Способ дифференциации иерсиний серовара 09 от бруцелл

(19) (3 1Е 51ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССРСПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ(56) Журнал микробиологии, эпидвмиологии и иммунобиологии, 1983, Ь 1, с,.42-45.Журнал микробиологии, эпидемиологии,иммунобиологии, 1985,М 5,с. 49 - 52. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ИЕРСИНИЙ СЕРОВАРА 09 ОТ БРУЦЕЛЛ (57) Способ дифференциальной диагностики иерсиниоза 09 и бруцеллеза относится к способам лабораторной диагностики иерсияиоза и бруцеллеза путем выявления в сыворотке крови специфических антител к айтигенам возбудителя. Цель изобретения -Изобретение относится к медицине иветеринарии, в частности к методам лабора торной диагностики бруцеллеза и иерсиниоза, а именно к методам дифференциации иерсиниоза 09 и бруцеллеза путем выявления специфических антител в сыворотке крови.Выраженная антигенная общность возбудителя иерсиниоза сеоовара 09 с бруцеллами обуславливает появление в крови у больных перекрестно реагирующих антител, которые о высоких титрах обнаруживаются о общепринятых серологических реакциях(реакции пассивной(РПГА), Райта, Хердлсона и др.) как с иерсиниозным 04, так и с бруцеллезным коммерческими диагно 2повышение точности и упрощение способа, Для этого проводят целенаправленный поиск антител к антигенам, специфичным для иерсиний, содержащих плазмиду вирулентности с мол. м. 40-50 МД, В качестве анти- гена используют клетки иерсиний серовара 03; не имеющие перекрестно реагирующих антигенов с бруцеллами, но содеркащих;как и возбудитель иерсиниоза 09, плазмиду и соответствующие идентичные антигены.Ставят реакцию агглютинации на стекле с разведенной 1:15-1:25 перекрестно реагирующей сывороткой и клетками иерсиний серовара 03, содержащими и несодержащи. ми плазмиду вирулентности 40 - 50 МД, выращенными при 36 - 38 С. Если в течение 2 а мин наступает агглютинация только плазми- .досодержащих клеток, диагносцируют иер- д синиоз; при отсутствии агглютинации обеих культур диагносцируют бруцеллез.Ф Фей стикумами, что затрудняет дифференциальную диагностику этих зоонозных заболеваний. Общность симптоматики ряда клинических форм, источников инфекции и факторов передачи при иерсиниоэе и бруцеллезе создают дополнительные . трудности в эпидемиологической оценке отдельных случаев и вспышек заболеваний, особенно о благополучных по бруцеллезу районах. Это, о свою очередь, может привести к гипердиагностике бруцеллеза и повлечь за собой необоснованные клинико-эпидемиологические мероприятия.Известен способ серологической дифференциальной диагностики иерсиниоза и бруцеллеза в реакции агглютинации с ис,д-, х, - , мкм, при 37 С не: подвижен, спор и капсул не образует, Физидцако даццг способ весьма трудо- ологические признаки;признаки; растет на агарег,Ь+а.Игеа Хоттицгерд. На срезе Эндо при 26 С чеиерсиий пассируОт в полужгдком пита 24 ч Об азпри через, г " -. ., ,; .- Оч образует колонии диаметром 01-02те г цол: агар, ".3 Сд. г, мм, имеет вид росинок, через 48 ч приобрезатем сут - в бульона (для накопления тает розовый оттенок, диамет 1 0-1 "подвижных (0 рР и доприр л о 2 с п Оут при 37 С через 24 ч образует округлые кодоо рабатывают.Ормалинол с последующей нии 0,05-0 рии диаметром 0,05-0,1. мм, через 48 ч -стацдартизацией микробной массы и поста 0,3-0,5новкой разееоугой ре, Нмм,вып клыу е розовые полупрозрач-акции,-агглютица- ные, иног а с нд еровными кралми, Штаммгреванием при 56 С в течение обла апол 1 пса, К.