Способ определения оптимальной лечебно-профилактической дозы цитотоксичных сывороток

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 19) 111) К 39/00 151) 5 ИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯСВИДЕТЕЛЬСТВУ ОПИСАН АВТОРС ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(56) ИоФфе В.И, и др. Общая иммунологическая реактивность организма. Л.; Медицина, 1979, с. 40-50,Нестерова А.И. и др. Лечебное действиеантиретикулярной цитотоксической сыворотки, М.: Медгиз, 1.946, с. 30,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОПТИМАЛЬНОЙ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙДОЗЫ ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ СЫВОРОТОК(57) Изобретение относится к лекарствам имедикаментам, применяемым в ветерина-.рии и медицине; а именно к определениюдозировки антиретикулярной и других цитоИзобретение относится к лекарствам и медикаментам; применяемым в ветеринарии и медицине, а именно, к определению дозировкиантиретикулярной (АЦС) и других видоспецифических цитотоксических сывороток.:;Целью изобретения является повышение чувствительности способа.Техника ориентировочного определе-.ния дозировки заключается в следующем.Цитотоксическая сыворотка, напримерАЦС или пневмотропная цитотоксическая сыворотка, разводится изотоническим раствором, например физиологический раствор натрия хлорида в разведении 1:600, что .соответствует примерному титру реакции связывания комплемента (РСК) 1:60-1:80, в токсических сывороток. Цель изобретения - повышенйе чувствительности способа, Определяют оптимальную лечебно-профилактическую дозу цитотоксйческих сывороток постановки внутрикожных проб на 1 - 2 животных с различными разведениямисывороток до предельйого, вызцвавщего местную реакцию через 3-6 ч, которую принимают за титр, используемый для определения дозы на 1 кг массы животного, затем дозу уточняют по изменению реактивности организма на подкожное введение разных доз, близких к расчетной, причем эа оптимальную принимается доза, вызывающая максимальное повышение реактивности по внутрикожной пробе до и через 1 - 2 дня после введения цитотоксической сйворотки. Данный способ позволяет в 2 раза сократить потери телят от респираторнйх заболеваний и на 1 - 3 кг повысить их приросты,отношении 1:800, 1:1000, 1:1200 и т,д. Одновременно готовятсятакие же разведения аналогичной неиммунной нормальной сыворотки (контроль),Титрация может проводиться непосредственно в хозяйстве на 1-2 клинически здоровых животных. При этом на одном и том же животном ставится до 10 и более проб различных разведений сывороток с таким же количеством контролей. Местом введения у крупных животных, например крупный рогатый скот, лощади, является область шеи, у овец в .бесшерстный участок кожи, область паха, локтевого сустава, подхвостовые складки,После подготовки операционного поля и дезинфекции мест иньекции спиртом ректификатом различные разведения АЦС или другой цитотоксической сыворотки вводятся начиная с наибольццего разведения внутрикожно в дозе по 0,2 мл. Одновременно в симметричные участки кожи в тех же дозах и разведениях вводится нормальная, неиммунная, сыворотка. У крупных животных, крупного рогатого скота, перед введением препаратов йроизводится измерение кожной складки при помощи штангенциркуля,Учет результатов реакции проводится при введении сывороток при помощи иглы через 3-6 ч, а при помощи безигольного инъектора - через 6-9 (сроки естественного угасания реакции на г обой раздражитель).За титр цитотоксической сыворотки принимается предельное ее разведение, при внутрикожном введении которого в дозе 0,2 мл на месте инъекции возникает реакция (утолщение кожной складки, отек, эритема), при полном отсутствии реакции или при выраженности ее не менее чем в 3 раза слабее, на месте введения аналогичной нормальной сыворотки.На основании полученного титра проводится ориентировочный расчет лечебно- профилактической дозировки этих препаратов, при этом на каждый 1 кг живой массы берется 2 мл титровых единиц, например при титре АПС или пневмотропной сыворотки тканей овец или крупного рогатого скота величиной 1;1000, лечебно-профилактическая доза на 1 кг веса животного будет равна 2 мл:1200=0,0017 и т.д, Оттитрованная таким способом сыворотка перед применением разводится изотоническим раствором (например 1:10) и вводится подкожно в дозах сучетом ее титра, разведения и живой массы животных. Например, при титре сыворотки 1;1000, разведении 1:10 и веса телят 50 кг она составит в среднем на 1 животное:0,002 млх 10 х 50=1,0 мл.