Способ дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артрита

ОЮЗ СОВЕТСКИХОЦИАЛИСТИЧЕСКИХЕСПУБЛИК01 й 33/53 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ 2 е,т ния ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(71) Свердловский государственный медицинский институт(54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ПСОРИАТИЧЕСКОГО И РЕВМАТОИДНОГО АРТРИТА(57) Изобретение относится к медицин очнее к ревматологии. Цель изобрете Изобретение относится к медицине,точнее к ревматологии,Целью изобретения является повышение точности способа,Способ осуществляют следующим образом.Для исследования СРП, нерастворимыхбелков сыворотки крови (НБСК) и ЦИК получают сыворотку крови, центрифугируясвернувшуюся венозную кровь. Определение СРП осуществляют методом кольцепреципитации в стеклянных капиллярах:капилляр опускают концом во флакон с антисывороткой, набирая. его на 1/3 длиныкапилляра (3 см), протирают ваткой и набирают тем же концом исследуемую сывороткуна 1/3. длины. Покачивают капилляр, перемешивая реагенты и погружают в пластилин. свободный конец капилляра так, чтобы уровень жидкости В ней был выше пластилинана 10 мм. Учет реакции проводят через 24часа. Выпадение преципитата в капилляре повышение точности способа, У больных производят забор крови и определение в ней уровня С- реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов, В лимфоцитов, нерастворимых .белков сыворотки крови, а также функцию тимуса, вычисляют дифференцировочный коэффициент и при его значении менее 0 диагностируют псориатический артрит, а при его значении более 0 - ревматоидный артрит, По сравнению с прототипом увеличивается точность дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артритов.-,3 юв и свидетельствует о наличии СРП в сыворотке .больного, оценивают в мм.Определение ЦИК проводят методом О ПЭГ-приципитации, основанном на селек тивной преципитации комплексов антигенантитело (АГ-АТ) в 3,75ПЭГ споследующим фотометрическим определе- в нием плотности преципитата. Для проведе- ( ) ния реакции готовят два раствора: раствор М 1 - 0,1 М боратный буфер РН - 8,4 (3,410 ъ, г борной кислоты и 4,275 г буры растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1,0 л); раствор М 2 - 10,0 г ПЭГ - 6000 растворяют в 240,0 мл раствора М 1. Ход : реакции: 0,3 мл сыворотки крови вносят в пробирку, добавляют 0,6 мл раствора Ь 1, перемешивают и переносят в пробирку, добавляют 0,6 мл раствора М 1, перемешивают и переносят по 0,3.мл в 2 пробирки. В одну из них приливают 2,7 мл раствора Ь 1 (контроль), в другую - ,7 мл раствора М 2 (опыт). Содержимое перемешивают и оставляют на 60 мин при комнатной темперащ)е, 1807413после чего определяют плотность на спектрофотометре СФв кювете 1 Х 1 при длине волны 450 нм, Высчитывают разность показаний оптической плотности между опытом и контролем, результат умножают на 1000 получают количество ЦИК в 100 мл сыворотки крови, За положительный результат принимают значения более 156 единиц.Определение НБСК, основным компонентом которых являются иммуноглобулины М и 6, ЦИК грубодисперсные белки, проводят исследуя свежую сыворотку крови. К 0,5 мл сыворотки добавляют 4,5 мл дистиллированной воды, через 30 мин измеряют оптическую плотность нефалометрически при 400 нм на ФЭК (кювета 10 мм) против воды. Затем добавляют 0,13 мл 1 М йаС (конечная концентрация 0,025 М), затем еще 0,26 мл этого же раствора (0,072 М), через 10 мин после каждого добавления КаС учитывают убыль оптической плотно.сти. Величина, на которую уменьшилась плотность после первого добавления МаСсоответствует 1 и 2 фракции НБСК, Фракцию 3 получают после добавления 0,52 мл 1 М ИаС (0,154 М - физиологическая система). Величина, на которую уменьшилась оптическая плотность после третьего добавления соответствует третьей фракции НБСК. При расчете суммы трех фракций НБСК остаточную оптическую плотность не учитывают. Единицы оптической плотности переводят в условные единицы умножением на 1000. За положительный результат принимают значения более 17 ед,Для определения В-лимфоцитов в функции тимуса исследуют венозную гепаринизированную кровь: в пробирку с 50 ед гепарина забирают 2 мл из локтевой вены перемешивают кровь и выделяют лимфоциты на градиенте плотности фиколл-гипак (Ртагваса Швеция), плотность 1,077, наслаивая на 2 мл фикола 4 мл разведенной 1: 1 раствором Хенкса крови. Пробирки центрифугируют 40 мин при 1500 об/мин (400) после чего извлекают лимфоциты из интер фазы и отмывают раствором Хенкса 2 раза по 10 мин при 100 об/мин, Концентрацию клеток доводят до 2 - 4 Х 10 /мл средой 199,Определение В-лимфоцитов проводятметодом розеткообразования с эритроцитами барана в системе ЕАС-РОК. Для приготовления ЕАС-комплексов смешивают 1 мл 1 % эритроцитов барана и 1 мл кроличьей гемолитической антисыворотки против эритроцитов барана в суббагглютинирующем разведении, Смесь инкубируют 40 мин при 37 С, осторожно встряхивая каждые 10 мин, После чего эритроциты 3 раза отмывают раствором Хенкса при 1500 об/мин 10 мин, Супернатант отбрасывают, а к осадку добавляют первоначальный объем раствора 5 Хенкса и равный объем мышиной сыворотки, содержащей комплемент в разведении 1 : 10, Смесь инкубируют при 37" С в течение 30 мин, вновь отмывают 3 раза раствором Хенкса готовят 0,5 .