Способ оздоровления картофеля от вирусов

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУааай да 3 тече 0,15(56) Борисенко С.И. и др. Эффективностьоздоровления картофеля методом культурыапексов с помощью ингибиторов вирусов, -Доклады ВАСХНИЛ, 1985, М 10, с. 10 - 12,(54) СПОСОБ ОЗДОРОВЛЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ ОТ ВИРУСОВ Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности ктехнологии ведения семеноводства картофеля на безвирусной основе,Целью изобретения является ускорение иповышение выхода оздоровленных растений,Способ состоит в том, что исходные, зараженные вирусами растения выдерживаютв течение 1,5 - 2 сут в растворе с антивирусными веществами(АВ В), выделяют эксплантаты размером 400 - 500 мкм и помещают ихна питательную среду Ван Гофа, содержащую АВВ, где в качестве АВВ используютразветвленный маннан (РМ) в количестве0,15 - 0,25 г/л или РМ с синтетическими ингибиторами цианогуанидином и диоксогексагидротриазином при следующемсоотношении компонентов, г/л;РМ 0,15-0,25Цианогуанидин 0,5Диоксогексагидротриази 0,5(57) Изобретение относится к биотехноло. гии и сельскому хозяйству, в частности к технологии ведения семеноводства картофеля на безвирусной основе. Целью изобретения является ускорение и повышение выхода оздоровленных растений. Способ состоит в том, что исходные растения обрабатывают антивирусным препаратом, вычленяют меристемы и культивируют их на питательной среде Ван Гофа в присутствии антивирусных веществ, при этом в качестве антивирусных веществ используют маннан разветвленный или композицию его в сочетании с цианоцианидином и дезокси- гидротриазином П р и м е р 1. Растения картофеля гибрида 3731, пораженные Х-вирусом картофеля (ХВК), выдерживают в течение 1 сут в растворе РМ в концентрации 0,10 г/л, затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 200 - 250 мкм (0,20 - 0,25 мм) и помещают на среду Ван Гофа. содержащую РМ в концентрации 0,10 г/л, Растения контрольного варианта выдерживают в течение суток в дистиллированной воде, затем выделяют эксплантаты размером 200-250 мкм и помещают на среду Ван Гофа, не содержащую РМ, т,е. без добавки антивирусного вещества.В результате опыта из 10 растений-регенерантов только одно не содержит ХВК (10). Аналогичный результат получен и в контрольном варианте,П р и м е р 2. Растения картофеля гибри, пораженные ХВК, выдерживают в ние 1 сут в растворе РМ в концентрации г/л, затем выделяют эксплантаты отв) 2 сут,г) 3 сут,5 10 15 20 анта содержат МВК 45 50 этих растений размером 200 - 250 мкм и помещают на среду Ван Гофа. содержащую РМ в концентрации 0.15 г/л, Растения контрольного варианта, как и в примере 1, не подвергают воздействию антивирусного вещества РМ, В результате опыта из 10 растений-регенерантов два не содержат ХВК (20%) в то время, как в контрольном варианте все растения содержат ХВК.П р и м е р 3, Растения картофеля сорта Невский, пораженные М-вирусом картофеля (МВК), выдерживают в течение суток в растворе РМ в концентрации 0,20 г/л, затем выделяют эксплантаты от этих растений размером 200 - 250 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РЫ в концентрации 0,20 г/л. Растения контрольного варианта выдерживают в течение суток в дистиллированной воде, затем выделяют эксплантаты размером 200-350 мкм и помещают на среду, не содержащую РМ, В результате опыта из 15 растений-регенерантов пять не содержат МВК (33%). Все растения-регенеранты контрольного вариП р и м е р 4. Растения картофеля с. Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 1 сут в растворе РМ в концентрации 0,25 г/л, затем выделяют эксплантаты размером 200 - 250 мкм и помещают на среду Ван Гафа, содержащую РМ в концентрации 0,25 г/л. Растения контрольного варианта, как и в примере 3, не подвергают воздействию антивирусного вещества (РМ), В результате опыта из 12 растений-регенерантов четыре не содержат МВК (33,3%). Все растения контрольного варианта содержат МВК,П р и м е р 5. Растения картофеля с, Невский, пораженные МВК, выдерживают в течение 1 сут в растворе РМ в концентрации 0,75 г/л, затем выделяют эксплантаты размерам 200 - 250 - 350 мкм и помещают на среду Ван Уофа, содержащую РМ в концентрации 0,75 г/л, Растения контрольного варианта, как и в примере 3, не подвергают воздействию антивирусного вещества (РМ). В результате опыта все эксплантаты размером 200-250 мкм погибают, Из трех растений-регенерантов, полученных из эксплантатов размером 350 мкм, в одном МВК не обнаружен. Результаты опыта показывают, что при