Способ определения сенсибилизации к эпихлоргидрину

)5 0 01 й 33/60 К АВТОРСКОМУ ЕТЕЛЪСТВ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНВЕДОМСТВО СССР(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ К ЭПИХЛОРГИДРИНУ(57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и гигиене труда и профессиональной патологии, и может быть использовано для выявления сенсибилизации организма обследуемых к эпихлоргидрину в профилактических учреждениях.Известны способы определения сенсибилизации к эпоксидным смолам и их аллергенным компонентам путем накожных аппликаций нативных смол, их растворов в органических растворителях и их аллергенных компонентов (М.П.Пушкарь. Основные вопросы гигиены труда при производстве и применении компаундов на основе эпоксидных смол. Эпихлоргидрин, его токсиколого-гигиеническая характеристика и значение в гигиенической регламентации новых эпоксидных смол.Способы, описанные в вышеуказанных работах, недостаточно специфичны и надежны, особенно при определении сенсисенсибилизации к эпихлоргидрину в профилактических учреждениях. Целью изобретения является повышение точности способа. Сущность; используют коньюгат эпихлоргидрина и человеческого сывороточного альбумина, состоящий из 14 моль Щ 2-гидрокси-хлора) пропиленовых групп на 1 моль альбумина человека (М.М. 67 кДа), ставят реакцию бластной трансформации с меченым Н-тимидином с лимфоцитами пезриферической крови и при увеличении числа импульсов в 5-10 раз по сравнению с контролем определяют наличие сенсибилизации к эпихлоргидрину. билизации у лиц, подвергшихся ингаляционному воздействию летучих продуктов Ф эпоксидных смол. Кроме того, при их применении существует опасность провоци- а рования клинических проявлений сенсибилизации, усиления и генерализации имеющегося аллергоза.Известен способ выявления сенсибилизации к эпихлоргидрину, предложенный , Ф" О.Г.Алексеевой, Л.А.Дуевой (Аллергия к про мышленным химическим соединениям. - М.: д Медицина, 1978, 272 с.). В предложенном способе дпя определения сенсибипизеции к)бе эпихлоргидрину используется классический метод реакции специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) периферической крови, в котором в опытные пробирки добавляли рабочую дозу эпихлоргидрина. Уче реакции проводился морфологически путем подсчета числа лейкоцитов в камере Горяева в опытной пробе (с добавлением эпихлоргид1783441 4рина) и контрольной пробахсфизраствором воде. Оно содержит 2,94% хло а, 14,4 и последующего вычисления показателя . азота. Средняямолекулярнаямасса 67 кДа, РСЛЛ в процентах по соответствующей Ее определяли после проведения электро- формуле. Однако данный способ недоста- фореза в полиакриламидном геле в приточно точен, поскольку для постановки ре сутствии додецилсульфата йа по известной акции в качестве антигенаиспользуется методике (О.К, аеав. Сеача 9 е о 1 чистый эпихлоргидрин, являющийся по су- зтгос 1 ога рготеп сцгпд тЛе аззепчЫу Ве ществу гаптеном. Данный способ не обес- Ьеаб оГ ЬайФегорйаде Т 4//йа 1 цге, 1970,- печивает достаточно надежного выявления Ч.227, -М 559. -Р.680-685. Молекулярная сенсибилизации к эпихлоргидрину. Зача масса интактного сывороточного альбумина стую у обследуемых лиц получают отрица кДа. Интактный и модифицированный тельный результат на фоне имеющегося у белок после проведения электрофореза выних аллергоза(степень выявления аллергии ходит одной полосой. Полученные данные по данному способу составляет 70-81 Я. свидетельствуют о том, что в процессе гидЗто связано с тем, что эпихлоргидрин явля роксипропилирования ковалентная струк-, ется гаптеном и приобретает свойства пол- тура белка сохраняется.