Способ определения агглютиногенов в волосах человека

(9 01 И 3353 л, тсаее1 тт: ПИСАНИ ЗОБ Т И К АВТО МУ СВИДЕТЕЛЬСТВ 27526/1 12.88 06,91. Б шкентс Й инсти Д,Джал 5.373 (О иа нова тиза, 19(57) Изобретенцины, биологи ТИ ди ние 6 ине, бив антрогенов в . проистение относитс жет найти при ри определен е мального и к меди енение и анти костног.) до поает возточноышен ю обра ельчают диффер арфоров тным.со и ступенто ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯПРИ ГКНТ СССР ОПРЕДЕЛЕНИЯ АГГЛЮОЛОСАХ ЧЕЛОВЕКАие относится к области ми и может найти примен Изобре я ологии и мо м пологии и и тканях эпид рхождений,Цель изобретения - по сти и упрощение способа.Способ осуществляют с зом. Для проведефии используетсостоит из хромвыполненной изне которой выпалгнезда. На верхнтографической истия капиллярпроходят через тс гнездами. Каппазы с гнездамиВолосы измке вместе с ин ния аффинной хроматограся устройство. Устройство атографической пластины, оргстекла, на одной сторонены четыре паза и четыре ей боковой стороне хромаластины выполнены отверных каналов, которые олщу стекла и соединяются иллярный канал соединяет в судебной медицине и антропологии при определении антигенов в тканях эпидермального и костного происхождений, в частности в волосах. Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа. Это достигается тем. что исследуемый объ. ект смешивают с индифферентным сорбентом в соотношении 1:3-1:10 и помещают в хроматографическое устройство. В нем объект непрерывно омывают изосыворотками в течение 6 - 8 ч. Затем по наличию агглютинации эритроцитов определяют принадлежность агглютиногенов той или иной группе(силикагель, окись алюминия и трошкообразного состояния, что можн ость увеличить площадь соприкосновения антигенов волос с антителами сыворотки. Затем эту смесь помещают Ое в два гнезда устройства для исследования одного обьекта. В пазы засыпают сорбент так, чтобы сорбент заполнил капиллярный канал с целью обеспечения непрерывного течения сыворотки, В отверстия капилляр- (Л ного канала устанавливают пастеровские 3 пипетки, диаметр которых у выхода капилляра составляет 0,2 мм, что обеспечивает непрерывное и замедленное течение сыворотки, В увеличении диаметра нет необходимости, так как это способствует неоправданному перерасходу сыворотки.Пастеровские пипетки заполняют цельными изосыворотками альфа и бета в подобранном рабочем разведении, Рабочее разведение для каждой серии сывороток подбирают отдельно, Как правило, эти рабо 1659857чие разведения соответствуют 1;64 при наличии титра сыворотки 1;128 и 1:128 при наличии сыворотки с титром 1:256 и т.д, Одну пастеровскую пипетку заполняют альфа сывороткой, другую - бета сывороткой. Сыворотки стекают через капилляры, омывая непрерывно исследуемые объекты. Хроматография длится 6-8 ч. По истечении времени исследуемые обьекты переносят в , пробирки, куда добавляют ло 2 капли физраствора, Затем пробирки с исследуемым материалом помещают в термостат при тем- пературе+56 С на 30 мин, Поток в пробирки закапывают ло 2 капли соответствующую 0,3 -ную взвесь эритроцитов группы А или В. В пробирку с исследуемым материалом, где пропускали сыворотку альфа, закапыва, ют эритроциты группы А, а в другую - эритроциты группы В. Затем центрифугируютпри 1000 об. в 1 мин втечение 4 мин, Результаты учитывают микроскопически,П р и м е р 1. Были озяты волосы у лица с А И) группой крови, Волосы растирали в фарфоровой ступке вместе с силикагелем в соотношении соответственно 1:3, Смесь доводили до порошкообразного состояния. Эту смесь помещали в два гнезда устройства, В два соответствующих лаза засыпали сорбент (силикагель) так, чтобы сорбент заполнил капиллярный канал,В отверстия капиллярного канала установили две пастеровские пипетки, которые заполнили одну сывороткой альфа в рабочем разведении 1:256, другую - бета, в рабочем разведении с физ. раствором также 1:256,Сыворотки брали по 3 мл. Хроматография длилась 6 ч. По истечении времени исследуемый материал переносили а пробирки: объект, который омывался сывороткой альфа - в одну пробирку, а объект, который омывался сывороткой бета - в другую пробирку. В пробирки закапывали по 1 капле физраствора и элюировали в термостате при температуре+56 С 30 мин. Затем элюат перенесли в другие пробирки, чтобы исследуемый объект не мешал при микроскопии, а также при необходимости повторного исследования, В пробирки с элюатом добавляли по 1 капле 0,3-ную взвесь стандартных эритроцитов: а ту пробирку, где находился исследуемый материал, через который пропускали сиворотку альфа, добавили эритроциты группы А, а в другую-эритроциты группы В, ЦентриФугироаали 4 мин при 1000 об. в 1 мин, Затем пробирки встряхивали и содержимое переносили на предметные стекла и микро- скопировали. В препарате, куда добавляли эритроциты группы А была явная агглютинация эритроцитов, которая указывает на присутствие агглютиногена А, В препарате,куда добавляли эритроциты группы В агглютанация эритроцитов отсутствовала.