высокой концентрации РМ проявляется фитотоксичность. П р и м е р 6, Растения картофеля с,Невский, пораженные МВК, выдерживают врастворе РМ в концентрации 0,20 г/л (оптимальный вариант) в течение: а) 1 сут, б) 1,5 сут,Затем выделяют эксплантаты размером300-450 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ в концентрации 0,2 г/л,Растения контрольных вариантов выдерживают в течение 1; 1,5; 2 и 3 сут. в дистиллированной воде, выделяют из нихэксплантаты размером 300-450 мкм и помещают на среду Ван Гофа, не содержащуюРМ (без антивирусного вещества), Отмеченоугнетающее действие РМ на эксплантаты,выделенные из растений, выдержанных врастворе с РМ в течение 3 сут: вялость ислабая приживаемость выделенных зксплантатов.В результате опыта;а) из 15 растений-регенерантов, полученных от растений, выдержанных в растворе с РМ в течение суток, пять несодержит МВ К (33,3%);б) из 21 растения-регенеранта, полученных от растений, выдержанных в растворе сРМ в течение 1,5 сут, 17 не содержат МВК(81 0%)в) из 12 растений-регенерантов, полученных от растений, выдержанных в растворе с РМ в течение 2 сут, 10 свободны отМВК (83,3%).Полученные результаты показывают,что предварительное выдерживание растений в растворе с РМ должно быть в течение1,5 - 2 сут (оптимальный вариант).В контрольных вариантах все растениярегенеранты (39 шт.) содержат МВК.П р и м е р 7. Растения картофеля с.Невский, пораженные МВК, выдерживаютв течение 2 сут в растворе РМ (концентрация 0,2 г/л) с комплексом известных синтетических ингибиторов цианогуанидина (ЦГ)и диоксогексагидротриазина (ДГТ) в концентрации по 0,04 г/л каждого. Затем выделяют эксплантаты от этих растенийразмером 400-600 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ (0,2 г/л) вкомплексе с ЦГ и ДГТ по 0,04 г/л,В результате опыта из 7 растений-регенерантов получено четыре здоровых (57%).П р и м е р 8. Растения картофеля с.Невский, пораженные МВК, выдерживают втечение 2 сут в растворе РМ (концентрация0,2 г/л) с комплексом ЦГ и ДГТ в концентрации по 0,10 г/л каждого, Затем выделяютэксплантаты от этих растений размером400 - 600 мкм и помещают на среду Ван Гофа, содержащую РМ (0,2 г/л) в комплексе сЦГ и ДГТ по 0,100 г/л. В результате опытаиз 5 растений-регенерантов получено триздоровых (60%).1682388 Составитель Н.ЩербинаТехред М,Моргентал - Корректор М.Максимишинец Редактор Н,Рогулич Заказ 3383 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент",г. Ужгород, ул.Гагаоина. 101 П р и м е р 9, Растения картофеля с,Пригожий, пораженные комплексом вирусов:Х-вирус картофеля (ХВК) + М - вирускартофеля (МВК) + Я-вирус картофеля (ЯВК) + вирус скручивания листьев картофеля (ВСЛК 5или-вирус), выдерживают в течение 2 сутв растворе РМ (концентрация 0,2 г/л) с комплексом ЦГ и ДГТ в концентрациях по. 0,05г/л каждого. Затем выделяют эксплантатыот этих растений размером 300-450 мкм и 10помещают на среду Ван Гофа, содержащуюРМ (0,2 г/л) в комплексе с ЦГ и ДГТ по 0,05г/л,В результате опыта из 10 растений-регенерантов 9 являются свободными от вирусов (90 О), Растения контрольного вариантасодержат комплекс вирусов (Х+ 5+ М + ).Как указано в примере 9, оздоровленысорта: Ласунок, Добро, Изора, Невская горка, Вирусологический анализ опытных растений проведен методами: серологии.электронной микроскопии и иммуноферментного анализа,Таким образом, оптимальным являетсяпредварительное выдерживание пораженных вирусами растений в растворе с маннаном разветвленным в концентрации0,15 - 0,25 г/л в течение 1,5 - 2 сут с последующим выделением эксплантатов размером 400-500 мкм и посадкой их на среду Ван Гофа. содержащую маннан разветвленный в той же концентрации. Эффективность использования маннана разветвленного повышается при применении его в комплексе с цианогуанидином и диоксогексагидротриазином в концентрации по 0,05 г/л.Формула изобретения Способ оздоровления картофеля от вирусов. включающий вычленение меристем с последующим культивированием их на питательной среде в присутствии антивирусныхвеществ,отличающийся тем,что, с целью ускорения и повышения выхода оздоровленных растений, перед вычленением меристем исходные растения обрабатывают в течение 1,5-2 сут раствором, содержащим антивирусные вещества, вычленяют меристемы размером 400 - 500 мкм и культивируют их на питательной среде Ван Гофа, при этом в качестве антивирусных веществ в составе среды используют разветвленный маннан в количестве 0.15 - 0,25 г/л или в сочетании с цианогуанидином в количестве 0,05 г/л и дезоксигидротриазином в количестве 0,05 г/л.