Для уточнения дозировки вычисленная путем титрации с применением внутрикожной пробы доза уточняется путем изучения изменения общей иммунологической реактивности под действием различных доз изучаемой сыворотки,Уточнение дозировки проводится на нескольких группах животных - аналогов (например, 6 групп по 2 - 3 животных в каждой группе) путем введения им различных доз изучаемой цитотоксической сыворотки, При этом за среднюю берется доза, вычисленная для данных животных на основании титрации. Так, если при титре кожной пробы 1:1000 (что, примерно, соответствует титру РСК 1;100) средняя доза для животных весом в 50 кг составляет 1,0 мл сыворотки, разведенной 1:10, то вводимые в разных5 101520 группах дозы могут составлять: 1 группа - 0,4 мл, 2 группа - 0,6 мл, 3 группа - 0,8 мл, 4 группа - 1,0 мл, 5 группа - 1,2 мл, 6 группа - 1,4 мл,Перед подкожным введением сыворотки и затем на 2 или 3-й (можно на 6-й) день после ее введения у животных проверяется общая реактивность путем постановки внутрикожной пробы с применением гистамина или любой, специфической для данного вида животных, цитотоксической сыворотки. Применяется она в дозе 0,2 мл в удвоенном титре (например, при титре 1:1000 в разведении 1:500). В такой же дозе и титре, для контроля вводятся нормальные сыворотки.Первичное и повторное введения сывороток проводятся в удаленные друг от друга симметричные участки кожи, например при первичной постановке внутрикожной пробы и затем, после учета реакции, подкожном введении сыворотки с правой стороны шеи, повторная постановка внутрикожной пробыпроводится с левой стороны, Учет реакции вобоих случаях проводится в те же сроки и по25 тем же критериям, как и при указанной титрации сыворотки, а результаты, полученнь 1 епри первичной и повторной постановке пробы, сопоставляются,За оптимальную дозу сыворотки прини 30 мается количество ее, при подкожном введении которого обеспечивается на местевнутрикожной инъекции возникновение наиболее выражейной, по сравнению с первичной, реакции на повторное введение35 цитотоксической сыворотки.Проводят исследования 3 серий кроличьих (2 серий АЦС для крупного рогатогоскота и овец и одна остеотропная для овец)цитотоксических сывороток, а также40 овечьей и ослинной антипульмональных(пневмотропных) сывороток для крупногорогатого скота. Всего в процессе отработкиметодики титрации и уточнения дозировкибыло использовано 20 овец и 172 головы45 крупного рогатого скота (в том числе на 75телятах). Исследования показали, что данная внутрикожная проба по своей чувствительности более чем в 10 раз превосходитизвестный метод РСК(например, при титре,50 РСК равном 1:100-1:110 титр внутрикожнойпробы колеблется в пределах 1;12001:1280). Постановка реакции не требует специальных условий, легко выполнима, а читкаее почти полностью исключает субъекти 55 виэм, так как пределы разведений сывороток, обеспечивающих выраженную местнуюреакцию, четко прослеживаютея. Например, при титрации АЦС или пневмотропной цитотоксической сыворотки на животных с хорошей реактивностью (здоровые телята в1754112 Составитель Е.ДмитриченкоРедактор Н.Швыдкая Техред М.Моргентал Корректор О.Кравцова Заказ 2831 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 45 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 возрасте 3 - 12 мес) при полном отсутствии изменений на месте введения нормальной сыворотки (контроль), среднее утолщение кожной складки на их введение могут составлять в разведениях; 1:800 - 4 мм, 1;1000 - 4 мм, 1:1200 - 3,5 мм, 1:1400 - О мм, 1;1600 - 0 мм, 1:1800 - 0 мм (с колебаниями у различных животных - 1 мм). У слабых животных реакция может проявляться утолщением кожной складки на 2-3 мм, однако в разведении 1:1400 она также полностью исчезает. За титр в данных случаях принимается разведение 1;1200.При подкожном введении различных доз этих сывороток (титр 1:1280 в разведении 1:10) 32 телятам весом 60-70 кг разница в утолщении кожной складки на внутрикожное введение этих препаратов (разведение 1:640) до и на 2 - 3-й день после подкожного их применения составила; при дозе 0,2 мл - 0,0 мм; 0,4 мл - 0,0 мм; 0.6 мл - 1,0 мм; 0,8 - 2,3 мм; 1,0 мп - 2,5 мм; 1,2 мл - 1,0 мм; 1,4 мл - 0,5 мм; 1,6 мл - 0,0 мм (колебания У разных животных - 2 мм),Проведенные данные подтверждают наличие корреляционной зависимости между живой массой организма и необходимой дозировкой.Надежность данных методов определения дозировки сывороток подтверждена результатами применения пневмотропной цитотоксической сыворотки в расчетных дозах на поголовье свыше 3200 телят различного возраста. Использование его позволяет бо лее чем в 2 раза сократить потери телят отреспираторных болезней и на 1-3 кг повысить их среднемесячные привесы.Формула изобретения Способ определения оптимальной ле.10 чебно-профилактической дозы цитотоксических сывороток путем постановки реакции связывания комплемента с антигенами; в качестве которых используют применяемые для гипериммунизации материалы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышениячувствительности способа, дополнительно проводят постановку внутрикожных проб на 1 - 2 животных с различными разведениями сывороток до предельного, вызывающего 20 местную реакцию через 3 - 6 ч, которую принимают за титр, используемый для определения дозы на 1 кг массы животного, а затем дозу уточняют по изменению реактивности организма на подкожное введение разных 25 доз, близких к расчетной, причем за оптимальную принимают дозу, вызывающую максимальное повышение реактивности по внутрикожной пробе до и через 1-2 дня после введения цитотоксической сыворот ки.