Способ определения содержания амилозы в полисахариде

ь. .т ееетеео -з охи и "4ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕН ИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ42 ИО 5 Союз Советсник Социалистических Республик(32) Приоритет -Опубликовано 25,04.74. БюллетеДата опубликования описания 23 Государственный комитеСовета Министров СССРоо делам изобретенийи открытий 3) УД 1 664.2) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СО АМИЛОЗЫ В ПОЛИСАХА ЕРЖАНИЯДЕ 5 При этом в анрительно определярида,Трудоемкость иций, связанных сполисахарида в обкость и продолжиделения амилозы п олжительность опера- делением содержания превышают трудоемсть собственно опреестному способу даже прод опре разце тельно о изв Изооретение относится к методам контроля крахмалопродуктов и может быть использовано в крахмало-паточной промышленности при контроле процессов и продуктов фракционирования крахмала и в сельском хозяйстве при селекционных работах.Известен спосоо колориметрического определения амилозы в полисахариде, включающий приготовление раствора йод-полисахаридного комплекса, содержащего нормированное 10 соотношение полисахарида, йода и йодида (например, 1 мг полисахарида, 2 мг йода и 10 мг йодистого калия в 100 мл), при рН менее 11, измерение оптической плотности полученного раствора йод-полисахаридного ком плекса при 560 в 6 нм, предпочтительно около 600 ям, и определение содержания амилозы по калибровочной кривой, построенной по данным для образцов полисахарида известного состава в идентичных условиях приготовления растворов йод-полисахаридных комплексов. лизируемой пробе предваот содержание полисахапри достаточно больших количествах образцаи при высокой его чистоте (например, крахмал). При малых количествах сухого образца(например, в случае анализа единичных семян растений без ущерба для их жизнеспособности)или при низких концентрациях анализируемых растворов определение содержанияполисахарида в образце значительно осложняется, а точность анализа снижается.Цель изобретения - упростить известныйспособ за счет исключения операций, связанных с определением содержания полисахарида в анализируемой пробе.Для этого дополнительно измеряют оптическую плотность раствора йод-полисахаридного комплекса при длине волны 450 - 550 нм,предпочтительно около 500 нм, и затем содержание амилозы определяют по отношениюоптической плотности при большей длиневолны к оптической плотности при меньшейдлине вооныБ 100 м,г измеряемого раствора предпочтитепьно должно быть полисахарида 0,5 - 3 мг,йода - не менее 5 мг при мольном соотношении йодид: йод не менее 20: 1,Предлагаемый способ заключается в том,что раствор полисахарида неустановленнойконцентрации, приготовленный произвольнымспособом, смешивают с йод-йодидным раствором, получая раствор йод-полисахаридного55 60 65 комплекса с нормированным содержанием йода и йодида. Измеряют оптические плотности полученного раствора при 560 - 650 нм, предпочтительно около 600 нл 1, и при 450 - 550 нм, предпочтительно около 500 нл 1, находят отношение указанных оптических плотностей и определяют содержание амилозы по калибровочной кривой, построенной по данным для полисахаридов известного состава в идентичных условиях приготовления растворов йод-полисахаридных комплексов. При достаточном избытке йода и йодида в растворе йод-полисахаридного комплекса отношение оптических плотностей последнего, измеренных по отношению к стандартному раствору индентичного состава, но не содержащему полисахарида, при 560 в 6 и 450 - 550 нм, предпочтительно около 600 и около 500 нм, в достаточно широком интервале не зависит от концентрации полисахарида, но изменяется с изменением состава полисахарида.Измерение оптичеаких плотностеи производят на спектрофотометрах или фотоколориметрах. Лучшие результаты обеспечивает использование фотоколориметров со светофильтрами, пропускающими в областях длин волн 560 - 650 и 450 - 550 нм, предпочтительно при максимумах пропускания около 580 и около 520 нм. Это связано с меньшей чувствительностью фотоколориметров к смещению максимумов светопоглощения растворов йод-полисахаридных комплексов с изменением степени полимеризации амилозы.