Способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов

)САНИЕ И О ЕТЕНИЯ унолоаний и шение зываюимф гает образо кур, на игеном и комп- Лимфоты кур, связав- нтигенсты кури вающи- нтигенсоде субп ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОВЕДОМСТВО СССР(71) Научно-исследовательский институтэпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней и Научно-исследовательский институт глазных болезней(56) Уоуфсури М.Ю. Антигенсвязывающиелимфоциты, их взаимосвязь с субпопуляциями Т-клеток и значение для иммунодиагностики ревматизма, Дисс, канд. Ташкент,1986.(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНВЯЗЫВАЮЩИХ ЛИМФОЦИТОВ Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для диагностики различных заболеваний и оценки вакцинального процесса. Появление энтигенсвязывающих лимфоцитов является одним из признаков иммунного ответа,Известен способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов путем розеткообраэования с эритроцитами (обычно бычьими), нагруженными соответствующим антигеном, Способ сопровождается контролем, при котором реакцию проводят с ненагруженными эритроцитами. Способ позволяет определять содержание антигенсвяэывающих лимфоцитов,Недостаткм способа является его неточность, обусловленная невозможностью определения антигенсвязывающих лимфоцитов отдельньх субпопуляций и удельного(57) Использование: медицина, им гия, диагностика различных заболе вакцинального процесса, Цель: пов точности определения антигенсвя щих лимфоцитов, Сущность изобр определение антигенсвязывающих цитов Т, В, Д и О субпопуляций даст проведением смешанного розетка вания с реагентами - эритроцитами груженными соответствующим ант частицами зимозана, нагруженным лементом; и эритроцитами барана, циты, связавшие только эритроци являются О антигенсвязывэющими; шие эритроциты кур и барана - Т э вязывающими; связавшие эритроци частицы зимозана - В антигенсвязы ми; связавшие все три реагента - Д а связывающими. ржания антигенсвязывающих клеток в опуляциях лимфоцитов.Цель изобретения - повышение точности способа эа счет выявления антигенсвя.зывающих лимфоцитов в Т,В,Д и О субпопуляциях лимфоцитов.Способ осуществляется проведением смешанного розеткообразования, в котором участвуют одновременно эритроциты барана, частицы зимоэана, нагруженные комплементом, и нагруженные соответствующим антигеном эритроциты кур. В контрольном смешанном розеткообразовании вместо сенсибилизированных антигенов применяют несенсибилизированные куриные эритроциты, Лимфоциты, связавшие только сенсибилизированные куриные эритроциты (не менее 3), относятся к нулевым (О) антигенсвязывающим;. связавшие, кроме того, эритроциты барана (не менее 3)Процентное содержание (средняя и ее средняя квадратическая ошибка) антигенсвяэывающих лимфоцитов каждой субпопуляции определяли подсчетом 7 сотенлимфоцитов порознь. Антигенсвязывающие лимфоциты данной популяции считали выявленными только в случае достоверного (Р 0,05) превышения их содержания над содержанием лимфоцитов той же субпопуля 55- к Т-антигенсвязывающим, связавшие не менее 3 сенсибилиэированных эритроцитов кур и не менее 3 частиц зимозана - к В-антигенсвязывающим: связавшие не менее 3 бараньих эритроцитов, 3 частиц зимозана и 5 Л сенсибилизированных эритроцитов кур - двойным (Д) антигенсвязывающим лимфоцитам, Лимфоциты, связавшие не более двух индикаторных частиц каждого вида (эритроциты барана, эритроциты кур, зима эан), относят к нулевым, не связывающим , антиген; связавшие только эритроциты барана (не менее 3) - к Т, антиген не связывающим; лимфоциты, связавшие только частицы зимозана (не менее 3), - к В, анти ген не связывающим; лимфоциты, связавшие не менее 3 эритроцитов барана и 3 частиц эимозана, - к Д; антиген не связывающим. Антигенсвязывающие лимфоциты определенных субпопуляций считают выяв ленными, если их содержание. достоверно превышает содержание клеток тех же субпопуляций, связавших в контрольном смешанном розеткообразовании ненагруженные куриные эритроциты. Удельное со держание антигенсвязывающих клеток в определенной субпопуляции лимфоцитов определяют по отношению антигенсвязывающих клеток и всех лимфоцитов той же субпопуляции, Распоеделение антигенсвя зывающих лимфоцитов по субпопуляциям рассчитывают, принимая общее количество антиген связы ва ю щих лимфоцитов за 1000 .П р и м е р 1, По предлагаемому способусмешали 0,1 мл взвеси в растворе Хенкса 35 лимфоцитов(2 10 кл/мл) больной Г, сдиагбнозом мастит, выделенных из крови во 2 и в 9 дни заболевания, и 0,3 мл смеси, содержащей О,З 10 эритроцитов барана, 0,08 сен 7сибилизированных частиц зимоэана и О,Зх 40 х 10 нагруженных тейхоевой кислотой золотистого стафилококка (в контроле - ненагруженных) эритроцитов кур в 1 мл. Смесь выдерживают 5 мин при 37 С, центрифугировали 5 мин при 1500 об/мин и дополни тельно в течение 1 ч выдерживали при 4 С, Клеточную суспензию наносили на обезжиренное предметное стекло. Готовили мазок, Мазок высушивали на воздухе, фиксировали метиловым спиртом 15 мин и окрашивали 50по Романовскому-Гимэа ции, связавших ненагруженные эритроциты кур.