громе того, не учитывается ольдает культуральными признаками,.г.1, р содержания плазмиды вирулентности:Отдельных связанных с вирулетОстьО ан темпеРатурозависимостьо роста на каль. рсгиии в патогецезе исрсиниоза, 15 ций-дефицитных средах, оггмотинобельгаемому спосооу сыворотку, даОщуо поло- кла ка). Ха актогласно наиболее близкоу к предла- ностью (при кул редекларка). Характерные физиологические осожител ь нуО рсд к ЦгО а Ггл Оти наци и с бенности:, аосорбируот лиофилиэированным 20 сбраживает глюкоз сахау ой, гидролизует мочевину,препаратом фецоьйойживает глюкозу, сахарозу, сорбит,б ьелл ифй фракции из штамма мальтозу, маннит трега бру. повторно ставлт реакцио агглО- ем кис гот бльзу с о разованилоты, це сбраживает кантозу, ремнотицации с теми жедиагцсстикумами, При э фэу, рафинозу, инозит, салицин, каллезу, недиагональном снижении титров В отношециибел лдезоминирует фенилаланин, не образуетции руцеллезцого.диагностилина исследу инзол и серово ороводород на фазе Олькецицкого.. у ыворотку считаот иерсиниозной, в Устойчив к стре о ц у, ми инотцошении обоих диагцостик мов - б ет ептомицицу, канами инт е о ц у, мицину;кумов - руцел- чувствителен.к тетрациклину, гентамицину,левомицети ну, рифамицину.Недостатком известного способа явлл- Содеродержит неконьюгативную плазмидетсл необходимость фракционирования 30 маской 45-47 МДуЬ елл а т ккоиотноглщ Ося к груп геруцелл, а также мцогозтапность диагно- несовместимости Г, Гено ти , ены плазмиды кОНтсвоиства штамма,.Нием абсороции атитети ролируют патогенные спостаноькой развернутой реакции агглюти- Ш 188 би - тал 1 м 88 обладает признаками патогенности при тестировании путем заражения,елью изобретения является повыше культурыткани Не -2( р ), рсМхние точно"ти и упрощецие спо"ог .ь Л. свинок коньюнктивальцо).(р- знтерально), морс Мхвоиства, штамма ,колЦель достигается тем, что длл вылвле-Биологические с, (ния антител к специфическим антиге нам ви- лекция ГИСК им. Л.А,ТВим арасевича); штамм:,рсиции исследуемую 189 являетсл бесплазмидным мутантомсыворотку, дающуо В диагностически зна штамма М 188, утратившим плазл 1 изу 45 - 47 г б .еллчи.;ых титрах положительные реакции с МД, и все связанные н. з нные с неи признаки; кальгмость роста, способность к ауторуцеллезным и иерсиниозцым коммерче- ций-зависимость оста, и бскими диагнос,кулгами, в рдэведении 1:20 агглютинации, температурозавд р кции агглотинации наморфологию колоний, способность синтезистекле с микрооной с спецзи".е , р " . уией кишечных 5 ровать плдзмизоспецифичные антигеныиерсиций се" ова-а 0" с цлазмидой 40-50 зывать коньонктивит у морских свинокны, вымегадальтон (штамлд УД, (а .с. т ЕГЗюва СПГОСОгСа КОЛОНИЗаЦИ 0 КИШЕЧНка МЫШЕЙ, ВЫСОК ОИНФИ. 188), выращечцого п.и 37 С П)ш и, высокуюинь,.при, ) и его фекциозность в отношении клеток культурыбесплазмидцым мутаТом штамм 6189; мут т6 89, г,ы- ткани. Остальные свойства идентичны исходращеным в тех же услоьиях (П, При ггояв ному штамму Уегзпа епгегосоЫса Ь 188.лег в течение 2 мнн агглютицации только П р и ме 1. Убольцого В.плазлгивосо е жаших.ржацих клеток диагносциру- на обострение хронического бр еллеза сыво.еи; р, у .твин агглютина- ротка крови испытана в серологических реакции Обеих культур- б. целлез..г уг рЛциях со следующими результатами: реакцияБиологические свойства штамма 55 агглотинацггг(Райтд) с егиым.б1703119 Таким образом, показано отсутствие в крови экспериментально вакцинированного бруцеллами животного антител к характерным для плаэмидосодержащих иерсиний антигенам.