Способ диагностики лептоспироза

.П.АраЛептост, 1988. ТОСПИИзобретение именно к лабор фекционных забол реакциями нейтроЦелью иэобре ние точности диагСпособ осущ разом. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИГ 1 РИ ГКНТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬС(71) Кубанскийгосударственный мский институт им, Красной Армии(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЛЕРОЗА относится к медицине, ааторной диагностике иневаний специфическимифилов. тения является повышеноэа лептоспироза.ествляют следующим обВ 2 пробирки вносят по 0,02 мл 50-ного раствора цитрата натрия, в каждую иэ них добавляют по 0,05 мл капиллярной крови, взятой из пальца, а затем в опытную пробирку добавляют 0,01 мл неразведенной убитой поливалентной лептоспирозной вакцины, в контрольную - 0,01 мл физиологического раствора, Пробирки со смесями инкубируют в термостате при 37 С в тече(57) Изобретение относится к медицине, в частности к инфекционной иммунологии для выявления лептоспироза, Цель изобретения - повышение точности способа, Инкубируют пробы цитратной капиллярной крови обследуемых, в одну иэ которых добавляют убитую поливалентную лептоспирозную вакцину, в другую (в качестве контроля) - физиологический раствор, затем определяют количественную разницу числа поврежденных нейтрофилов в опытной и контрольных пробах, определяя показатель повреждения нейтрофилов (ППН). При этом при ППН, равном 0,14 и выше, диагностируют лептоспироз. Точность способа 100, по прототипу - 28-5;4. ние 90 мин, Из содержимого каждой пробирки готовят мазки крови, высушивают их на воздухе, фиксируют в смеси Никифорова в течение 1 мин и окрашивают по Романовскому 5 мин. Показатель повреждения нейтрофилов (ППН) подсчитывают по формулеППН100где Н 1 и Н 2 - число поврежденных клеток в опыте и контроле соответственно на 100 подсчитанных клеток,Нейтрофильные лейкоциты по степени повреждения их под влиянием специфического диагностикума (поливалентной убитой лептоспирозной вакцины) делят на 2 группы: 1-я - неизменные нейтрофилы или нейтрофилы с начальными формами клаэма 16494395 10 15 20 25 30 Ф 5 40 45 50 таза, 2-я - нейтрофилы с резко выраженным клазматозом.Для изучения теста повреждения нейтрофилов (ППН) проведены обследования 9 здоровых лиц, 13 больных вирусным гепатитом и 24 больных лептоспирозом. Диагноз вирусного гепатита был поставлен клинически и эпидемиологически и подтвержден серологически в поздние сроки заболевания реакцией агглютинации-лизиса лептоспир.Проведенные исследования позволили установить специфичность данного способа диагностики, поскольку у здоровых лиц и у больных вирусным гепатитом этот показатель был одинаков (Р005) а ч больных лептоспирозом бь 1 л значительно выше (Р0,001). Изучение активности щелочной фосфатазы нейтрофильных лейкоцитов М.Г,Шубичем, Н.Б,Примаченко, В.В,Лебедевым позволило устаноглть повышение ее активности у больных лептоспы,.озом по сравнению с бальными вирусным гепатитом (Р0,001),Реакция агглютинации-лизиса лептоспир была изучена у 23 больных лептоспирозом, положительные результать 1 получены в 15 случаях (65,2 ф/) преимущественно в 2-3 недели заболевания,Результаты исследования свидетельст вуют о развитии специфической сенсибилизации нейтрофильных лейкоцитов у больных лептоспирозом уже на 1-й неделе заболевания, что можно использовать для повышения достоверности диагноза лептоспироза и дифференциальной диагностики лептоспироза от вирусного гепатита.