При обследовании больной Г. с диагнозом мастит на второй день болезни выявлено 1,14+0,140 Т и О 86+0 340 О антитенсвязывающих лимфоцитов, В и Д антигенсвязывающие лимфоциты не определены. Удельный вес антигенсвязывающих лимфоцитов в Т, В, Д и О субпопуляциях равен 2,8; 0; 0: 2,2% соответственно, а распределение антигенсвязывающих лимфоцитов по Т, В, Д и О субпопуляциям составило 57, О, О и 430 соответственно. На 9 день заболевания количество Т антигенсвязывающих лимфоцитов снизилось до 0,43.ф 0,30%, содержание О антигенсвязывающих лимфоцитов практически не изменилось (0,43-ф 0,20%), но появились В антигенсвязывающие лимфоциты (0,57+ +0,20%), Д антигенсвязывающие лимфоциты не выявлены. Удельный вес антигенсвязывающих лимфоцитов в. Т, В, Д и О субпопуляциях оказался равным 8,1; 3,3; 0 и 2,2 соответственно, а распределение антигенсвязывающих лимфоцитов по Т, В, Д и О субпопуляциям составило соответственно 30, 40, 0 и 300 , Полученные параметры повышают точность определения антигенсвязывающих лимфоцитов и диагностическое значение результатов, По способу-прототипу общее содержание антгенсвязывающих лимфоцитов оказалось тем же, что и сумма антигенсвязывающих лимфоцитов всех субпопуляций по предлагаемому способу, но по способу-прототипу антигенсвязывающие лимфоциты различных субпопуляций, удельное содержание антигенсвяэывающих лимфоцитов в каждой субпопуляции и экстенсивное распределение антигенсвяэывающих лимфоцитов по субпопуляциям определить невозможно,Аналогичные данные получены при обследовании 10 больных маститом,П р и м е р 2, Обследовали больную С. с диагнозом глаукомы открытоугольной 1 стадии, Эритроциты кур нагружены антигеном трабекулярной ткани, вовлекаемой в глауком ный процесс.Предлагаемый и известный способы дали одинаковые значения (17,3%) содержания антигенсвязывающих лимфоцитов у больной. Но предлагаемый способ, в отличие от известного, позволил, кроме того, определить антигенсвязывающие лимфоциты различных субпопуляций, У обследованной больной 7,30 антигенсвязывающих лимфоцитов являлись Т. 1,0% - В, 87 ь - 0 и 1,00- Д клетками, Кроме того, предлагаемый способ позволил оценить удельное1778705 Составитель В. ЗайцевТехред М.Моргентал .Корректор С, Патрушева Редактор Заказ 4191 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и.открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 содержание антигенсвязывающих лимфоцитов в каждой субпопуляции; 28, 19, 12 и 100 в Т, В, О и Д субпопуляциях. Обеспечена также воэможность оценить распределение лимфоцитов по субпопуляциям: 42; 6;46 и 6 антигенсвязывающих лимфоцитов относились соответственно к Т, В, О и Д субпопуляциям,Аналогичные данные получены при обследовании 39 больных первичной глаукомой,П р и м е р 3, При обследовании 10 человек, иммунизированных протейной химической вакциной, обнаружены антигенсвязывающие (к протею) лимфоциты Т, В и О субпопуляций, причем в динамике иммунного ответа с 5 по 17 день после начала вакцинации содержание В антигенсвяэывающих лимфоцитов увеличилось больше (с 0,29 до 0,71 фД), чем Т антигенсвяэывающих лимфоцитов (с 0,71 до 1,00;).Таким образом, предложенный способ дал возможность определить антигенсвяэывающие лимфоциты в различных субпопуляциях лимфоцитов, удельное содержание их в каждой из таких субпопуляций и экстенсивное распределение антигенсвяэыващих лимфоцитов по определенным субпопуляциям для уточнения стадии заболевания и иммунного ответа, что существенно важно для уточнения диагноза и оценки срока заболевания, назначения лечения и оценки 5 давности вакцинации.Формула изобретения Способ определения антигенсвязывающих лимфоцитов путем проведения реакции роэеткообразования лимфоцитов с эритро цитами, нагруженными соответствующимантигеном, с последующей регистрацией реакции, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа путем выявления антигенсвязывающих лимфоци тов в Т, В, Д и О субпопуляциях лимфоцитов,осуществляют смешанное розеткообразование лимфоцитов с эритроцитами барана, частицами эимозана, нагруженными комплементом, и эритроцитами кур, нагружен ными антигеном, и при связыванииэритроцитов кур и барана определяют Т-антигенсвязывающие лимфоциты, при связывании эритроцитов кур и зимозана - И-антигенсвязывающие лимфоциты, эрит роцитов кур, барана и эимозана - Д-антигенсвязывающие лимфоциты, а связывание эритроцитов кур - О-антигенсвязывающие лимфоциты.