Способ определения токсичности водорастворимых веществ

ЮЗ СОВЕТСКИХцидлистическиспу Блик 165645 1 чЗЗ 48(5 ОСУДАРСТВЕННЫЙО ИЗОБРЕТЕНИЯМРИ ГКНТ СССР ОМИТЕТОТКРЫТИЯ ВИДЕТЕЛЬСТВУ К РСКО ИЧНОТВевай Изобретен игическим исслеможет быть испной токсикологдорастворимыхтакже на продля биологичесми,водораствор ся к микробиолои токсикологии и о при сравнительрактеристике вои препаратов, а х предприятиях роля за токсичныществами,е относит дованиям ользован ической ха веществ мышленнь кого конт имыми ве(71) Научно-исследовательский институт профилактической медицины МЗ ЭССР и Научно-исследовательский институт цитологии АН СССР(56) Авторское свидетельство СССР М 1257518, кл. Ь 01 М 33/48, 1986.Игнатьева А.Д., Шаблий В.Я. Использование инфузорий тетрахимена пириформис как тест-объекта при биологических исследованиях в с/х, М., 1978, с, 42,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКС СТИ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВЕЩЕС Цель изобретения - повышение чувствительности способа и сокращение времени определения.Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения токсичности водооастворимых веществ путем экспозиции исследуемого вещества с инфузориями ТетгаЬуаепа ругЮогез подсчет количества погибших клеток осуществ(57) Изобретение относится к микробиологическим исследованиям и может быть использовано для зкспрессной сравнительной токсикологической характеристики водорастворимых веществ и препаратов, а также на промышленных предприятиях для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами. Цель изоб ретения - повышение чувствительности способа и сокращение времени определения. Для этого культуру инфузории Тегайугпепа ругИоггпз выдерживают с добавленным исследуемым веществом при температуре культивирования, воздействуют на нее сублетальной температурой и подсчитывают количество погибших клеток, Строят график зависимости процента погибших клеток от концент- ф рации исследуемого вещества. 2 табл. ляют после Воздействия на культуру сублетальнои температуры.Способ осуществляют следующим образом,Суточную культуру инфузорийТе 1 гайувепа ругИогвз культивированнуюв глюкозно-дрожжевой среде (рН = 7,1) исодержащую определенное количество,особей в 1 мл, разливают в пробирки. В зтиже пробирки добавляют исследуемое вещество в нескольких концентрациях (максимальная из концентраций, вносимых вкультуру, должна не вызывать гибели инфузорий после тридцатиминутного контакта свеществом при температуре культивирования, но вызывать их гибель, близкую к100, после пятиминутного воздействияпри сублетальной температуре). Культуру с1656454 Таблица 1 аблица добавленным исследуемыМ веществом выдерживают 30 мин в термостате при температуре культивирования, после этого пробирки помещают на 5 мин в термостат с сублетальной температурой и проводят 5 , подсчет количества погибших клеток, Далее высчитывают процент погибших клеток от начальной плотности культуры. Исследовав таким образом ряд концентраций веществ, строят график зависимости процента погиб ших клеток от концентрации на пробит-логарифмической сетке и графически находят концентрацию вещества, вызывающую 50,-ную гибель инфузорий. Данные заносят в таблицу для сравнения степени токсич ности различных веществ путем сравнения концентраций, вызывающих 50 -ную гибель клеток.П р и м е р 1, Суточную культуру инфузорий Те 1 гапупепа ругНогп 1 з, культивиро ванную в глюкозно-дрожжевой среде (0,1 г дрожжевого экстракта, 1,5 г глюкозы, 0,1 г ЙаО, 100 мл дистиллированной воды, рН= = 7,1) при 27 С и содержащую 69 тыс, особей в 1 мл, в количестве 1 мл помещают в 25 5 пробирок и добавляют исследуемое вещество - . 1,2-дихлорэтан в пяти концентрациях: 0,6 мг/мл, 0,65 мг/мл, 0,7 мг/мл, 0,91 мг/мл и 1;3 мг/мл (по предварительным опытам концентрация 1,2-дихлорэта на 1,3 мг/мл не вызывает гибели инфузорий после 30-ти минутного контакта при 27 С, а при 38 С в течение 5 мин наблюдается почти 100%-ная гибель инфузорий). Пробирки помещают в термостат и 35 инкубируют в течение 30 мин при 27 С, После этого пробирки помещают в термастат при 38 С на 5 мин. Затем проводят подсчет количества погибших клеток в камере Горяева и высчитывают процент погибших клеток от начальной плотности культуры. Так, после воздействия сублетальной температуры в пробирке с концентрацией 1,2-дихлорэтана 0,60 мг/мл погибло 15594 особей, что соответственно от первоначальной плотности составляет 22,6/,. Аналогично определяют процент погибших инфузорий при других концентрациях,Данные по проведенным экспериментам приведены в табл. 1.Получают пять точек, по которым методом пробит-анализа графическим путем находят концентрацию 1,2-дихлорэтана, вызывающую 50%-ную гибель инфузорий - , 0,62 мг/мл.П р и м е р 2, Постановку опыта и подсчеты проводят также, как в примере 1, но исследуют другие вещества - диметилформамид и ацетонитрил.Результаты проведенных экспериментов представлены в табл. 2,Формула изобретения Способ определения токсичности водо- растворимых веществ путем инкубации исследуемого вещества с инфузорией и подсчета количества погибших клеток, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения чувствительности и сокращения времени определения, перед подсчетом на инфузорию воздействуютсублетальной температурой.Продолжение табл. 2 ическим путем т црмо ит-анализСоставитель И. Агафоноваедактор А. Ревин Техред М.Моргентал Корректор С, Шевкун Заказ 2049 Тираж 42.0 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям приГКНТ С113035, Москва, Ж, Раушская нэб., 4/5изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 10