П р и м е р 1. Больной Д, 29 лет, направлен в стационар на 4-й день болезни с диагнозом: ОРЗ с менингеальными явлениями. При поступлении жаловался на слабость, головную боль, тошноту, рвоту, озноб, повышение температуры тела. Заболевание началось с головной бали, тошноты, однократной рвоты, на следующий день повысилась температура тела до 39 С, усилилась головная боль, появились боли в мышцах всего тела, пояснице, все последующие дни температура тела держалась на высоких цифрах. За 2 недели до заболевания купался в реке. Состояние больного при поступлении тяжелое. Кожа обычной окраски, имеется иньекция сосудов склер, Зев гиперемирован, на задней стенке гнойные увеличенные фолликулы, кровоизлияния. В легких выслушиваются единичные сухие хрипы. Тоны сердца глухие, пульс 55-56 ударов в минуту, АД - 80/40 мм рт,ст. Печень ниже реберной дуги на 2 см. Отмечается выраженная ригидность мышц затылка, Анализ крови; эритроциты - 4,65 х 10 г/л,32 гемоглобин - 153 г/л, ц.п. - 1, лейкоциты - 43 х 10 г/л, п 2 с 74, л 20, м 4,9С О Эмм/ч. Общий билирубин -10 4 ммоль/л, прямой - О, тимоловая проба - 5 ед, сулемовая проба - 2,0, АЛТ - 1,2 ммоль/л, АСТ - 0,6 ммоль/л. Анализ мочи, уд. вес. 1021. зпит, кл, - единичные, лейкоциты - единичные, В стационаре у больного заподозрен лептоспироз, На 7-й день болезни взято по 0,05 мл крови из пальца в 2 пробирки с 0,02 мл 5 Я,-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убитой поливалентной лептоспирозной вакцины, в контрольную - 0,01 мл физиологического раствора. Пробирки инкубировали при 37 С в течение 90 мин, затем из содержимого каждой пробирки готовили мазки крови, высушивали их на воздухе, фиксировали в смеси Никифорова в течение 1 мин, окрашивали по Романовскому в течение 5 мин, Затем мазки крови микроскопировали, определяли показатель повреждения нейтрофилов. Число поврежденных нейтрофилов в.опыте составило 50, в контроле - 36, ППН - 0,14, На 8-й день болезни реакция агглютинациилизиса лептоспир (РАЛ) положительна с лептоспирой иктерогеморрагия в разведении 1;100, Больному поставлен диагноз; лептоспироз.П р и м е р 2. Больной К. 17 лет, поступил в стационар на 5-й день болезни с подозрением на лептоспироз, Заболел остро с повышения температуры тела до 39 С, беспокоили головные боли, боли в икроножных мышцах, на 4-й день болезни появились кровоизлияния в склеры, температура тела оставалась высокой, Из анамнеза выяснено, что больной купался в реке и пил из реки воду, При поступлении больной жаловался на слабость, головные боли, носовые кровотечения, головокружение. Состояние больного при поступлении средней тяжести, ближе к тяжелому, Зев гиперемирован, зернист, миндалины увеличены, В легких - везикулярное дыхание, тоны сердца чистые, пульс 101 удар в минуту, АД 100/60 мм рт.ст, Печень пальпируется ниже реберной дуги на 1 см, селезенка не пальпируется. Имеется ригидность затылочных мышц, симптом Кернига положительный с обеих сторон. Анализ крови: эритроциты 3,99 х 1012 г/л, гемоглобин - 133 г/л, цп - 1, лейкоциты - 6,6 х 109 г/л, з, с О, л, м, СОЭмм/ч, Общий билирубин - 27,87 ммоль/л, прямой - 10,43 ммоль/л, тимоловая проба 23 ед, сулемовая проба - 1,74, АЛТ - 0,9 ммоль/л, АСТ - 0,4 ммоль/л, Анализ мочи; белок - 0,033 г/л, плоскийэпителий-едлейкоциты -единичные, На 11-й день болезни взято по 0,05 мл крови из пальца в 2 пробирки с 0,02 мл1649439 50 Составитель Г, КрюковаРедактор Т. Лазоренко Техред М.Моргентал Корректор И.