Способ диагностики функциональной недостаточности печени при вирусном гепатите

10 2граммах определяют уровень свободного холестерина и его эфира - холестероларахидоната и при повышении уровня холестерина с одновременным снижением уровня его эфира относи-. тельно нормы диагностируют функциональную недостаточность печени.Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.0,5 мл сыворотки крови вносят в пробирку с притертой пробкой с 10 мл смеси хлороформ-метанол (2:1) и периодически перемешивают в течение 1 ч, Осадок отфильтровывают, а к фильтрату добавляют 0,2 объема дистиллированной воды, интенсивно встряхивают и оставляют в холодильнике до разделения смеси на две фазы Верхний водно-метаноловый слой отсасывают и удаляют, а нижнюю хлороформную часть смеси переносят в коническую колбу и выпаривают в вакууме при подогревании не выше 40 С. Липидный остаток растворяют в 0,5 мл хлороформ-метаноловой смеси (2:1). Полученный липидный экстракт наносят на 20 мкл в виде узкой полоски на пластинку Бд 1 цГо 1 БЧ, отступя на 1,5 см от нижнего края. Используют пластинки размером 15 см, которые резрезают на две части и на каждую из них наносят два образца липидов. После нанесения экстракта липидов, хроматографическую пластинку помещают в камеру с системой растворителей, насыщенную их парами, Камерой для хроматографии может служить стеклянная банка с притертой крышкой. В качестве системы растворителей используют смесь н-гептан-толуол (80: 20) . После прохождения системы растворителей.до верхнегокрая, пластинку извлекают из хроматографической камеры, высушивают на воздухе и вновь помещают в камеру, Процесс разделения повторяют, 5 раз. На каждое разделение затрачивают около 20 мин. Затем хроматограммы проявляют опрыскиванием 107-ным спиртовым раствором Фосфорномолибденовой кислоты и нагревают в сушильном шкафу при 80 С в течение нескольких минут до появления интенсивно окрашенных синих пятен на желтом фоне, На хроматограммах обнаруживают 6 пятен. Первое пятно соответствует сложным эфирам холестерина с насышенными жирными кислотами, второе 1 11289Предложенный способ относится кмедицине и может быть использовандля оценки функционального состоянияпечени при вирусном гепатите.Известнонесколько сот способовдля оценки функционального состоянияпечени, но считают, что важнейшихфункциональных проб печени лишь немногим более 30 И ,Известен способ диагностики функциональной недостаточности печени поопределению холестериновых фракций всыворотке крови хроматографическимметодом.Сущность этого способа заключа- ,15ется в том, что липиды, экстрагированные из сыворотки крови, разделяютна стеклянных пластинках в слое кремниввой кислоты в системе гексан-эфир-уксусная кислота (90:10:1). 20После проявления фракции липидов изхроматаграмм переносят в парные рядыпробирок, один из которых используютдля прямого метанолиза и последующего.гаэохроматографического анализа, а 25другой для количественной йодометриии определенияпроцентного соотношенияфракций липидов по йоду. О функциональной недостаточности печени приостром холецистите, инфекционном З 0мононуклеозе, раке, циррозе печении вирусном гепатите судят по процентному соотношению ряда жирныхкислот, холестерина и других неидентифицированных Фракций стеринов 2, З 5Однако известный способ трудоемок, включает ряд промежуточныхэтапов, таких как приготовление пластин для тонкослойной хроматографии,перенос фракций липидов из храматограмм в парные ряды пробирок, проведение метанолиза и количественноййодометрии, газохроматографическийанализ и не обеспечивает быстройоценки фунщианального состояния печени вследствии того, что длительноидет подготовка проб к анализу.Кроме того, для анализа требуетсяот 1,5 до 2,5 мл крови.Цель изобретения - упрощение и 50снижение травматичности способа,Поставленная цель достигаетсятем, что способ диагностики функциональной недостаточности печени привирусном гепатите проводят путем 55исследования холестериновых Фракцийсыворотки крови методом тонкослойнойхроматографии, при этом на хроматохолестеродолеату, третье - холестероллинолеату, четвертый - холестероларахидонату, пятое - сложным эфирам холестерина с С 2-С жирными кислотами и шестое (на старте) - свободному холестерину. Интенсивность окраски пятен изучаемых фракций на хроматограммах оценивают на денситометре типа ВИАН в отраженном свете, Полученные количественные данные при 1 О деситометрии каждой фракции суммируют и их сумму принимают за 1007., а из полученной суммы высчитываютпроцентную концентрацию каждой фракции.