Способ получения оксидазы l-аминокислот

ОЮЗ СОВЕТСКИХО.ИАЛИСТИЧЕСКИХЕГПУБЛИК 804478 91 ия)5 С 12 М 9/ фмру АТЕНТ венный универси.Е.Багдасарянн у Я Вас 1 егоо 9 тво СССР2, 1985,Я ОКСИДАЗЫ 1 Дрожжи Сапдбали на питательнлюкозу 10 г/л;жжевого автолизат/л; М 9304 х 7 Н 20г/л; йаС 0.12 г/л 1 горсаз ой среде, О -аланин а 20 мл/л;0,62 г/л, рН среды П ример ДНвыращи содержащей: 3,63: осадок др КН 2 Р 04 1,232 СаСх 2 Н 20 0,1 5,5. ГОСУДАРГТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИАМИНОКИСЛОТ Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению ферментных препаратов,Цель изобретения - повышение выходаи повышение активности оксидазы :аминокислот, сокращение времени культивирования дрожжей рода Сапйда.Указанная цель достигается тем, что вспособе, предусматривающем выращивание дрожжей рода Сапс)ба на жидкой питаельной среде, содержащей источник углерода, минеральные соли, О -изомер аминокислот и стимулятор роста, В качестве стимулятора роста используют осадок дрожжевого автолизата после центрифугирования в течение 15 мин при 6000 об/мин, при этом соотношение количества общего азота О:изомера аминокислоты и осадка дрожжевого автолизата составляет (5,65- 6,5):1.Составленный анализ заявляемого решения с прототипом показывает, что заявляемый способ отличается от известного(57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению ферментных препаратов, Сущность изобретения: осуществляют культивирование дрожжей рода Сапбс)а на питательной среде, содержащей источник углерода, минеральные соли, О - аминокислот и стимулятор роста, В качестве стимулятора роста используют осадок дрожжевого автолизата, полученный после центрифугирования в течение 15 мин при 6000 об/мин, Соотношение количества общего азота О- иэомера аминокислоты и дрожжевого автолизата составляет (5,65 - 6,50):1. 4 табл,тем, что в качестве стимулятора роста используют не дрожжевой автолизат, а осадок дрожжевого автолизата, который обраэовывается после центрифугирования дрожжевого автолизата, при 6000 об/мин в течение 15 мин и О -изомер аминокислот; при этом соотношение общего азота О -изомера аминокислоты и осадка дрожжевого автолизата составляет (5,65-6,5):1. Соотношение общего азота О -аланина и осадка дрожжевого автолизата составляло 6,5:1, а аминного азота осадка 38:1, Дрожжи рода Сапбба выращивали при аэрации на круговой качалке при 220 об/мин Температура выращивания 30 С. Через 12 ч культи(7044 / О Таблица 1 Удель. нап ак. тивность фермен- та Соотношение азота осадка автоли.затэ и азота соединений в сре- е Биомасса Выход ферментаКоличество осадка дрожжевого автолизата в питательной среде Количества источника лзота. г/лДрожжи Эконо- мк/мольмич, ка. на мг зффиц, белка г/л Актив.НОСТЬ НЭ 100 мг сухих ожжей общего аминно. го(М Низ 504 (г(Н 4 д 504 (гзН 41 т 504 Д.-Ала Д(,-Ала Д.-Ала ДС-Вал ДС-ВалС-Вал 1:38 1:ЗЗ 1:38 1:ЗЗ 1:38 1:ЗЗ 0.015 0.017 0.015 0.017 0.015 0.17 0,0860.099 .0,860.0990,0860.099 го 23 20 3.63 0.5355 ( 055823 550 0.6604.77 0.571 20 4.66 О 558 23 Таблица 2 Количество осадка дрожжевого автопиэата в питательной среде Соотношение азота осадка автолизатэ и азота соединений в среБиомасса Удель. нап активность фермен- та Источник азатаг/л мк/моль на мг белка к обще. АктивНОСТЬ Нд 100 мг сухих ожжеи к амин. номуСааббаТГО(Сд 5КзО 3.10 2.69 263 4.20 3.62 3,55 5.50 4,77 4.66 о о 0 0 о о оо О.О 15 0,017 0.015 0.017 0.015 0,17 0.086 0.099 0.86 0.099 о.овб 0.099 1:38 1.ЗЗ 1:38 1:ЗЗ 1:38 1:ЗЗ 20 23 20 23 го 23 1 22.536,00 21,7 27.15 следы1 Б,5 29 60 1 Б 0 22 9 вирования дрожжей удельная активность фермента составила 38,5 мкмоль/мг белка.