При исследовании волос данной группыв соотношении с силикагелем 1:12 и хрома- .5 тографироаанием в течение 6 ч агглютиногены не были обнаружены,П р и м е р 2. Были взяты волосы у лицас В (11) группой крови, Волосы растирали вфарфоровой ступке вместе с силикагелем в10 соотношении соответственно 1:7. Смесь доводили до лорошкообразного состояния.Эту смесь помещали в два гнезда устройства. Два соответствующих паза заполнялисиликагелем. В отверстия капиллярного ка 15 нала установили две пастеровские пипетки,которые заполнили, одну цельной сывороткой альфа с титром 1;128. предварительнооазведя ее до рабочего разведения 1:64,другую ластеровскую пипетку - сывороткой20 бета с рабочим разведением также 1:64.Хроматография длилась 8 ч, Затем исследуемые материалы переносили в пробирки,добавляли по 1 капле физраствора и злюировали при температуре+56 С а течение 3025 мин. Потом элюат переносили в другие пробирки, куда добавляли по 1 капле 0,3 -нойвзвеси соответствующих стандартных эритроцитов. Центрифугироаали 4 мин при 1000об. в 1 мин, Затем пробирки встряхивали и30 готовили препарат для микросколироаания.В препарате, где былидобавлены эритроциты группы А, агглютинация эритроцитов отсутствовала. В препарате, куда добавлялиэритроциты группы В, отмечалась агглюти 35 нация эритроцитоа, которая указывает наприсутствие агглютиногена В,При исследовании волос от этого же лица а соотношении с силикагелем 1:7 и хроматографироаании втечение 12 ч сыворотка40 иссякла, соответствующий агглютиноген Вне быа выявлен, хотя имели место единичное склеивание единичных эритроцитов, чтоможно связать с ресорбцией антител,П р и м е р 3. Волосы гр-ки У 20 лет, с45 неизвестной группой крови, Волосы растирали в фарфоровой ступке вместе с силикагелем в соотношении соответственно 1:3.Смесь доводили до порошкообразного состояния. Эту смесь помещали а два гнезда50 устройства. Даа соответствующих паза засыпали сорбентом (силикагелем) так, чтобысорбент заполнил капиллярный канал. В отверстия капиллярного канала установилидве пастеровские пипетки, которые запол 55 нили одну сывороткой альфа в рабочем разведении с Физраствором) 1:128, другую -бета а рабочем разведении 1:64,Сыворотки брались ло 3 мл. Хроматография длилась 8 ч. По истечении этого времени исследуемый материал переносили а1659857 Составитель Г.КрюковаТехред М,Моргентал Корректор О.Ципле Редактор С.Лисина Заказ 1839 Тираж 417 Подписное. ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 пробирки: объект, который омывался сывороткой альфа - в одну пробирку, а объект, который омывался сывороткой бета - в другую пробирку. В пробирки закапывали по одной капле физраствора и элюировали в термостате при +56 С в течение 30 мин. Затем элюат перенесли в другие пробирки и в каждую из них в отдельности добавляли по 1 капле 0,3-ной взвеси стандартных эритроцитов группы А и В. В ту пробирку, где находился исследуемый материал, через который пропустили сыворотку альфа, добавили эритроциты группы А, а в другую - группы В. Пробирки центрифугировали 4 мин при 1000 об. в минуту, Извлекали их из центрифуги, встряхивали и содержимое переносили на предметные стекла и подвергали микроскопическому исследованию. При этом в объекте, куда добавлялись эритроциты группы А агглютинация не наступила, а в объекте, куда добавляли эритроциты группы В, наступила хорошо выраженная агглютинация. Следовательно, в обьекте установлен агглютиноген В, что соответствует третьей группе крови. В последующем, при проверке, у гр-ки У была установлена эта группа крови.. Положительный эффект от использования предлагаемого способа заключается в повышении точности определения принадлежности человеческих волос, что достигается благодаря использованию аффинной хроматографии. Точность определения согласно предлагаемому способу составляет 5 93,4;, а согласно прототипу - 56,7, Повышение точности способа обеспечивается путем увеличения площади соприкосновения антигенов исследуемого материала с анти- телами сыворотки, что достигается благода ря разрушению структуры волос путем ихизмельчения и смешивания с индифферентным сорбентом, а также за счет непрерывного смывания объектов исследования сывороткой, что также ускоряет осуществле ние способа до 6 - 8 ч (согласно прототипу -20 ч). Ф о рм ула изобретения Способ определения агглютиногенов в 20 волосах человека путем расщепления их, добавления изосыворотки альфа и бета и выявления агглютиногена в реакции абсорбции элюции, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности и ускоре ния способа, перед добавлением изосыворотки материал волос смешивают с индиферентным сорбентом в соотношении 1;3-1;10, а воздействие изосывороткой проводят путем хроматографии при непрерыв ном их взаимодействии в течение 6-8 ч.