Способ определения иммунных нарушений при ревматоидном артрите

СОЮЗ СОВЕТСКИХсоциАлистическиРЕСПУБЛИК 1 й 33/5 1 Й КОМИТЕТЯМ И. ОТКРЫТИЯ ГОСУДАРСТВЕ ГЮ ИЗОБРЕТЕ ПРИ ГКНТ ССС 1 09 ИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН ТОР У СВИДЕТЕЛЬСТ 54 л тносится ко иммунологиименно ных наруш е (РА). Изобретение оцины, в частностиним болезням,диагностики иммувматоидном эртри бласти меди- и и внутренспособам ний при ре(21) 4789546/14; 4789683/14(71) Казанский медицинский институт им.С.В,Курашова( ) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУННЦХНАРУШЕНИЙ ПРИ РЕВМАТОИДНОМ АРТРИТЕ) Использование: изобретение относится бласти медицины, в частности к иммуногии и внутренним болезням, и может быть Целью изобретения является повышение точности определения.Поставленная цель достигается применением Н СТ-теста восстановления нитросинеготетраэолия нейтрофилами с использованием индифферентного стимулятора - зимоэана в лекарственных препаратах, используемых в терапии заболевания: иммунодепрессанта проспи- дина и иммуномодулятора диуцифона,Предлагаемый способ реализуется следующим образом,В индуцированном НСТ-тесте исследуемая реактивность клеток фагоцитарной системы в ответ на стимуляцию препаратами, имеющими разнонаправленное действие на.БЦ( 1746316 А 1 использовано в оценке иммунологических нарушений при ревматоидном артрите. Целью изобретения является повышение точности определения. Поставленная цель достигается исследованием реактивности нейтрофилов в индуцированном НСТ-тесте с использованием в качестве стимуляторов иммунодепрессантов и иммуномодуляторов. По характеру стимуляции оценивается состояние иммунитета, Высокая активация клеток только иммунодепрессантами сводетельствует о гиперактивации В-лимфоцитов, недифференцированная высокая активация клеток иммунодепрессантами и модуляторами иммунитета свидетельствует о гипоактивном типе нарушения. иммунную систему; иммунодепрессант про-, спидин и иммуностимулятор диуцифон.,Реактивы: гепарин 100 ед/мл в фосфатном буфере, фосфатный буфер рН 7,0-7,2, стимуляторы: зимозан 10 г/мл, проспидин 10г/мл, диуцифан 10г/мл,0,2 раствор нитросиний тетразолий (НСТ), метанол, 20 раствор метилового зеленого.Ход реакции: стенки лунок смачивают гепарином. Для опыта (спонтанная реакция) в первую лунку заливают 0,1 мл крови, 0,05 мл буфера и 0.05 мл НСТ.Стимулированная реакция: вторую лунку наполняют 0,05 мл зимозана, третью 0,05 мл проспидина, четвертую 0,5 мл диуцифона в указанных концентрациях и по 0,05 мл КСТ в каждую лунку. Далее планшет помещают в термостат на 30 мин при 37 С. Через 30 мин из каждой лунки готовят мазки по общепринятой методике и красят их метиленовым зеленым 15 мин, Считают в каждом мазке процент клеток, восстановившихНСТ а диформазан, который в виде синихглыбок откладывается в цитоплазме нейтрофилов, ядра которых окрашены в бледно-зеленый цвет. Вычисляют индекс активациипо соотношению количества клеток, восстановивших НСТ в индуцированном и спон- .танном тестах.У 22 больных наблюдалась высокая активность процесса, высОкий титр ревматоидндго фактора, ЦИ К, 1 д, внесуставн ыепроявления заболевания, что было оцененокак состояние патологической активации Влимфоцитов, требующее иммунодепрессивной терапии, У этой же группы больных впредлагаемом тесте ИА нейтрофилов составили: 7,3 - 2,2 на проспидин и 2,8-0,3 на диуцифон, В 10 таких случаях терапияпроспидином была проведена со значительным клиническим эффектом,П р и м е р 1, Больная М.Н., 48 лет.Поступила в клинику с жалобами на боли вовсех суставах, невозможность передвигать.ся из-за опухоли коленных суставов, утреннюю скованность в течЕние дня, похуданиена 6 кг за месяц. Считает себя больной втечение 3 лет, когда после переохлажденияпоявились боли и припухлость в мелких суставах кистей. Лечилась стационарно, установлен диагноз РА. Постоянно принимаетНПВП, периодически физиолечение, Последнее ухудшение состояния связывает спростудой.