П р и м е р 2, Способ осуществляли как в примере 1, но использовали ОЕ-аланин в количестве 3,55 г/л. Количество осадка дрожжевого автолизата 23 мл/л. Соотношение общего азота осадка автолизата 5,65:1, аминного 33:1. Удельная активность фермента - 32,8 мкмоль/мг белка.П р и м е р 3. Способ осуществляли как в примере 2, но в качестве источника азота (индуктор оксидазы-аминокислот) в среде использовали ОЕ-Валин 4,77 г/л. Удельная активность фермента 18,9 мкмоль/мг белка.П р и м е р 4, Способ осуществляли как в примере 1, но в качестве продуцента использовали дрожжи Сапбйа 1 горсаИз К. Удельная активность фермента 22,5 мкмоль/мг белка,Предлагаемый способ обеспечивает хороший рост дрожжей рода Сапбба. Сокращает время культивирования и позволяет синтезировать оксидазу-аминокислот,В табл, 1 представлены результаты биосинтеза оксидазы :аминокислот дрожжами рода СапсИба С. сгор(саИз ДН - 3) с О-изомерами аминокислот в питательной среде после 12 ч роста); в табл, 2 - результаты биосинтеза оксидазы-аминокислот дрожжами рода Сапб(ба (С, 7 горСаИ 5 Кз) нд питательной среде с О -изомерами аминокислот после 12 ч роста): в табл, 3 - результаты биосинтеза оксидазы -аминокислот 5 дрожжами рода Сапбба (С. 91(И(еггпопбйВКВл У - 42) с О -изомерами аминокислот в питательной среде (после 12 ч роста); в табл.4 - результаты биосинтеза оксидазы -аминокислот дрожжами рода Сапб(ба (С. "0 спечаИег 66) с О.-изомерами аминокислотв питательной среде (после 12 ч роста). Формула изобретения Способ получения оксидазы -амино кислот, предусматривающий выращиваниедрожжей рода СапсИба на жидкой питательной среде, содержащей источник углерода, азота, минеральные соли и стимулятор роста, о т л и ч а ю щ и й с я тем. что. с целью 20 повышения выхода и активности оксидазы-аминокислот, а также сокращения времени культивирования дрожжей, в качестве источника света используют О(-изомер аминокислоты, в качестве стимулятора рос та - осадок дрожжевого автолизата, полученный после центрифугирования в течение 15 мин при 6000 об/ин, при этом количество общего азота О(-изомера аминокислоты и остатка дрожжевого автолиза та устанавливают в соотношении 5,65-6,5:1.Копичесэео истОм мика азота,г/лв аиде в аиде соелиме. азотае видев виде в виоастео- ч общего амим гэа нл/л ( азота го аз к обще. х амин му мому 1.их/мольма мгбелка Актив ность ма 100 мг Сткик,дрожжаэр о г(п Зкоисмич коэффиц демо.отаг/л мий 1 г/и э 0.086 0 099 1 0860 099 20 23 20 го 2 Э 142 0.65 126 0,84 0 086 0.099 Т а б л и ц а 4 Дрожжи И Количество источ мика азота, г/л сточмиказота Количество осадка дрожхге. вого автолизата в питательной среде Соотношение азота осадка автолидага и азота соедимемий в сре Биомассе Удаль. иав вк тив ность фермент- ев Вмход фврмемтаа видеобщегоазота.г/и в виде амииио го азота.г/л г/и к амииномумкмоль иа мг белка Сапгтэе О/Н Ь а спеча 11 ео 66//4 Н 4/э 504Л/Нк)1 504ДБ-АлаД 1.-лла ДС-Ала ДС-Вал Д 1. - Вал 4 77 ( 0.571 4 66 0.558 1.-Вал СоставительРедактор А, Купрякова Техред М,Моргентал Ко ектор Н. Гунькорр Заказ 1071и отк ытиям при ГКНТ ССС РВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при113035, Москва, Ж, Раушская наб., 45 Производственно-издательский комбинат Патент;, ро,т" г, Ужго дл.Гагарина, 101 СалемаЮНк)э 50 т 1оцигге эгэнк),50 эпэлпЮ, (Г(НкЬБОк41.-АпаДг -АлаД 1-АлаДС-ВалДС - ВапБ-Вал 3 10бп 263 .4 20 эбг 3.55 550 4 77 4 66 0 боО 0 570 0 558 0 660 0 570 0 558 0.660 О 571 0.558 20 23 20 23 20 23 0,086 0,099 086 О 099 0.086 0 099 0 015 0 017 0 015 0.017 0 015 0.017 0.015 0.017 0.015 0.017 0,015 0.017 1 б 50 15 65 16.50 1:5.65 1:6.50 1 5.65 1 ( 138133 138 1:ЗЭ 1 ЭБ 1.ЭЗ 1:Э 8 1:ЗЭ 1:38 133 1:38 133 19 3.3 3.4 О.Э 3,18 3,25 .0.25 285 2.90 2.2 Э.75 4,01 0.25 4.48 4,70 0.25 3,50 Э,Б 5 190 ЗЭО Э 4.0 3.1 31.8 32.5 2.5 28.5 29.0 гг37,540,12,544,847,0 2.535,036.5 0ООследи0,730,35спедз0.620.47 и00001,210,8601.000,71