Способ консервации сыворотки против сальмонеллеза животных

ООЗ СОВЕТСКИ ОЦИАПИСТИЧЕС РЕСПУБЛИ 15 А 61 К 39/40 я 1,Е(57) Область исп микробиология хранение сывор ротки. Сущность сервации сывор животных основ ротке вещества консерванта исп ленэмина, котор по окончании плазмы, вводя включенной ме А 61 К 39/02 нию и контроентной сывоелят, поросят, ССР, 1971, СЫ ВОРОТКИ ЖИВОТНЫХ оротки. Одна и венные недостате раствора феноко 10% и тем самым в препарате проител, фенол облащим деиствием, льно влияет на иммуноглобулиЦель иэобретности сывороткибавления, упрощВ описываемсыворотки протипутем добавленсыворотке консеЭто достигнусерванта использэтилензмина.Способ осущразом,о вляется следую окончании к сыворот ной меша плазм включ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР Е ИЗОБРЕ ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(56) Патент США йг 4058599. к1977,Инструкция по изготовлелю антитоксической поливалротки против сальмонеллеза тягнят, овец и птиц. Утв, ГУВ С(54) СПОСОБ КОНСЕРВАЦИИПРОТИВ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к способам консервации сывороток для их последующего использования.Известны различные способы консервации сывороток и других. биопрепаратов, например, способ консервации эритроцитарных диагностикумов путем добавления 4;,-ного раствора формалина в фосфатнобуферном растворе. Ха каждые 10 мл диагностикума добавляют 1 мл раствора формалина,Недостатками такого способа являются разбавление препарата консервантом и снижение его активности иэ-за токсичности формалина, значительная сложность техпроцесса приготовления консерванта.Известен также и используется в микробиологической промышленности наиболее близкий к предлагаемому способ консервации сыворотки против сальмонеллеза животных, полученной открови волов-продуцентов, гипериммунизируемых поливалентным сальмонеллезным формалантигеном путем добавления к сыворотке 50-ного раствора фенола из расчета 10 см ользования: ветеринарная консервация сывороток,отак, гипериммунные сывоизобретения: способ конотки против сальмонеллеза ан на добавлении к сыво-консерванта, В качестве ользуют раствор димерэтиый добавляют к сыворотке процесса дефибринации его в дефибринатор при шалке,раствора на 90 см сыв3этот способ имеет сущестки; добавление к сывоооткла разбавляет ее науменьшает концентрациютивосальмонеллеэных антдает сильным раздражаювысокотоксичен, отрицатспецифическую активност ения - повышение актива счет уменьшения ее разние способа.ом способе консервации сальмонеллеза животных я к дефибринированной ванта.о тем, что в качестве конуют водный раствор димер роцесса дефибринации е в дефибринатор при ке добавляют 0,4 вод 777886ного раствора димер этиленэмина - 1,2 аминоэтил-азиридина - (ДЭ И),Мешалку оставляют включенной на 57 мин для равномерного распределения вещества в сыворотке, Затем сыворотку 5перекачйвают из дефибринатора в отстойник и подвергаютотстою, В дальнейшемполученный препарат подвергают необходимой обработке в соответствии с действующей технологической инструкцией, 10Водный раствор димера этиленэмина(структурная формула)СН 2И-С Н 2-С Н 2-й Н 2,СН 2 15элементарная формула СН 10 К 2 по внешнему виду - прозрачная бесцветная жидкость.Массовая доля димерэтиленэмина в растворе не менее 150 , водородный показатель неболее 13, 20Предлагаемый способ консервации сыворотки ДЭИ прост, доступен, преемлемдля биофабричного производства, не требует затрат на приобретение оборудования.высокой квалификации работников, не усложняет технологический процесс производства сыворотки.П р и м е р 1. От 10 волов-продуцентовбрали кровь из расчета 16 см на 1 кг массы3животного, Кровь от каждого продуцента 30смешивали в общей емкости и затем путемсепарации от плазмы отделяли форменныеэлементы. Г 1 лазму дефибринировали, Полученную сыворотку разделили на две равные части по 23 л. Одну часть сыворотки 35законсервировали 570-ным раствором фенола, добавив его из расчета на 90 см" сыворотки 10 см раствора по известномуспособу-прототипу, а другую часть препарата - 20%-ным водным раствором димерэтиленэмина, добавив 4 см раствора наз99,6 см препарата После двухмесячногоотстоя сыворотку подвергли стерилизующей фильтрации,Затем сыворотку, обработанную фенолом и димерэтиленэмином, в параллельномопыте испытали на стерильность, безвредность и активность методами предусмотренными ТУ 46-21-45-74.