Обьективно: состояние средней тяжести, больная не ходит самостоятельно, питание пониженное, кожа и слизистыебледные, иктеричнце. Отмечается незначительная дефигурация суставов кистей и коленных суставов за счет экссудативныхявлений. Ограничены движения в локтевыхи плечевых суставах из-за болей, Увеличеныподчелюстные и подмышечные л/узлы доразмера 1,5 - 1,5 см, мягкие, безболезненные, подвижные. Изменений со сторонывнутренних органов не обнаружено,Лабораторные данные; СОЭ 42 мм/ч;Нв 8,6; Л 7000 мм и 4; с 56; л 27; м 13; СРБ; ДРФ; 1 дА 2 Б; 1 дМ 4,0; 1 дб 16,1.Рентгенологическая стадия 11,Индекс активации в Н СТ-тесте: 1,6; 0,3;2,8 на зимозан, диуцифон и проспидин соответственно. ГиперреактивМый тип нарушения,Диагноз: РА с системными проявлениями, серопозитивный, активность 11,медленно прогрессирующий, 11 стадия,Ф Н 11.Проведено лучение проспидином посхеме, НПВП, фйэиолечение, ЛФК. Состояние улучшилось, исчезли боли в суставах,утренняя скованность, сохраняются незначительное экссудативные явления в коленных суставах, Лабораторные данные: СОЭ34; СРБ+; ДРФ+; дА 0,1; дМ 1,0: 1 дО 8,1.У 10 больных с невысокой активностью5 процесса, нормальными или чуть измененными иммунологическими показателямина фоне длительной терапии НПВП и глюкокортикоидами, ИА в индуцированномНСТ-тесте были одинаково высоки как на10 иммунодепрессанты, так и на стимуляторыиммунитета и составили; 7,5+ 4,5; 2+ 7,7;7,8+ 2,8 на диуцифон, проспидин и зимозансоответственно. Такой недифференцированный ответ клеток на эти препараты сви 15 детельствует об утрате функциональнойпластичности нейтрофилами на фоне длительного подавления синтеза эндогенногокортизола у больных и указывает на необходимость проведения иммуностимуля 20 ции, В пяти таких случаях терапиядиуцифоном дала значительный клинический эффект.П р и м е р 2. Больная Ч,А., 45 лет.Поступила в клинику с жалобами на боли в25 мелких суставах рук, локтевых суставах, чувство утренней скованности в течение 1,5 ч,Считает себя больной 4 года, Заболела после перенесенной ангины, когда появилисьболи в мелких суставах рук. Лечилась стаци 30 онарно, поставлен диагноз: РА, ПринималаНПВП и физиотерапию.Объективно: состояние удовлетворительное, кожа и слизистые розовые, чистые,дефигурация суставов не отмечается, не 35 сколько затруднены движения в локтевыхсуставах из-за болей, Изменений внутренних органов не ббнаружено.Лабораторные данные СОЭ 33; Нв 10,7;Л 6700 мм; и 4; с 58; л 28; м 16; э 4; СРБ;40 ДРФ; ЦИК 0,038; 1 дА 2, 6; дМ 1,0; 1 дб11,1.Рентгенологически определяется 11 стадия заболевания.Диагноз: РА, суставная форма, серопо 45 зитивный, активность 1, медленно прогрессирующее течение, стадия, ФНО.Индекс активации в НСТ-тесте составил: 12,0; 5 и 12,5 на эимозан, проспидини диуцифон соответственно, Гипореактив 50 ный тип нарушения. Проведено лечениеНПВП, физиотерапия, ЛФК, диуцифон, посхеме.После лечения состояние улучшилось,исчезла утренняя скованность, боли в суста55 вах, восстановилась функция локтевых суставов, Лабораторные данные: СОЭ 24 мм/ч;СРБ-; ДРФ+; ЦИК 0,03.Таким образом, способ позволяет болеецеленаправленно определять тип нарушения и проводить лечение,1746316 Составитель И,БашкаевТехред М.Моргентал Корректор: Н.Король Редактор Н.Бобкова Заказ 2392 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 Формула изобретения Способ определения иммунных нарушений при ревматоидном артрите путем исследования иммуннокомпетентных клеток крови, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности. способа, исследуют влияние диуцифона и проспидина на нейтрофилы крови в НСТ-тесте и при выявлении активации нейтрофилов только на действие проспидина определяют гиперактивный тип нарушения, а при равноценном результате 5 реакции клеток на проспидин и диуцифонопределяют гипореактивный тип нарушения.