Способ диагностики миастении

(57) Изобретение относится к именно к неврологии, Цель и повышение точности способ берут кровь и определяют в н пролактина, соматотропного лимфоцитов и активных Т-ли числяют диагностический ко при его значении большем 2,4 ют миастению, По сравнению снижается частота ошибочных 15,120/. медицине а зобретения - .Убо о ей количество гормона, Т- мфоцитов, выэффициент и диагностирус прототипом диагнозов на институтЮ,Э.Журов,В,В.Бойко и ССР 1982. ИАСТЕНИ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, неврологии и грудной хирургии, и может быть использовано для диагностики миастении.Целью изобретения является повышение точности диагностики.Способ осуществляют следующим образом: у больного определяют содержание соматотропного гормона (СТГ), пролактина (П), Т-РОК общих лимфоцитов (Т-Л") и Т-РОК активных лимфоцитов (аТ-Л), рассчитывают . диагностический коэффициент по соотношению произведения количества Т-Л на концентрацию П и на 0,01 к произведению содержания аТ-Л на концентрацию СТГ и при величине диагностического коэффициента большем 2,4 диагностируют миастению.Для определения уровня пролактина крови используют набор Н ("СЕАВЕЯогп"), содержащий стандартный пуепарат пролактина, пролактин, меченный 3, анти 1 т сыворотку к пролактину, иммуносорбент, 0,05 М фосфатный буферный раствор, твин. Плазму для тестирования берут в нативном виде или разбавляют фосфатным буферным расгвором. Из основного раствора стандарта пролактина 50 нг/мл) последовательным разведением в фосфатном буферном растворе готовят еще шесть растворов для построения стандартной кривой 20,10,5,2,1 и 0,5 нг/мл. В тест-пробирки вносят 0,1 мл исследуемой плазмы, 0,1 мл буферного раствора, 0,1 мл раствора меченого гормона и 0,1 мл антисыворотки к пролактину. Для контроля связывающей способности готовят "нулевые" пробы (0,2 мл буферного раствора, 0,1 мл меченого гормона и 0,1 мл антисыворотки) и пробы на общую радиоактивность (0,1 мл меченого пролактина). Пробирки инкубируют при комнатной температуре в течение 18 - 20 ч, по окончании инкубациидобавляют по 0,5 мл суспензии иммуносорбента, которую при этом непрерывно перемешивают с помощью магнитной мешалки. Пробирки закрепляют во вращающемся штативе и содержимое перемешивают в течение 5 ч при комнатной температуре. Пробы центрифугируют 10 мин при 2500, супернатант отсасывают водоструйным насосом. Осадок промывают 2 2,5 мл фосфатного буферного раствора, содержащего 0,5% таина, повторно центрифугируют и удаляют супернатантРадиоактивность осадков и пробы на общую радиоактивность измеряют в стин 1778704тилляционном гамма-счетчике, Связывание меченного гормона в "нулевых" пробах составляет 15 - 30 О. Вычисляют процентное отношение радиоактивности проб к радиоактивности нулевой пробы и строят стандартную кривую, по которой затем находят искомое содержание пролактина в пробе и с поправкой на разведение в плазме,Уровень СТГ определяют при помощинабора, содержащего стандарт соматот 1 оопина человека. Соматотропин меченый )з 1антисыворотку к СТГ, преципитирующую кроличью антисыворотку против у-глобулинов морской свинки, боратный буферный раствор. Плазму гепаринизированной крови разводят буферным раствором в три раза или больше в зависимости от ожидаемого уровня СТГ. Из основного раствора стандарта СТГ готовят последовательным разведением в буфере растворы со следующими концентрациями гормона 5, 2,5, 1,25 и 0,5 нг/мл. В 1 - 2-ю тест-пробирки вносят по 0,1 мл буфера (нулевые пробы), в 3 - 12-ю по 0,1 мл стандартных растворов немеченого гормона, в остальные по 0,1 мл разведенной плазмы. Во все пробирки добавляют по 0,1 мл антисыворотки, Содержимое перемешивают, инкубируют 6 ч при 37 С, после чего по все пробирки вносят по 0,1 мл меченого СТГ, ИнкуРируют 18 ч при 37 С, Во все пробирки добавляют по 0,1 мл преципитирующей антисыворотки. Пробирки встряхивают и инкубируют 1 ч при 37 С, центрифугируют 10 минут при 2000, супернатант декантируют, Преципитат промывают 0,5 мл буферного раствора, центрифугируат 1 и декантируют. Радиоактивность преципитатов измеряют в сцинтилляционном гамма-счетчике, Вычисляют процентное отношение радиоактивности проб к радиоактивности нулевой пробы и по стандартной кривой с поправкой на разведение плазмы находят искомую коКцентрацию СТГ.