Предпочтительная длина кюветы составляет 20 мм. Концентрацию полисахарида в измеряемом растворе регулируют при смешивании растворов полисахарида с йодом и йодидом так, чтобы обеспечить колориметрирование в диапазоне оптических плотностей 0,5 - 1. Измеряемый раствор подкисляют соляной кислотой до рН 1. В связ 11 с тем, что оптические характеристики йодных растворов претерпевают изменения во времечи, отношение Оптических плотностей растворов йод-полисахаридных комплексов устанавливают как тангенс угла наКЛОНа лИНЕйной зависимоСти ОптичЕских плОТ- ностей, измеренных около 600 нм, от оптических плотностей, измеренных около 500 нм, графически. При этом колорпметрировапие проводят по отношению к дистиллированной воде, а измеряемый раствор непосредственно в кювете разбавляют стандартнь:м раствором. Результаты, полученные при пяти-семи рэзбавлепиях, используют при построении графика и усредняют, соединяя полученные точкипрямой.П р и мер. Приблизительно 2 - 10 мг высокоамилозного кукурузного крахмала на кончике ножа вводят в пробирку и суспензируют в примерно 3 мл дистиллированной воды, при перемешивании добавляют около 3 мл 2 н.1 аОН, полученнь 1 й раствор 1 чис выдер 5 10 15 20 25 Зо 35 40 45 50 живают,при комнатной температуре, после чего нейтрализуют 1 н. НС 1 по фенолфталеину.В мерную колбу на 50 мл вводят 5 мл 0,01 н, 3, в 1 н. КЛ, 20 - 30 мл дистиллированной,воды, 5 мл 1 н. НС 1 и при перемешивании приливают нейтрализованный раствор высокоамилозного крахмала до достижения плотной сине-зеленой окраски. Колоу доводят до метки дистиллированной водой и полученный таким образом измеряемый раствор перед колориметрированием 10 мин выдерживают при комнатной температуре,Стандарный раствор готовят смешиванием в мерной колбе на 100 мл 10 мл 0,01 н.,1, в 1 н К 1, 10 мл 1 н. НС 1 с доведением колбы до метки дистиллированной водой.Колориметрирование производят на фотоэлектроколориметре ФЭКсо светофильтрами7 (максимум пропускания при 582 нм) и5 (максимум пропускания при 490 нм) в прямоугольной кювете длиной 20 мм, Измеряемый раствор заливают в кювету и измеряют по отношению к воде оптическую плотность со светофильтром7 - Д 7 и М 5 - Д; Затем из кюветы пипеткой отбирают 2 - 3 мл измеряемого раствора, возмещая отобранную часть примерно таким же объемом стандартного раствора, и после перемешивапия содержимого кюветы стеклянной палочкой вновь колориметрируют, получая ряд значений:Д; - 0,97; 0,765; 0,64; 0,56; 0,485, Дт - 1,29; 0,905; 0,7; 0,57, 0,445.На миллиметровой бумаге строят график, откладывая по оси ординат значения Да по оси абсцисс значения Д;, для каждой пары измерений оптической плотности каждого из разбавлений измеряемого раствора. Далее через нанесенные на график точки проводят прямую и определяют ее наклон (И, =1,62).При содержании амилозы более 27% уча. сток калибровочной кривой, полученной для полисахаридов кукурузного крахмала, соответствует эмпирической формуле:А=125 (И, - 1,2),в которой А - содержание амилозы в полисахариде, ,Подставляя найденное значение И, в эту формулу, определяют содержание амилозы в анализируемом образце высокоамилозпого кукурузного крахмала:А=125 (16 - 12) =125 042=525 од Предмет изобретения 1. Способ определения содержания амилозы в полисахариде, заключающийся в смешивании пробы полисахарида с йодом и йодидом, измерении оптической плотности полученного раствора при длине волны 560 - 650 нм, предпочтительно около 600 нм, отличающийся тем, что, с целью упрощения определения, измеряют дополнительно оптическую плотность раствора йод-полисахаридного комплекса при425105 Составитель Г, Лошкарева Текред Е. Борисова Редактор Л. Народная Корректор И. Симкина Заказ 1713/472 Изд. М 782 Тираж 651 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж, Раушская наб., д, 4/5Тип, Харьк, фил. пред. ; Патент длине волны 450 в 5 нм, предпочтительно около 500 нм, и затем содержание амилозы определяют по отношению оптической плотности при большей длине волны к оптической плотности при меньшей длине волны,2. Способ по и. 1, отличающийся тем, чтов 100 лл раствора содержание полисахарида составляет 0,5 - 3 мг, содержание йода - не менее 5 лг при мольном соотношении йодид: 5 под не менее 20: 1.