Муска Заказ 1519 Тираж 418 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета но изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-,35, Раушская наб., 415 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 50-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убитой поливалентной лептоспирозной вакцины, в контрольную - 0,01 мл физиологического раствора. Затем смеси инкубировали в термостате при 37 С в течение 90 мин. Из содержимого каждой пробирки готовили мазки крови, высушивали их на воздухе, фиксировали 1 мин в смеси Никифорова, окрашивали по Романовскому в течение 5 мин. Мазки микроскопировали и определяли ППН), Число поврежденных нейтрофилов в опыте составйло 90, в контроле - 28, ППН = 0,62, На 15-й день болезни реакция агглютинации-лизиса лептоспир положительна с лептоспирой иктерогеморрагия в разведении 1:400, Больному постаьлен диагноз: лептоспироз.П р и м е р 3. Больной 827 лет, поступил в стационар на 4-й день болезни с диагнозом: вирусный гепатит, При поступлении жаловался на общую слабость, мышечные боли, головную боль. Заболевание началось с отсутствия аппетита, однократной рвоты, жидкого стула, тошноты, головной боли, повышения температуры тела до 39,6 С, болей в грудной клетке, пояснице, икроножных мышцах, наблюдалось снижение диуреза. Из анамнеза выяснено, что больной в течение гюследнего месяца купался в рисовых чеках, Состояние больного при поступлении неудовлетворительное. Склеры умеренно иктеричны, иньекцированы. Тоны сердца ясные, ритм правильный, пульс - 80 ударов в минуту. АД - 90/60 мм р,ст. В легких дыхание везикулярное, ослабленное. Язык подсушен, несколько обложен белым налетом, Живот мягкий, чувствительный при пальпации в правом подреберье, печень у реберного края. Анализ крови: эритроциты - 4,56 х 10 гл гемоглобин - 152 г/л, лейкоциты - 6,2 х 10 г/л, з-б, с-бб, л, м, плазм. кл.-1, СОЭммlч. Общий билирубин - 10,43 ммольл, прямой - О, тимоловая проба - 5 ед. АЛТ - 0,2 ммоль/л, АСТ-О, сулемовэя проба - 2,0. Анализ мочи; уд.вес 1013. реакции кислая, белок - 0,033 гlл, лейкоциты - единичные. Реакция агглютинации-лизиса лептоспир на 6-Й день отрицательна, на 25-й день - положительна с лептоспирой иктерогеморрагия 1:100. На 9-й день болезни взято по 0,05 мл крови из 5 пальца в 2 пробирки, содержащие по 002 мл5-ного раствора цитрата натрия, в опытную пробирку добавлено 0,01 мл убигой полизаленгной лептоспирозной вакцины, в контрольную - 0,01 мл физиологического 10 раствооа. Затем пробирки инкубировали втермостате при 37 С в течение 90 мин, Из содержимого каждой пробирки готовили мазки коови, высушивали их на воздухе, фиксировалй 1 мин в смеси Никифорова, 15 окрашивали по Романовскому в течение 5мин. Мазки микроскопировали и определяли число поврежденных нейтрофилов в опыте и контроле, котооое составило соответственно 60 и Зб, ППН = 0,24, что 20 подтверждает диагноз лептоспироза, Приповторном определении показателя повреждения нейтрофилов на 17-й день болезни число поврежденных нейтрофилов в опыте и контроле составило соответственно 25 бб и 28, ППН = 0,38, Больному поставленокончательный диагноз: лептоспироз,Таким образом при использовании изобретения повышается точность диагноза лептоспироза, что позволяя, своевременно 30 назначать адекватную зтиотропную и датогенетическую терапию и улучшает прогноз заболевания. Способ специфичен, не тоебует дефицитных реактивов, специального оборудования, легко выполним в любой ла баратории лечебно-профилактических учреждений.Точность способа составляет 1004, по прототипу - 28,5 Я. Формула г зобретения 40 Способ диагностики лептоспироза путем добавления исследуемого материала к клеткам лептоспир, о т л и ч а ю щ и й с я тем.что, с целью повышения точности способа, исследуемую цитратную кровь добааляют к 45 убитой поливалентной лептсспиоозной вакцине, определяют показатель повреждения нейтрофилов и при показателе его, равном ,0,14 и выше, диагностируют лептоспироз,