суспензию эритроци- "0 тов, Далее к 0,1 мл взвеси лимфоцитов добавляют 0,1 мл сенсибилизированных эритроцитов (соотношение эритроцитов к лимфоцитам 20; 17) инкубируют 45 мин при 37 С, после чего 30 мин в холодильнике и 15 производят подсчет лимфоцитов, присоединивших 3 и более эритроцитов. Результат выражают в %, За положительный результат принимают значения выше 12,7 %.Определение функции тимуса проводят 20 после выделения лимфоцитов как описановыше, В пробирку М 1 и М 2 наливают по 0,2 мл 2 Х 10 суспензии лимфоцитов, добавляют 0,2 мл 0,5 % взвеси эритроцитов барана, центрифугируют 5 мин при 1000 об/мин, затем пробирку М 1 - тотальные Е-РОК - помещают в холодильник на 18 ч, а пробирку М 2 - комплексные Е-РОК - в термостат при 37 С на 1,5 ч, после чего суспендируют энергичным встряхиванием до получения гомогенной взвеси, осаждают при 1000 об/мин - 5 мин и инкубируют 18 часов в холодильнике 4 С. Подсчет Е-РОК производят под микроскопом как и определении В-РОК. Вычисляют отношение Е- тотальных 35 и Е-комплексным и при снижении отношения количества лимфоцитов по сравнению с нормой определяют снижение функции тимуса. А при повышении отношения и снижения количества лимфоцитов несущих 40 и не несущих Е-рецептор определяют повышенную функцию тимуса. Формула для расчета функции ти муса:Х 66, снижение функЕ - комплексная45 ции тимуса принимают при значении менее0,75.Полученные значения 5 параметровподставляют в формулу:50 Х = 0,944 ХА 1+ 0,013 Х А 2+ 0,083 ХХ Аз - 0,046 Х А 4 - 0,22 Х А - 3,41,где А 1 - уровень СРП (мм)55 Аг - уровень ЦИК (усл. ед.)Аз - уровень В-лимфоцитов (%)А 4 - уровень НБСК (усл, ед,)Аь - функция тимуса30 Х = 0,944 Х 4+ 0,013 Х 206+ 0,083 Х Х 18 - 0,046 Х 29,5 - 0,22 Х 0,355 - 3,41 Х =+ 3,1, что свидетельствует о наличииу больной диагноза РА, Данные клинического обследованиябольной(утренняя скованность, симметричСоставитель Л,СергееваТехред М.Моргентал Корректор Н.Кешеля Редактор С.Кулакова Заказ 1377 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 м+ 0,944. + 0,013, + 0,083, - 0,046, - 0,22, -3,41 - выявленные коэффициенты соответственно к А 1, А 2. Аз, А 4, А;, и при.значении ХЮменее О диагностируется ПА. а при значенииХ более 0 диагностируется РА,Способ иллюстрируется следующим образом,П р и м е р 1, Больная К 40 лет, страдает полиартритом в течение 6 месяцев. Показатели иммунной системы: СРП 1 мм; ЦИК79 ед В-лимфоциты - 3 ; НБСК - 10 ед,;функция тимуса - 2,16, Подставка значенияпоказателей в формулу получаем: Получают значение Х = -2,13, что указывает на принадлежность больной к группе больных ПА, Из анамнеза выявлено, что больная в течение 12 лет страдает кожными проявлениями псориаза, что подтверждено наличием псориатических бляшек.П р и м е р 2, Больная Н 68 лет, страдает полиартритом в течение 3 лет, Показатели иммунной системы; СРП 4 мм: ЦИК 206 ед.; В-лимфоциты 18 ; Н БСК 29,5 едфункция тимуса 0,335. Используя формулу получаем: ный артрит проксимальных межфаланговых суставов), а также наличие ревматоидного фактора в крови в титре 1/64 подтверждают правильность расчетов по формуле.5 Предложенный способ дифференциальной диагностики применен у 10 больных, в. 100случаев было распознано то или иноезаболевание, т, е. ПА или РА. По сравнению с прототипом увеличивается точность спо соба при осуществлении дифференциальной диагностики ПА и РА,15 Способ дифференциальной диагностики псориатического и ревматоидного артрита, включающий забор крови, определение циркулирующих иммунных комплексов, уровень С-реактивного белка, о т л и ч а ю щ и й 20 с я тем, что, с целью повышения точностидиагностики, в крови дополнительно определяют уровень нерастворимых белков сыворотки крови, В-лимфоуитов и функцию тимуса, рассчитывают дифференциальный 25 показатель по формуле где Х - дифференциальный показатель; А 1 - уровень С-реактивного белка; А 2 - количество циркулирующих иммунных комплексов; Аз - количество В-лимфоцитов; Ад - уровень 35 нерастворимых белков сыворотки крови; Ая- функция тимуса,