бульоне цри 60 С через 24 цас появляется хлоцьевидцый осадок. который церез три-несть дней зцацительно увелицивается. Без взбалтывация среда прозрачная.1-1 а сццтстицеской среде с мальтозой цсрез 24 цас образуется нежный осадок, на пятыеп)естые сутки ца поверхности среды образуется тонкая пленка, Осадок зцацительцо увелицивается.Рост ца твердых средах. При посеве штрихом ца картофельно-цецтонном агаре рост интенсивный, плоский, светлый, оежевый, слабо блестящий, край волнистый, поверхность мелкозернистая. На синтетической сре,(с рост такой же, но менее интенсивный.661014 Составитель А. Бражникова Техред О. Луговая Корректор Н. Стен Тираж 525 Подписное ЦН И И П И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб., д. 4,5 Филиал П ПП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4Редактор Н. Гоязнова Заказ 239025 При посеве уколом на картофельцо-пептоцюч агаре ца поверхности рост интенсив.цый, плгскин, светлый, бежевый, слабо блестящий, по уколу рост слабый, воронкообразный, с разрывом среды. На синтетической агаризоваццой среде рост на гговерхгости средний, по уколу очень слабый с небольшим разрывоч среды.Гигантская колония через 65 час роста ца картофельпо-пептоццом агаре округлая, пл,ская, светлая, бежевая, центр колонии оолее плотный, гем края; края колонии фестончатые, ггерхггость мелкозернистая. иачетр колония 15 -17 мм. На синтетической ааризонагной среде колония такая же, но диаметр ее равен 10- 12 мм. 15Фязигггггггческгге признаки. Штамм гидроггизует крах ал, редупирует цитраты в нитриты, чглгко це свертывает, казеин гидро,пзуст слагг, ке,атгггг це разжижает. Выдерживаг кпггепраппю хлористого натрия до 3) ца .арзгн ельцо-пептонном оульоне.20Отцгпшппс к источникахг углерода.11 тамч утилизирует с ооразованием кислот: глккозу, фруктозу, маннозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, мальтозу, сахарозу, целлобиозу, рафинозу, крахмал; хуже утилизирует лактозч, це утилизирует целлюлозу. Использует в качестве источников углерода манцит, ю не - сороит, очень слабо - инулин, органические кислоты.Отношение к источникам азота. Штамм ассимилирует пептон, мочевину, аммонийные соли неорганических кислот, некоторые аз;ицокислоты, в частности аспарагиновую и глутаминовую кислоты, валин, гистидин, изолейцин, метионин, орнитин, серии, фенилаланин, цпстеин. Нитраты использует гораздо хуже.Источники информации, принятые во внимание при экспертизе ИМПЕНЕцКИй А. Л., СОЛНцЕВа г 1, И., Брог;кая С 3. Препарат амилазы термофильных бактерий (супердиалаза), - Текстильная промышленность, 1943, М 11, с. 1.2. Авторское свидетельство СССР Ло 372257, кл. С 12 В 302, 1973.