ноценного антигена после. присоединения к С целью повышения точности определемолекуле белка-носителя., ния сенсибилизации к эпихлоргидрину исЦелью изобретения является повыше- пользуют полученный вышеописанным ние точности за счет использования конъю способ коньюгат эпихлоргидрина бу гата э ии хлоргидрина с альбумином на сыворотки человека в реакциибластсыворотки человека, полученном алкилиро- - ной трансформации с мзс меченым, вания эпихлоргидрином донорского сыво- Н-тимидином с лимфоцитами периферичероточного альбумина по а -аминогруппе и ской крови обследуемых и при увеличении е-аминогруппам лизина (14 молей И (2-гид числа импульсов в 5-10 раз по сравнению с .рокси-хлор) пропиленовых групп на 1 контролем определяют сенсибилизацию к моль альбумина (М;м, - 67 кДа). эпихлоргидрину.Способ получения коньюгата осуществ- Способ осуществляется следующим обляется следующим образом, Для получения разом. Из 10 мл стерильной периферичестрогоспецифического коньюгатаэпихлор ской крови обследуемых пациентов и гидрина и альбумина сыворотки человека в доноров с гепарином путем центрифугирореакционной смеси берется соотношение вания в градиенте плотности фиколл-верогреагентов из расчета 1 моль эпихлоргидри- рафин (оптическая плотность - 1,077) на на 1 моль свободных аминогрупп в моле- выделяется взвесь стерильных лимфоцитОв, н ю сн-со (.ю,н со )Ы+5 Бснгсн-снгс"ерильньх условиях в пробирки куле белка по схеме; 35 В боксе в ствносится по 1,0 мл среды ЯРМ, котораясн;ин1готовится из расчета в 100 мл бидистиллирок ь . ванной воды растворяется навеска 1536 мг.с-сн;сн-снрн-сн-со-(нн-сн-со) ыСреда ЯРМ также с Н 4,76 /,снв .,40 10 оэмбриональной телячьей сыворотки,50 сн -мн-сн,-сн-сн-с 1 ед/мл пенициллина и 50 ед/мл стрептомицина. В контрольные пробирки вносится поСывороточный альбумин человека со,.1 мл взвеси лимфоцитов - 5,0 х 106 кледержит одну концевую аминогруппу и 55 ток/мл среды и 0,1 мл разведенного 1:100 остатков лизина с первичными аминогруп специфического антигена, Коньюгат эпи- пами в боковых цепях. Первичные аминог- хлоргидрина и альбумина сыворотки челоруппы альбумина.(56 аминогрупп на 1 века вносится только в опытные образцы. макромолекулу белка) легко реагируют с Лимфоциты культивируются в термостате зпихлоргидрином с образованием й-гидро- притемперагуре 37 ОСвтечение 24-48 часов. ксихлорпропилированных производных 50 После этого в пробирки как в опытные, так альбумина. - ": ":и в контрольные вносится строго равное коРеакция проводится при температуре личество меченого Н-тимидина (0,025 мкл 18-25 С в водной среде с последующей от- на 1 пробу). Через 24 часа после внесения гонкой воды в вакууме при температуре не метки содержимое каждой пробирки фильтпревышающей +35 С и сушкой в вакууме до 55 руется с помощью вакуумного насоса через постоянного веса. Полученный (2-гидро- специальнье миллипоровые фильтры, прокси-хлор) пропилированный альбумин мывается трихлоруксусной, дистиллирован- представляет собой светло-серое кристал- ной водой и фиксируется 96 этиловым лическое вещество, хорошо растворимое в спиртом. После этого с каждого фильтра,1783441содержащеголимфоцитыизотдельныхпро- контакта с химическими веществами не бирок, считывается число импульсов. Всего имеет.