Способ определения устойчивости растений картофеля к вирусам мозаичной группы

1 11 О 7Изобретение относится к сельскомухозяйству и может быть использованов селекции растений при выведениивирусоустойчивых сортов картофеля.Известен способ определения устой 5чивости растений картофеля к вирусаммозаичной группы, который предусмат-ривает искусственное заражение растения путем его выращивания на искусственно созданном инфекционном фонев полевых условиях с последующимсоставлением суждения о его вирусоустойчивости по результатам визуального, серологического, индикаторногои электронно-микроскопического ана-.15лиза сока его листьев 13,Однако известный способ не позволяет получить достоверную информациюс вирусоустойчивости растений картофепя, так как в анализируемую пробусока не.всегда попадают имеющиеся висследуемом зараженном растении вирус.ные частицы, Кроме того, подвергаемая анализу усредненная проба сокаможет быть составлена из несколькихсмешанных объемов сока, лишь один изкоторых содержит вирусные частицы,концентрация которых резко падаетв итоговой пробе, и поэтому при анализе вирусные частицы могут быть не об 30наружецы,Цель изобретения - повысить достоверность способа,Цель достигается тем, что согласно способу определения устойчивостирастений картофеля. к вирусам мозаич- З 5ной группы, включающему искусственное заражение растения и последующийэлектронно-микроскопический анализего элементов, анализируют срезы листа и к вирусоустойчивым относяттолько те растения, в клетках которыхсохраняется целостность мембран митохондрий и хлоропластов,П р и и е р 1, Заражение растенийкартофеля в теплице осуществляли ме -ханической инокуляцией сока больныхрастений в период появления всходовизучаемых растений, Ткань листа зара.женного растенияфиксировали в 6,5 Еном растворе глютаральдегида о постфиксацией 2 Х-ным раствором четырехокиси осмия, заключали в эйоксидную3смолу по общепринятым методикам.ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме, контрастировали 2 -ным 55раствором уранилацетата и цитратомсвинца, Срезы просматривали под электронным микроскопом,790 2Согласно известному способу анализировали сок зараженных растений.4П р и м е р 2.,При анализе сре зон листа зараженного растения (сорт Лошицкий) наблюдали следующую картину: много вирусных частиц и включений, нарушены структуры (расширеныканалы эндоплазматического ретикулума, появляется большое количестволизосом, цитосогрессом, наблюдается увеличение слоя цитоплазмы за счет скопления вирусных частиц), однакомитохондрии и хлоропласты не нарушены.В соответствии с наблюдаемой картиной сорт Лошицкий по предлагаемому способу отнесен к числу сортов с высокой полевой устойчивостью, что соответствует известной из практики высокой полевой устойчивости данногосорта к вирусам мозаичной группы.При анализе сока по известному способу 1 3 обнаружены вирусные части" цы, и сорт ошибочно отнесен к числу неустойчивых.П р и м е р 3. При просмотре срезов листа зараженного растения (гиб-рид 6/8 ху 76-23) наблюдали следующую картину: в цитоплазме присутствуют вирусные частицы, но никаких изменений ультраструктуры клетки не наблюдается. хлоропласты и митохондрии не разрушены, Вывод: гибрид обладает высокой полевой устойчивостьюк вирусной инфекции.Из-за присутствия вирусных частицв цитоплазме они могут быть ебнаруже"ны при изучении сока, что приводит кневерному выводу о неустойчивостигибрида к вирусам мозаичной группы.П р и м е р 4. На срезе единичныесвключения, расширены каналы эндоплаз"матического ретикулума, имеются лизосомы, цитоплазма увеличена, но митохондрии и хларопласты не нарушены,Вывод: сорт устойчив (сорт Лошицкий).Подтверждено практикой,П р и м е р 5, Преимущество предлагаемого способа наиболее наглядно демонстрируется на примере М-вируса картофеля, относящегося к дефектным вирусам. Этот вирус медленнно развивается в растениях картофеля и трудно выявляется в первый год заражения растений. С помощью анализа сока зараженных растений могут обнаруживаться в электронном микроскопе единичные вирусные частицы, что свидетельству107790 Составитель Л. СероваТехред Т.Фанта Редактор В. Ковтун Корректор И.Муска Заказ 5798/2 Тираж 722ВНИИПИ Государственного комитета СССРпо делам изобретений и открытий113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5 Подписное Филиал ППП "Патент" г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ет о.низкой концентрации частиц в соке. В основном же вирус вообще не уда. ется идентифицировать путеманализа сока в электронном микроскопе в первый год заражения растений, в связи 5 ,с.чем нельзя получить достоверные данные о степени вирусоустойчивости исследуемых образцов картофеля.При ультраструктурном анализе клеток по предлагаемому способу уже в первый год заражения исследуемых растений обнаруживается локализация и концентрация вируса вклетке и характер его взаимоотношений с клеточными органеллами. По состоянию мембран хлоропластов и митохондрий можно судитВ об устойчивости того или иного образца картофеля к вирусной инспекции.Таким образом, при определейииусто. йчивости растений картофеля к вирусам мозаичной группы предлагаемым спосо" собом достоверность определения значительно повышается.