Способ выделения возбудителя сибирской язвы

/04 5 П 5 С Н едицин- эрствен, Цапко аэание по ностике и , М 1980, и журнал,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗО К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТ(71) Киевский государственныйский институт и Молдавский госуный университет им. В. И. Ленин(56) Инструкция и методическое улабораторной, клинической диаглечению сибирской язвы у людейХимико-фарма кологичес ки1989, М 9, с, 1098 - 1101. Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в лабораторной практике для выделения чистой культуры возбудителя сибирской язвы,Выделение чистой культуры сибиреязвенного возбудителя из исследуемого материала часто сопряжено с большими трудностями из-за массивного обсеменения его другими микроорганизмами.Известен способ выделения сибиреязвенного возбудителя из загрязненного материала по Дольду, заключающийся в насыщении суспензии кристаллами мочевины с последующим прогреванием на водяной бане при 37 С в течение 5-10 мин.Недостатком этого способа является громоздкость исследования, необходимость использования стерильной посуды, водяной бани, термометра, источника тепла. Часть оставшихся нерастворенными кристаллов мочевины при посеве исследуемого материала на питательную среду способствует угнетению роста сибиреязвенного возбудителя.(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ(57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в лабораторной практике для выделения чистой культуры возбудителя сибирской язвы. Цель изобретения - упрощение способа выделения возбудителя сибирской язвы, Способ заключается в ингибиции роста посторонней микрофлоры путем обработки исследуемоо материала растворомдихлоро-й-(5-нитро- фурфурилиден)-4-эмино,2,4-тризолцинк в концентрации 1-2 г/л. 2 табл,Кроме того, дополнительные манипуляции с бактериологически загрязненным материалом повышают степень риска для исследователя, а вместе с прогреванием удлиняют время исследования.Цель изобретения - упрощение вь ния возбудителя сибирской язвы.Поставленная цель достигается тем, что исследуемый материал обрабатывают раствором дихлоро-й-(5-нитро-фурфурилиден)-4-амино,2,4-триазол цинк в концентрации 1 - 2 г/л,Указанное вещество использовалось ранее для синтеза координационных соединений,Способ осуществляют, следующим образом.Нэвеску дихлоро-й-(5-нитро-фурфурилиден)-4-амино,2,4-триазол цинк растворяют в диметилсульфоксиде иэ расчета 0,5 г на 1 мл и доводят водой или иэотоническим раствором хлорида натрия до концентрации 1 г/и, полученным растворомзаливают исследуемый материал в соотношении 5:1, время экспозиции от несколькихсекунд до 2 м, Раствор может быть использован в течение 2 - 3 мес. Посев производятпипеткой 0,2 мл на чашку Петри с агаромХоттингера. Инкубация при 37 С в течение12 - 24 ч,При наличии в исследуемом материаленаряду со спорами бациллы сибирской язвывегетативных форм других микроорганизмов рост последних ингибируется и растеттолько В. апйгас 3.Таким образом, предлагаемый способпозволяет получить чистую культуру В.апйгасз из материала, загрязненного другими микроорганизмами.