Для количественного определения Тлимфоцитов используется тест спонтанного розеткообразования, заключающийся в присоединении эритроцитов барана к лимфоцитам и периферической крови человека, Для постановки данной реакции лимфоциты выделяют из цельной гепаринизированной крови в градиента плотности верографинфиколла. Смесь готовят, прибавляя 9,68 г.фиколла к 20 мл 76 О верографина и 132 мл горячей дистиллированной воды. Полученную из локтевой вены кровь (2 - 3 мл) разводят двукратно раствором Рингера и . наслаивают на 2 мл приготовленного фиколла. Уравновешенные для фракционирования крови центрифугируют 20 мин при1500 об/мин, В результате центрифугирования эритроциты с гранулоцитами оседают на дно, сверху остается лимфоцитарное кольцо и надосадочная жидкость. Надоса дочную жидкость сливают, лейкоцитарноекольцо отсасывают шприцем и переносят в другую пробирку, Л.имфоциты отмывают дважды питательной средой и подсчитывают количество клеток Горяева. Для непос,редственной постановки реакции к 1 мллимфоцитарной вэвези добавляют 0,1 мл эритроцитов барана, приготовленных следующим образом: к 5 мл питательной среды 199 прибавляют 0,025 мл (1 капля) отмытых 15 эритроцитов барана, инкубируют в термостате при 37 С в течение 5 мин. Центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин. Готовят нативный препарат под покровным стеклом и подсчитывают Т-РОК активные клетки под 40 45 0 01 х 688 х 35 1,86 х 1650 55 20 25 30 световым микроскопом. Инкубируют в холодильнике при температуре 4 С 6 мин, Подсчитывают Т-РОК активные клетки.Путем вычисления диагностического коэффициента определяют наличие или отсутствие у больного миастении, Диагностика миастении считается достоверной при К 2,4, коэффициент является специфичным для данной патологии.П р и м е р, Больной М., 28 лет, поступил с жалобами на мышечную слабость, периодически возникающие приступы удушья, Больной анастезирован. Неоднократно обследовался ранее, диагноз установлен не был, Осмотрен невропатологом - заподозрено наличие у больного миастении, рекомендовано дифференцировать с миастеническими синдромами миастению. При диагностике миастении по содержанию цинка в моче больного диагноз подтвержден не был. Проведено комплексное обследование больного, включающее определение уровия П, СТГ, Т-Л, аТ-Л крови, Выявлено, что уровни этих показателей составили, соответственно, 688мМЕ/л;1,86 мМЕ/л, 35 ф, 16;.Согласно формуле изобретения произведен расчет диагностического коэффициента: Учитывая, что диагностический коэффициент представлял собой величину, превышающую значений 2,4 достоверно диагностирована миастения. В последующем при пневмомедиастинографии и интраоперационно диагноз был подтвержден,Реализация способа позволяет повысить точность диагностики миастении эа1778704 Составитель В, ЗайцевТехред М. Моргентал Корректор Е. Папп Редактор Заказ 4191 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 счет повышения частоты правильно установленных диагнозов на 22,63 О, снижения частоты ошибочных диагнозов на 15,12 О, снижения частоты неустановленных диагнозов на 7,51 оь. а также проводить дифференциальную диагностику с миастеническими синдромами (например, амиотрофический склероз. рассеянный склероз и др,),Способ рекомендован для широкого клинического внедрения,Формула изобретения Способ диагностики миастении, включающий биохимическое исследование биологической жидкости, о т л и ч а ю щ и й с я 5 тем, что, с целью повышения точности спо.соба, у больного берут кровь, определяют в ней количество пролактина, соматотропного гормона, содержание Т-лимфоцитов и активных Т-лимфоцитов, вычисляют 10 диагностический коэффициент, и при его величине выше 2,4 диагностируют миастению,