П р и м е р 1. Больная А, 28 лет. 15 Поступила в инфекционную больницу на 5-й день болезни, 2-ой день желтухи с жалобами на общую слабость, боли в эпигастрии, изменение цвета мочи. 20При поступлении общее состояние удовлетворительное, кожные покровы и видимые слизистые желтушны. В легцих и сердце без изменений. Пульс 80 ударов в минуту, ритмичен, 25 АД 115/60 мм рт.ст. Язык влажный, обложен серым налетом. Живот мягкий, болезненный при пальпации в области эпигастрии, Печень выступает из подреберья на 1,0 см. СелезенкаЗО пальпируется в положении на боку,Во время пребывания в стационаре явления интоксикации держались 3 дня.Определяют в крови больного процентное содержание холестероларахидо-З 5ната и свободного холестерина (припоступлении, т.е. до лечения, нафоне лечения, перед выпиской и через10 дней после выписки иэ стационара),которые соответственно равны: холе Остероларахидонат 10,20-11,6910,15-8 127, норма - 14,367., свободный холестерин 20,40-1.6,88, 88-18,40-30,737., норма - 18,837.Диагноз: у больной в . функциональная недостаточност печени. Допол-,нительные исследованил подтвердилидиагноз.П р и м е р 2. Больная Г, 30 лет.Поступила в инфекционную больницу . 50на 7 день болезни, 3"й день желтухис жалобами на слабость, головнуюболь, тошноту, потемнение мочи.При поступлении кожные покровы,видимые слизистые и еклеры глаз уме" 55ренно желтушны. В легких и сердце .без,изменений, Пульс 78 уд/мин,АД 110/70 мм рт.ст. Язык влажный,обложен серым налетом. Живот мягкий, безболезненный, Печень выступает иэ подреберья на 2,5 см, болезненна при пальпации.В стационаре явления интоксикации держались 10 дней.Определяют в крови больной процентное содержание холестероларахидоната, и свободного холестерина (при поступлении, т.е. до лечения, на фоне лечения, перед выпиской и через 10 дней после выписки из стационара), которые соответственно равны: холестероларахидонат 4,32- 10,00-11,40-9,627, норма -14,367, свободный холестерин 42,98-24,86- 24,63-28,467, норма 18,837Кроме того, общий билирубин крови изменяется в динамике заболевания и составляет 148,8-37,6-18,8- 20, 5 мкмоль/л, норма - 149 мк моль/л.Диагноз: несмотря на нормальное содержание билирубина и трансаминаз в крови перед выпиской из стационара и через 10 дней после выписки нормализации уровня холестероларахидоната и свободного холестерина не происходит, что говорит о функциональнойнедостаточности печени.П р и м е р 3. Больная Х, 39 лет,Поступила в больницу на 10-ый деньболезни, 3-й деньжелтухи с жалобамина общую слабость, отсутствие аппетита, тошноту, однократную рвоту,головокружение,При поступлении кожа, видимыеслизистые и склеры глаз ярко желтушные. В легких беэ изменений. Пульс84 уд/мин. АД 100/65 мм рт.ст. Языкгусто обложен серым налетом. влажный.Живот мягкий, печень выступает на3,5 см из подреберья, болезненна припальпации. Пальпируется селезенка.К 12 дня болезни ьаросли явленияинтоксикации, нарушился сон, рвотаусилилась до 3-х раз в день, нарослажелтушность. Явления интоксикациив стационаре держались 14 дней.У больной берут 0,1 мл крови,Определяют в крови больной процентное содержание холестероларакидоната, и свободного холестерина (припоступлении, т.е. до лечения, нафоне лечения, перед выпиской и через10 дней, после выписки из стационара),Ькоторые соответственно равны: холестероларахинонат 7,14-13,18,13,00-11,747, норма - 14,367, сво1128910 Составитель Н. ХрусталеваРедактор А. Ревин Техред З.Палий Корректор О, Луговая Заказ 9268/4 Тираж 687 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж, Раушская наб., д. 4/5Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 бодный холестерин 50,00-19,76"31, 75-28,473, норма - 18,837,Кроме того;в динамике заболеванияобщий билирубин 205,2-70,1-22,2- 5119 мкмоль/л, норма - 14,9 мкм моль/л. Диагноз: функциональная недостаточность печени.Способ позволяет обеспечить более быструю и менее травматичную оценку функционального состояния печени при вирусном гепатите.