Способ определения циркулирующих иммунных комплексов, содержащих с -фракцию комплемента

(5 И ОБ Т АНИЕ при эаболе- ВОЗ, ЖенеЦИ Р КУЛ ИРУЕКСОВ, СОМПЛЕМЕНТА медицине и определения ДЕРЖА (57) Из может пензии эритроцитов уппы берут из локтее 4 мл в пробирку, 5 ед, гепарина, и ценоб/мин 15 мин с понадосадка, Осадок,ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад. И. П. Павлова(56) Роль иммунных комплексов ваниях, - Докл. научной группы ва, 1978, с, 27,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЮЩИХ ИММУННЫХ КОМПЛЩИХ Сз-ФРАКЦИЮ КОобретение относится кбыть использовано для Изобоетение относится к малининоможет использоваться в клинической иммунологии для определения циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сзфракцию комплемента..Целью изобретения является сокращение времени анализа и упрощение способа.Способ осуществляют следующим образом.Для получения сукровь донора О(1) Ю-гвой вены в количестсодержащую О,1 мл. 2,трифугируют при 1500следующим удалениемсодержащий эритроцицентрифугированием10 мин. Для промывкно-солевой буфер рпосле отмывки осадосолевым буфером допензии эритроциэритроцитов смешива ты, трижды отмывают при 1500 об/мин по и используют фосфатН 7,2-7,4. Полученный к разводят фосфатнополучения 3-5 ф сустов, 0,3-0,5 см ют с 9,5-9,7 мл фосфациркулирующих иммунных комплексов. содержащих Сз-фракцию комплемента, Цель изобретения - сокращение времени анализа и упрощение способа, У обследуемого берут кровь, выделяют сыворотку, инкубируют ее с донорскими эритроцитами человека 0(1) Ю-группы, и редварител ь но обработанными нормальным иммуноглобулином человека, Затем проводят центрифугирование и в надосадке определяют спектрофотометрически количество циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сз-фракцию комплемента. По сравнению с известным способом сокращается время анализа в 9-12 раз и упрощается данный способ. то-солевого буфера, После чего 1,5 мл полученной 3-5 суспенэии эритроцйтов донора смешивают с 1,5 мл нормального человеческого иммуноглобулина в разведении 1:200 и инкубируют при 37 С в течение 20-30 мин с последующим центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 мин, Надосадочную жидкость удаляют, а осадок доводят фосфатно-солевым буфером до 1,5 мл и используют для последующего определения.Использование предлагаемого разведе ния иммуноглобулина позволяет получить концентрацию белка в растворе в пределах 0,5-1,1 мг/мл, т.е, в пределах максимальной чувствительности спектрофотометрического способа учета, Выбор в качестве клетоксорбентов эритроцитов донора 0(1) ВЬ-группы позволяет свести к минимуму возможность видовой и групповой агглютинации, так как указанная группа считается универсальной. В данном случае остальными системами гистосовместимости можнопренебречь, поскольку необходимо исклю- П, Боткина г. Ленинграда 14.1.89 в тяжеломчить возможность прямого гемолиза. состоянии с жалобами ча боли в областиИспользование равных объемных сост- печени, тошноту, рвоту, сильную слабость сношений эритроцитов и иммуноглобулина диагнозом направления - хронический виобеспечивает адекватный контакт Ес-ре русный гепатит в цирротической стадии, Нецепторов клеток с Ес-цепями иммуноглобу- смотря на проводимую терапию состояниелина, что объесняет также и выбранный больного прогрессивно ухудшалось, наратемпературный режим, стала желтуха, асцит. усилились проявленияДля исследования кровь обследуемого геморрагического синдрома, появилисьберут натощак из локтевой вены в количест проявления печеночной энцефалопатии. Вве 3,5-3 мл и центрифугируют при 1500 об/мин последующем развилась острая печеночнаяв течение 15 мин. Полученную сыворотку недостаточность, отмечались носовые и жеразводят физиологическим раствором в со- лудочные кровотечения, протромбиновыйотношении 1:3 и 1,5 мл разведенной сыво- индекс упал до 30-25;4, на фоне нарастаюротки смешивают с 1,5 мл 3-5суспензии 15 щих явлений острой печеночной недостадонорскихэритроцитов,полученнойпопри- точности больной скончался 21.3.89.веденной методике, Инкубацию смеси про- Клинический диагноз: хронический вирусводят в течение 40-45 мин при комнатной ный гепатит В, НВз Ад, тяжелое течение.температуре. По истечении сроков инкуба- Портальная гипертензия. Острая печеночции смесь центрифугируют при 1500 об/мин 20 ная недостаточность. Прекома 1, Кома, Див течение 10 мин и измеряют оптическую агноз подтвер кден патолого-анатомически,плотность надосадочной жидкости против За время нахождения в больнице больнойконтрольной пробы на спектрофотометре трижды был обследован предлагаемым спопри длине волны 450 нм, Полученное значе- собом, Использовалась 3-ная суспензияние оптической плотности отражает количе эритроцитов доноров 0(1) йп-группы, 1,5 млство циркуляции иммунных комплексов, которой обрабатывали 1,5 мл нормальногосодержащих Сз-фракцию комплемента. В человеческого иммуноглобулина в разведекачестве контрольной пробы используют нии 1:200.1,5 мл сыворотки больного, развесмесь. 