В результате было установлено, что сыворотка, консервированная предложеннымспособ, т,е. путем добавления к препарату0,4 раствора димеоэтиленэмина, оказалось стерильной, безвредной, активной,т,е,отвечала требованиям ТУ и не уступала по 55качеству сыворотке, обработанной фенолом,П р и м е р 2. Из сырья, предназначенного для изготовления производственнойсерии препарата, взяли две пробы сыворотки по 1 л каждая, Одну пробу(М 1) законсервировали существующим способом-прототипом, а другую пробу (М 2) предложенным способом, т.е. к сыворотке добавили 20%- ный водный раствор димерэтиленэмина из расчета 0,4: на 99,6 см сыворотки 4 см консерванта, Сыворотку обоих проб после двухмесячного отстоя простерилизовали путем фильтрации и проверили на стерильность, безвредность и активность.Стерильность сыворотки проверяли путем высева на питательные среды; МПЛ, МПБ, МППБ, среду Сабуро. Среды выдерживали при 37 - 38 С 10 сут. В течение этого срока в средах не было роста микроорганизмов, Сыворотка проб ММ 1,2 оказалась стерильной.Для проверки на безвредность сыворотку вводили подкожно, белым мышам массой 16 г в дозе 0,5 см и мозоским свинкам массой 350 г в дозе 10 см, На каждую пробу сыворотки использовали по 5 мышей и 3 свинки, За подопытными животными вели наблюдение в течение 10 сут. Морские свинки и мыши остались клинически здоровыми и-живыми, т,е, сыворотка проб М 1 и М 2 была безвредной.Контроль активности сыворотки проводили на голубях и белых мышах, Голубям сыворотку вводили внутримышечно в дозах: 0,5; 0,1; 0,02; 0,004 и 0,0088 см . Мышам препарат иньецировали подкожно в дозах;0,1; 0,02; 0,004; 0,0008 и 0,00016 см . На каждую дозу использовали не менее пяти голубей и мышей.Спустя 2 ч после введения сыворотки проб М.1 и М 2 опытных животных заражали минимальной смертельной дозой сальмонелл соответствующего серотипа, Одновременно заражали контрольных животных, которые не получили сыворотки, За опытными животными вели наблюдение в течение 20 сут, учитывая павших и выживших, Затем по методу Кербера в модификации Ашмарина рассчитали величинч 50%,-ной иммчнизирующей дозы сы воротки (ИД 50) для лабораторных животных, Было установлено, что ИД 5 о сыворотки пробы М 1 соответствовала в отношении Я.сп.зцз 0,022 см, Я.бцЫп 0,023 см, Я.т,пзцггцгп 0,019 см, сыворотки пробы М 2 0,014; 0,012; 0,015 и 0,013 см соответственно, Следовательнозсыворотка, консервированная раствором димерэтиленэмина (проба М 2) активнее, чем сыворотка, консервированная фенолом (проба М 1),П р и м е р 3, К 2100 л сыворотки добавили в качестве консерванта 0,4(8,4 л) раствора димерэтиленэмина. Для равномерного распределения консерванта в сы1777886 Составитель А. МедведевТехред М.Моргентал Корректор А. Долинич Редактор 3. Ходакова Заказ 4150 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 воротке включали механическую мешалку на 5-7 мин. Затем сыворотка отстаивалась при 2-15 С два месяца. После отстоя сыворотку фильтровали и исследовали на стерильность, безвредность, активность методами, предусмотренными ТУ 46-21-45- 74. Было установлено, что сыворотка стерильная, безвредная, активная, отвечает требованиям ТУ, годна к практическому применению,Таким образом, использование в качестве консерванта димерэтиленэмина по предлагаемому способу позволяет значительно (в 25 раэ по сравнению с прототипом) уменьшить разведение сыворотки и повысить ее активность, упростить технологию консервации. Способ обеспечивае надежную консервацию сыворотки, 5 Формула изобретенияСпособ консервации сыворотки противсальмонеллеза животных путем добавления к дефибринированной сыворотке консерванта при перемешивании, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышенияактивности сыворотки за счет уменьшения ее разбавления и упрощения способа, в качестве консерванта используют водный раствор димерэтиленэмина.15