Таким образом, предложенный способ упрощает серологическую дифференциацию бруцеллеза от иерсиниоэа. Использование для реакции в качестве антигена микробных клеток изогенной пары иерсиний, отличающихся только по контролируемым ппаэмидой антигенам, позволяет повысить ее специфичность. 20 25 Составитель А, федоровТехред М.Моргентап Корректор Л. Бескид Редактор Г.Гербер Заказ 12 Тираж .Подписное ВНИИПИ Грсударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 1;640. Сыворотка крови больного разведена в физиологическом растворе до 1;15 и в виде двух капель нанесена на предметное стекло рядом с двумя небольшими каплями ФР.Выращенные на скошенном агаре Хоттин гера (сутки при ЗбС и сутки при комнатнойтемпературе) культуры иерсиний серовара 03, содержащих (Г ) и несодержащих (П) плаэмиду 45-47 МД (штамма 188 и 189 соответственно), с помощью петли суспенэированы в капле физиологического раствора и смецены: каждая с испытуемой сывороткой и с физиологическим раствором. В течение 2 мин при покачивании стекла агглютинация не отмечена ни в одной иэ четырех капель. Диагноз хронического бруцеллеза подтвержден, иерсиниоэа исключен.П р и м е р 2. В сыворотке крови коровыиз совхоза К. при профилактическом обсле довании обнаружены антитела к бруцеллам:реакция Райта положительна в титре 1:100 - 1:200, РПГА с кишечно-иерсиниозным диагностикумом 09 положительная в титре . 1:640. С целью дифференциальной сероло.гической диагностики, сыворотка разведена в Физиологическом растворедо 125 ив виде двух капель нанесена на стекло рядом : с двумя каплями заведомо отрицательной(на иерсиниоэные антитела) сывороткой в том же разведении, После суспенэирования - в физиологическом растворе выращенныхна питательном агаре при 38 С и комнатной температуре культур иерсиний серовара 03 : (П и П) каждую иэ них смешивают с конт рольной и испытуемой сывороткой. В течение 40-60 с появляется агглатинация культуры 03 П в испытуемой сыворотке, в других каплях в течение 2 мин остается равномерное помутнение. В сыворотке выявлены антитела к плаэмидоспецифичным .,антигенам иерсиний, подтвержден диагноз . иерсйниоза 09.П р и и е р 3. После иммунизации кролика вакциной из штаммов Вг, аЬогтоз и Вг.аетепзз на девятый день у него взяли кровь и отделили сыворотку, в которой выявлены антитела к бруцеллам (РПГА с бруцеллезным диагностикумом положительна в титре 1:25600) и иерсиниям 09 (РПГА с 5 кишечно-иерсиниоэным диагностикумом 09положительна в титре 1;5120), В реакции. агглютинации на стекле установлено, чтоиспытуемая сыворотка вразведении 1:20 не агглютиниоует в течение 2 мин клетки иер синий серовара 03 (штаммы 188 и 189), выращенных на агаре Хотгингера сутки при 37 С и сутки при комнатной температуре,формул а и зоб рете н и я Спозоб дифференциации иерсиний серовара 09 от бруцелл, вюпочающий смеши вание исследуемой сыворотки параллельнос двумя корпускулярными антигенами и дифференциацию иерсиниоза по наличию агглютинации, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и упрощения 35 способа, исследуемую сыворотку разводят1;15 - 1:25, в качестве корпускулярных анти- генов используют . штамм Уегзиа епегососса ГИСК М 188, содержащий плаэмиду вирулентности с мол. м, 40 - 50 40 МД, и штамм Уегзиа ептегосотса ГИСК% 189, не содержащий плаэмиды вирулентности, выращенные. при 36-38 С, дифференциацию иерсиниоза проводят по наличию агглютинации со штаммом Уегзиа 45 епсгосоЫса ГИСК 3 Ф 188.