Способ получения ингибитора сахаразы

Союз Советских Социалистических Республик(5) М, Кл.С 12 0 9/ есударствеиный кавитеСааета Мииивтрав СССво лавам изобрвтвиийи открытий(43) Опубликовано 28, (45) Дата опубликова ия описания 20.0 ИностранцыВернер Фроммер, Вальтер Пульс и Дельф Шми(ФРГ) 72) Авторы изобретения остр Байер А (ФРГ)(71) ЗаявительГ БИТОРА САХАРАЗ повышают добавлением к питательной средемвльтозы,Культйв пров ание прекращают недостижения или по достижении. сатидержания ингибитора свхаразы.Ингибитор сахаразы получают из фермеитиро.к витательных бульонов концентрацией до.1/10 - 1/20 исходного объема. с последующейлиофилизацией или осалсцением концентрирован.;ного раствора с 4-10 объемньтьвт частями оргвщ.ческого растворителя, например ацетона, или ад.сорбцией из нейтральной питательной суды инги- .бирующего действия на 0,5-4%, предпочтитель.;но 1 - 2% активированного угля и последувнцейдесорбцией с водными спиртами или ацетоном прикислых значениях рН (2-3),Затем десорбат упаривают в вакууме до 1/501/200 исходного объема (питательной среды) йосаждают органическим растворителем, напримерацетоном, Для получении более чистых препаратовпроводят предварительную адсорбцию загрязняю.щих питательную среду коричневых красителей наактивироввнном угле в количестве 1 - 2% прикислом значении рН. задолго домвльного сованнь(4) СПОСОБ ПОЛУЩНИЯ 1Изобретение относится. к области медицйньт, в ,частности к способу получения ингибитора саха разы, которая моют быть испольэовала как терв певтическое средство при лечении некоторых эабо леваний, например ожирения, гиперлипемии (атериосклероз), диабета, нредцабета, кариеса.Известен способ получения ижибиторов глю.козидвз (в том числе и ингибитора свхвразы) из фильтрата культуральной жидкости Астиюр 1 а пасеей ЗЕВ 10 .Однако получение ингибитора сахврвэы по такому способу затрудняется значительным коливством ингибитора амилазы в культуральной жид.кости.Целью изобретения является повышение выхо да целевого продукта.Это достигается тем, что выращивание осу.ществляют на бескрахмальной среде, дополнительно содержащей мвльтозу. Питательная среда без крахмала подавляет ингибитор амилазы 20По предлагаемому способу питательная среда имеет следующий состав (%): глюкоза 35, гидроли.зат каэеина 0,5, экстракт дромокей 1,3, Кз НРО 0,3, СаСО 3 0,3. Перед стерилизацией посредством КОН устанавливают рН 7,8, Выход ингибитора сахаразьу 25 ЯВАМ,--г уЪби 14 Ы%): колбу Эрленмейера и среды, содержаще м е р 3. Литровуюют 120 мл питательн ГщокозаМальтоза ляютьного 3,0 1;О 05 изат каэеина евой экстнтированнои аналогично й питательной среды полуконцентрирован. Для использования в медицинских целях препарат может быть изготовлен в форме таблеток, драже, капсул, растворов, суспенэий, гранулятов, эевательных резинок, зубных паст. Он может при. меняться и как добавка для пищевьж ила вкусо вых продуктов, Дозировка 100 - 10 000 8 Е, при. нимают один или несколько раэ. до или во время еды.П ри ме р 1. Литровую колбу Эрленмейера нанолняюв 120 мл жидкой питательной среды, содержащей (%):Глюкоза 3,5Гидролизат казвина 0,5Экстракт дрожжей 1,3СаСОэ 0,3Кг НРОа . 0,3. Дрожж рак т . 1,3 СаСОг 0,3 Кг НРО 4 . 0,3,Значение рН 7,2 перед стерилизацией посредст. вом Мзг СОа устанавливают в течение 30 мин. ,Стерющэуют при 121 С с 4 мп трехдневной предварительной культуры штамма 8 Е 50 в питательной среде, состоящей иэ 3% глицерина, 3% соевой муки, 0,2% СаСОз, полученной инкубированием в вибрационной машине при температуре до 28 С, Полу. чают культуральный бульон, содержащий после четырехдневной иикубзции при 24 С 228 Е/мл и500 А 1 Е/мл,При ме,р 4, 1 л фермепримеру 3 темно. коричнево(21 000 81 Е/л) посредством Значение рН.7,8 устанавливают перед стерилизацией при помощи КОН, Стерилизацию проводят 30 мин при 121 С с 4 мл трехдневной предваритель.ной-культуры штамма 8 Е 50 в литательной среде: содержащей 3%-йпщеринз, 3% оМвЪй муки, О,2% СаСОз и полученной инкубированием в вибрацион.ной мзшине нри 28 оС Получают культуральньй бульон, содержащий после трехдневной инкубации при 24 С 9,1 9 Е/мл и 240 АЕ/мл и после четы.10 рехдневной инкубации - 10,4 8 Е/мл и 675 А Е/мл. Приме р 2, К питательной среде по примеру 1добавляют мальтозу. в различных концентрациях, прививают и инкубируют согласно примеру 1 и 1 з получают 8 Е/мп и А 1 Е/мл, в количествах, приведенньк.в таблице.; ной азотной кислоты доводят до рН 2,5, добав 4010 г. активированного угля, 10 г фильтровал,. Эвспомогательного вещества "клярцель" и разме.шивают 10 мин. Отсасывают на путче, снабженном .слоем клярцеля 1 - 2 см высоты, и нейтрзлиэуют фильтрат аммиаком. Фильтровзльный осадок 45 удаляют. К нейтральному фильтрату добавляют1,5% активированного угля и размешивают в течение 10 мин, затем снова отсасывают на путче.Фильтрат содержит еще -10% активной сахара.зы и его выбрасывают. Если хотят испольэовать 50 также и эту остаточную активность, то адсорбируютеще раз с 0,5% активированного угля и остатки угля соединяют. Сохраняющий активность сахараэы . остаток угля промывают небольшим количеством воды и затем размешивают 3 раза по 10 мин с 5550 мл 50% ного ацетона со значением рН 2,5 (НС 2)для десорбции активности. Каждый рзэ отсасывают на путче и соединяют эти три адсорбата. В ротзцион.ном испарителе упаривают на 10 мл и, размешивая, добавляют вязкий концентрат с тем же объемом 60 (10 мл) метанола. Выпавший осадок центрифугиРедактор Н. Спиридонова Корректор С. Шекмар Тираж 574 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР ло делам изобретений и открьггнй 113035, Москва, Ж - 35, Раушская наб, д, 4/5Заказ 955/504 филиал ППП"Патент", г, Ужгород, ул. Проектная, 4 руют, Прозрачный желто-коричневый 50%.ный метанольный раствор вкалывают, размешивая, в 250 мл абсолютного ацетона. Выпавший осадок отстаивают, после декантирования темно - желтой верхней фазы поглощают абсолютным ацетоном и промывают. Отсасывают на нутче и еще каждый раз промывают абсолютным ацетоном и эфиром. Затем сушат в вакууме при комнатной температуре.Выход 850 мл с 12 500 ЫЕ/г (51% в пересчете на единицы в культуральном бульоне),Формула изобретения1, Способ получения ингибитора сахаразы путем выращивания культуры Асб пор апасееп,ЗЕ 50 на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением целевого продукта т о т л и ч а ю щ и Й с я тем, что с целью повышения выхода целевого продукта, выращивание осуществляют на бескрахмальной среде.2. Способ по п, 1, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что среда дополнительно содержит мальтозу,