Способ получения иммуноглобулинов

СОВХОЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИРЕСПУБЛИК 7 А 91 ЯЦ. 7 5)5 А 61 КЗ Е ИЗОБР ПИ ТЕНИ ВТОРСКОМУ ЕТЕЛЬСТВУ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР(71) Всесоюзный научно-исследовательский институт животноводства (ЯО),Научно исследовательский институт животноводства, г. Нитра и Национальное предприятие по разработке и производству ветпрепаратов "Биовета", г, Нитра (СЯ)(56) Петров Р,В. и др, Иммуногенетика и искусственные антигены. М: Медицина, 1983, с, 255.Ее 1 гапс 1 ег Р., Мугаво - рертбез. Роге апб арр 1, СЬев. 1987, Ч,3, р.449-454. Изобретение относится к иммунобиологии и может быть использовано для изучения иммунной системы крупного рогатого скота, а также в биопромышленности при изготовлении реагентов, используемых в скотоводстве для генетической паспортизации и контроля воспроизводства племенных животных.Цель изобретения - повышение титра и , величение выхода Рммуноглобулинов.Поставленная цель достигается тем, что аллоиммунизацию крупного рогатого скота проводят смесью эритроцитарных антигенов, связанных с корпускулярным препаратом, полученным иэ пекарских дрожжей - Нитра 1.Для приготовления препарата Нитраодин килограмм пекарских дрожжей (ЯасЬагогпусеэ сечеч 1 э 1 ае) (200 г сухого ве(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ(57) Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для изучения иммунной системы КРС, а также в биопромышленности при изготовлении реагентов, используемых в скотоводстве для генетической паспортизации и контроля воспроизводства племенных животных, Цель изобретения - повышение титра и увеличение выхода иммуноглобулинов, Животных КРС иммуниэируют смесью эритроцитарных антигенов, связанных с препаратом, состоящих иэ клеточных фрагментов пекарских дрожжей, ЗасЬаговусез сечеч 1 э 1 ае). Данный способ позволяет повысить титр антител в сыворотках крови КРС, снизить себестоимость выпуска реагентов в 1,5-2 раза. 3 табл. ществв) размешивают в 3 л дистиллированной воды. С помощью раствора гидроокиси д натрия доводят рН суспензии до 6,2, Полученную смесь нагревают в ферментере до 73 С и в нем же быстро охлаждают до 10 С. После этого температуру суспенэии доводят до 53 С и при этой температуреее выдержи вают в течение 24 ч для протекания аутоли- СО за. Полученную смесь центрифугируют при Я 2000 об/мин в течение 20 - 25 мин, Поверхностную жидкость центрифугата (супернатана) удаляют, а к осадку (седименту) ф добавляют 820 мл 66-ной гидроокиси натрия и после центрифугирования в течение 20 мин при 3000 об/мин добавляют 750 мл 10 фосфорной кислоты и еще раэ центрифугируют также 20 мин при 3000 об/мин. Центрифугат промывают дистиллированной водой до достижения рН 6,5. В результате1704787 5 1 О 15 20 25 30 35 40 45 50 Табл и ца 1 фр 0,0 получают корпускулярный препарат, состоящий из клеточных фрагментов дрожжей (препарат Нитра), Препарат используют в качестве иммуностимулятора,Для аллоиммунизации крупного рогатого скота препарат Нитрас помощью физиологического раствора доводят до концентрации 2,5. К 10 мл крови, взятой у животного-донора, добавляют 5 мл 2,5- ного препарата Нитра, встряхивают и выдерживают в течение 30 мин при комнатной температуре, После этого смесь инъецируют животным - реципиентам три раза с недельным интервалом внутримышечно.Для приготовления иммуноглобулиновой сыворотки у реципиентов отбирают в нужном количестве кровь, из нее выделяют сыворотку, определяют титр сыворотки. Полученная сыворотка содержит преимущественно иммуноглобулины типа М, которая используется для получения из нее реагентов.П р и м е р. Опыт проводят на откормочных быках, а также на монозиготных двойнях крупного рогатого скота, полученных после деления эмбриона и последующей пересадки половинок в Биоцентре НИИЖ г. Н итра.Иммунный ответ на инъекцию смеси,связанный с препаратом зритроцитарных антигенов (10 мл крови + 5 мл 2,56-ной корпускулярной суспензии клеточных фрагментов дрожжей), исследуют на 10 быках черно-пестрой и красно-пестрой пород весом 450 кг. Смесь инъецируют внутримышечно три раза в течение трех недель, Контрольных быков (10 гол.) иммунизируют 10 мл крови без добавки препарата, Остальные условия одинаковы. Анализ сывороток на содержание иммуноглобулинов проводят через О,З и 4 недели в процессе иммунизации, а также спустя 2 недели после прекращения иммунизации (табл.1-3). Осмотр участков тела, в которых делается внутримышечные инъекции, не выявляют. какие-либо побочные явления, От животных получают сыворотки в количестве 0,8 л от каждого. Абсорбционными и гемолитическими тестами из них выделяют 12 моноспецифических реагентов,Влияние иммуностимулятора Нитра- на уровень иммуноглобулинов в сыворотке крови быков представлено в табл,1 Титры гемолитических поликлональных антител у контрольных быков даны в табл,2Титры гемолитических поликлональных антител у быков при иммунизации с использованием адъюванта даны в табл.З.Затем укаэанный иммуностимулятор испытывают на двойнях - двух быках черно- пестрого скота, полученных путем деления эмбриона и последующей пересадки двум реципиентам. Иммуногенетический анализ подтвердил идентичность происхождения данных монозиготных близнецов Ь 1 и йя 2.Моноэиготы близнецы представляют ценность, так как уровень иммунного ответа, как количественный признак имеет низкую наследуемость (порядка 0,1-0,2), а поэтому одна пара монозигот может заменить примерно 20-25 голов обычных животных,Быков-близнецов инъецируют первому только этироциты, а второму эритроциты в смеси с адъювантом (10 мл + 5 мл 57 ь-ного адъюванта). В результате после второй иммунизации (спустя 7 дней) близнец, получивший инъекцию с иммуностимулятором вырабатывает антитела в титре 1:32, а у контрольного быка отмечают начальную слабую реакцию толька в неразведенной сыворотке,Таким образом, указанный препарат Нитраповышает уровень иммунного ответа и может быть использован при промышленном производстве реагентов, Данный способ позволяет путем повышения титра антител в сыворотках крови крупного рогатого скота снизить себестоимость выпуска реагентов 1,5-2 раза, повысить продуктивности животных,Формула изобретения Способ получения иммуноглобулинов для определения групп крови крупного рогатого, скота. включающий иммунизацию животных иммуностимулятором и получение аллоиммунныхсывороток,отличающийся тем,что, с целью повышения титра и увеличения выхода иммуноглобулинов, иммунизацию животных производят смесью эритроцитарных антигенов, сенсибилизированных с корпускулярным препаратом пекарских дрожжей Яаспагогпусез сечечзае.1704787 Таблица 2ТвблицвЭСоставитель Е,Дмитриченкоедактор М.Недолуженко Техред М.Моргентал Корректор М.Демчик Заказ 143 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открь:тиям при ГКНТ ССС113035, Москва, Ж, Раушская наб 4/5оизводственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина, 1