1,5 мл разведенной 1;3 исследуемой денной 1;3, инкубировали в течение 40 минсыворотки, 1,5 мл физиологического раство с 30-ной суспензией эритроцитов, груженра, которую обрабатывают параллельно с ных иммуноглобулином, Измерение провоосновной пробой, дили при длине волны 450 нм противИспользование в этом случае равных контрольной. пробы на спектрофатометреобъемных соотношений сыворотки и сус- СФ,пензии эритроцитов обеспечивает полно Было выявлено, что по мере ухудшенияценный контакт рецепторов и иммунных состояния больного наблюдалось нарастакомплексов, содержащих Сз-фракцию комп- ние содержания циркулирующих иммунныхлемента. При избытке эритроцитов не все комплексов, содержащих Сз-фракцию комп-рецепторы к Сз "загружены" иммунными лемента, резко увеличившегося при наракомплексами, что искажает результат, тогда 40 стании явлений острой печеноч нойкак при избытке сыворотки возможно избы- недостаточности, приведшей в итоге к леточное содержание иммунных комплексов тальному исходу,по сравнению с общим количеством рецеп- П р и м е р 2. Больная Кардава М. Иторов к Сз-фракции, не учитываемых вслед- поступила в городскую инфекционную больствие этого, что также ведет к ошибочным 45 ницу М 30 им, С, П. Боткина г. Ленинград срезультатам, жалобами на кожный зуд, тошноту, боли вВыбранный температурный режим ин- области печени, сильную слабость, потерюкубации объясняется вероятностью спон- аппетита в состоянии средней тяжести станной агглютинации эритроцитов. что диагнозом направления острый вирусныйнаблюдается в ходе экспериментов при ис гепатит. По результатам клиника-биохимипользовании температур, превышающих ческого обследования был поставлен диаг 30-370 С. При использовании нижних темпе- ноэ: острый вирусный гепатит В, НВзА 9,ратур адекватного контакта не происходит. тяжелое течение. Прекома 1. Больная нахоТаким образом, выбранный температурный дилась в отделении реанимации и интенсиврежим является оптимальным и позволяет 55 ной терапии, где проводиласьобойтись без дополнительных технических массированная терапия, на фоне которойсредств (термостат, холодильник и т,п.). состояние больной постепенно улучшалось,Пример 1, явления острой печеночной недостаточноБольной Краско Р. Споступил в город- сти регрессировали, Больная была перевескую инфекционную больницу М 30 им, С, дена в отделение, где продолжалась1711081 Составитель В. ЛитовченкоРедактор М. Стрельникова Техред М.Моргентал КоРРектоР Т. Малец Заказ 336 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 терапия, на фоне которой состояние больной продолжало улучшаться и она была выписана по выздоровлении на 56-й день госпитализации. За время нахождения в больнице трижды проводилось обследование предлагаемым способом. Использовали 5 ф-ную суспензию эритроцитов донора 0(1) ЯЬ-группы, предварительно обработанные нормальным человеком иммуноглобулином в разведении 1,200, которые инкубировали в течение 45 мин с сывороткой больной в разведении 1:3. Измерения проводили на спектрофотометре Сфпри длине волны 450 нм,Содержание циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сз-фракцию комплемента, снижалось по мере регрессии явлений печеночной недостаточности, достигнув к выписке нормальных цифр, тогда как общее количесгво циркулирующих иммунных комплексов в фазе реконвалесценции остается повышенным,Использование предлагаемого способа позволяет упростить определение циркулирующих иммунных комплексов, содержащих Сз-фракцию комплемента и сократить сроки исследования в 9-12 раз в известном способе затрачивается на исследование 2436 ч, а в предложенном способе 2-4 ч), снизить стоимость исследования в 8-10 раз засчет отказа от использования клеточной ли 5 нии йдь атакже 1-меченной антисыворот 125ки против иммуноглобули нов идорогостоящего устройства для регистрации результатов радиоиммунного методаприменять доступное недорогое оборудова 10 ние и реактивы отечественного производства,Формула изобретенияСпособ определения циркулирующихиммунных комплексов, содержащих Сз 15 фракцию комплемента, включающий заборкрови, выделение сыворотки, инкубацию еес клетками-сорбентамицентрифугирование, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с цельюсокращения времени анализа и упрощения20 способа, в качестве клеток-сорбентов используют человеческие донорские эритроциты 01) ЯЬ-группы, обработанныенормальным человеческим иммуноглобулином, и после центрифугирования в надосад 25 ке определяют количество циркулирующихиммунных комплексов спектрофотометрически,