с помощью предложенного способа было Общий анализ крови: СОЭ 5 мм/час, обследовано 45 пациентов и 20 доноров. гемоглобин 150 г/л; лейкоциты 6,0 х 105/л; Точность выявления сенсибилизации к эпи лимфоциты 25%; юные 0; палочкоядерные хлоргидрину составляет 92%. 0;сегментоядерные 65%; эозинофилы 2%;Способ подтверждается следующими моноциты 8%.примерами; РБТЛ: Число импульсов. Контроль -П р и м е р 1. Обследуемый К-к В.Д, 2849,5. Опыт - 3071.1934 г,р.,мужчина, работаетвконтакте 10 Таким образом, число импульсов в с эпихлоргидринсодержащими смолами в опытных образцах со специфическим анти-. течение 23 лет. Общий анализ крови: СОЭ 7 геном с эпихлоргидрином) практически не мм/час, гемоглобин 134 г/л; лейкоциты превышает количества импульсов в конт,4 10 /л; лимфоциты 32%; юные 1%; па- рольных образцах, Следовательно, у данно 6лочкоядерные 4%; сегментоядерные 48%; 15 го пациента не выявлена сенсибилизгция к эозинофилы 10%; моноциты 5%; эпихлоргидрину и эпоксидным смолам.РБТЛ; Число импульсов. Контроль - Всего с помощью предлагаемого спосо. Опыт - 55324, ба обследовано 45 больных и 20 лиц, в проТаким образом, число импульсов, в цессе своей трудовой деятельности не опытных образцах повышено в 10 раз по 20 контактировавших с эпоксидными смолами сравнению с контрольными, следовательно, и эпихлоргидрином. Точность выявления у данного пациента выявлена сенсибилиза- сенсибилизации к эпихлоргидрину составция к эпихлоргидрину, ляет 92-95%, Тогда как по способу, описанП р и м е р 2. Обследуемый Р-й В,Пному в качестве прототипа к данной заявке мужчина, 1940 г.р., работает в контакте с 25 О.Г, Алексеевой, Л;А. Дуевой, Алерргия к эпихлоргидринсодержащими смолами в те- промь 1 шленным химическим соединениям. - чение 5 лет. Больной предьявляет жалобы М.: Медицина, 1978, -272 С., выявляемость на одышку, зуд кожи лица и рук, Предпола- (точность) определения сенсибилизации к гаемый диагноз - астматический бронхит, эпихлоргидрийу составляет не более 70-81%, аллергический дерматит. 30 Формула изобретения.Общий анализ крови: СОЭ 4 мм/час, Способ определения сенсибилизации к гемоглобин 140 г/л; лейкоциты 6,8 х 108/л, эпихлоргидрину путем добавления к лейколимфоциты 30%; юные 1%; палочкоядер- цитам периферическойкровичеловекаэпиные 3%; сегментоядерные 44% эозинофи- хлоргидрина с последующим учетом лы 9%; моноциты 13%. 35 результата, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, сРБТЛ; Число импульсов. Контроль - целью повышения точности способа, из пе, Опыт - 24359. риферической крови выделяют лимфоциты,Таким образом, число импульсов в а эпихлоргидрин используют в коныогате, опытных образцах со специфическим анти- полученном путем алкилирования эпихлоргеном превышает практически в 10 раз чис гидрином альбумина сыворотки человека по ло импульсов в контрольных пробах. а-аминогруппеие-аминогруппамлизина(14 Следовательно, у данного обследуемого вы- молей М-(2-гидрокси-хлор)пропиленовых явлена специфическая сенсибилизация к групп на 1 мольальбумина - М.м.67 кДа,и эпихлоргидрину. учет результата ведут по реакции бластнойз45 трансформации лимфоцитов меченых Н-тиП р и м е р 3. (Контроль). Обследуемый мидином и при увеличении числа импульсов Р-а В.Г., мужчина 1938 г.р., работает сбор- в 5-10 раз по сравнению с контролем опрещиком-клепальщиком, профессионального деляют сенсибилизацию к эпихлоргидрину.Составитель Л.Куюн Редактор Т.Козлова Техред М.Моргентал Корректор Л.Ливринц Заказ 4512 ТиражПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101