П р и м е р 1. Готовят раздельные взвесимикробов в концентрации 10 млрд/мл (кишечная палочка, стафилококк, протей, сальмонелла) и взвесь сибиреязвенных спор вконцентрации 1 млрд/мл, Берут по 1 млкаждой взвеси и смешивают. Добавляют 5 кратный объем раствора дихлоро-й-(5-нитро-фурфурил иден)-4-амино,2,4-триа золцинк в концентрации 0,1 г/л. Посев производят в чашки Петри на агар, приготовленный на переваре Хоттингера, по 0,2 мл накаждую чашку. Исследование посевов производят через 12-24 ч после инкубации их втермостате при 37 С. Растут колонии всехвышеперечисленных микроорганизмов,П р и м е р 2, Взвесь готовят по схеме,описанной в примере 1, добавляют 5-кратный объем раствора дихлоро-й-(5-нитрофурфурил иден)-4-а мино,2,4-триазолцинк, но в концентрации 1 г/л. При посевесмеси культур и инкубации в течение 12 - 24ч при 37 С растет только сибиреязвенныйвозбудитель.П р и м е р 3. Взвесь готовят по схеме,описанной в примере 1, добавляют 5-кратный объем раствора дихлоро-М-(5-нитрофурфурилиден)-4-амино,2,4-триазолцинк, но в концентрации 2 г/л. При посевекультур и инкубации в течение 12-24 ч при37 С растет только сибиреязвенный возбудитель.П р и м е р 4, Взвесь готовят по схеме,описанной в примере 1, добавляют 5-кратный обьем раствора дихлоро-й-(5-нитрофурфурилиден)-4-амино,2,4-триазолцинк, но в концентрации 10 г/л. При посевесмеси культур и инкубации в течение 24 ч5 при 37 С растет только сибиреязвенныйвозбудитель, но в виде отдельных колоний(в 5 - 10 раз меньше, чем в примере 3).П р и м е р 5. Взвесь готовят по схеме,описанной в примере 1, но добавляют 510 кратный объем раствора дихлоро-Щ(5-нитро-фурфурилиден)-4-амино,2,4-триазолцинк, но в концентрации 100 г/л, При посеве смеси культур и инкубации в течение 24ч при 37 С роста микроорганизмов нет.15 Как видно иэ приведенных примеров итаблиц 1 и 2 отсутствие роста и гибель вегетативных форм микробов происходит приобработке субстрата 5-кратным объемомраствора дихлоро-й-(5-н итра-фурфурили 20 ден)-4-амина,2,4-триаэол цинк в концентрации 1 - 2 г/л. Более высокая. концентрация10 - 1000 г/л ведет к прекращению роста игибели как вегетативных форм микробов,так и споровых форм сибиреязвенного воз 25 будителя.Раствор, содержащий 0,1 г/л дихлороМ-(5-нитро-фурфурилиден)-4-амино,2,4-триазол цинк, не приводит к уничтожениювегетативных форм микробов.30 Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет получить чистуюкультуру сибиреязвенного возбудителя; сократить время исследования, количествоманипуляций с предлагаемым заразным ма 35 териалом и расход лабораторной посуды в2-3 раза; исключает необходимость источника тепла; уменьшает риск заражения персонала; все зто значительно упрощаетосуществляемость способа выделения си 40 биреязвенного возбудителя.Формула изобретенияСпособ выделения возбудителя сибирской язвы путем обработки исследуемогоматериала химическим соединением, о т л и 45 ч а ю щ и й с я тем, что, с целью упрощенияспособа, исследуемый материал обрабатывают раствором дихлоро-й-(5-нитро-фурфурилиден)-4-амино,2,4-триазолцинк вконцентрации 1 - 2 г/л,501723130 Таблиуа 1М Е Концентрация исследуемого вещества, г/л Культуры 10 100 ЕвсЬг 1 сЬ 1 а со 11 М10 БгарЬу 1 ососсцв ацгецвЫоой 46 10 1 О 10 Таблица 2 Концентрация исследуемого вещества, г/л Культуры 10 10 1 О 10 Редактор А.Долинич Заказ 1043 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета поизобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж. Раушская наб 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина. 101 Ргогецв цц 1 еаг 1 вБа 1 шопе 11 а гурЬ 1 шцг 1 цшВас 111 цв апгЬгасгв ЕвсЬегсЬ 1 а со 111 М гБгарЬу 1 ососсцв ацгецвОоой 46 Ргосецв цц 1 ваг 1 вБа 1 юопе 11 а ГурЬ 1 шцг 1 цшВас 111 цв апгЬгас 1 в Концентрациякультурмлрд/мл Концентрациякультурмлрд/ил Составитель В. ГылкаТехред М.Моргентал Корректор М,Шароши