Способ получения биомассы хламидий

СОКИ СОВЕТСНИХСОУДЗЮщепеРЕСПУБЛИК Е ИЗОБРЕТЕНИЯ ТВ МУ СВИДЕ АВТОР йве ов вирй 1 ЕНИЯ БИОМАССЫ ХЛА(54) СПОСОБ ПОЛУ МИДИЙ(57) Изобретение микробиологии, в нологии попучени для производства лечебно-профилак ла носится ости к биотехассы хламидий ч ки павшего эмбриона ачестве биомассы хл тоисные об и используюмидий. 1 ких г иост л. ч еских пр еп арато ЦИ дн ши ч,денных эмтом и обжи ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОЧНРЫТИЯМПРИ ЛЮТ СССР(56) Лабораторная диагностиканых и риккетсиозных заболеванМ., 1974, с. 726,Изобретение относится к микробиологии, в частности к биотехнологии получения биомассы хлакщий для производства диагностических и лечебно- профилактических препаратов,Целью изобретения является увеличение выхода биомассы.П р и м е р 1. Хламидиосодержащую суспензию желточного мешка разво дят до 10 фи вводят в желточную полость куриного эмбриона по известной методике в дозе О, 2 мп; Отверстие в скорлупе после заражения заливают парафином и эмбрионы помещают в термостат с увлажненной атмосферой при 37 38 С. На второй день после зараже(51)5 С 12 И 1 20 А 61 К 39/118 Целью изобретения является увеличение выхода биомассы хламидий на инфицированных куриных эмбрионах. Это достигается за счет выращивания бактериальной массы одновременно в желточной и аллантоисной полостях куриных эмбрионов. Для выполнения способа 6-7-дневные эмбрионы инфицируют разведенной до 10 - 10 суспензиеи-Э -4хламидий в желточиый мешок, 1-2 дня культивируют, овосконируютзатем живые эмбрионы инфицируют повторно в аллантоисную полость тем же мате-Эриалом в разведении 10 -10, культивируют 4 - 6 .дней, после чего аллантоисную жидкость, желточные и алланния проводят овоскопию. Оставшиеся живыми эмбрионы заражают повторно в аллантоисную полость хламидиосодержащей суспензией, разведенной до 10в дозе 0,2 мл, Отверстие в скорлупе после заражения заливают парафином и эмбрионы снова помещаю в термостат для продолжения инкубаи, Инфицированные эмбрионы ежеевно овоскопируют. Эмбрионы, паве на третий день после заражения в желточный мешок считают неспецифиески павшими,Перед вскрытием скорлупу охлажбрионов дезинфицируют спиргают, Эмбрионы вскрываютпутем срезывания скорлупы несколько выше границы воздушной камеры, Перво- нач ал ьно отсасывают пр озрач ную слегка опалесцирующую аллантоисную жидкость пастеровской пипеткойсоединенной с сифоном, находящимся под разрежением, затем (Иосле удаления инфицированной аллантоисной жидкости) в отдельную посуду двумя пинцетами удаляют зародыппф, При этом отсекают пупочный стебель и извлекают желточную и хорионаллантоисные оболочки вместе с сопутствующим желтком. Выход хла,мидиосодержащего материала из 120 ку,риных эмбрионов с учетом потерь со:ставляет 636 или 5,3 г на один инфицированный эмбрион, что в 9,4 раза больше по сравнению с биофабричной технологией. Инфекционный тито био 8 20 массы при этом составляет 10"Э 5 Щп в 0,2 мл. Комплементсвязывающий хламидийный антиген,приготовленный из данной биомассы, показал активность в РСК 1;256. Выход антигеиа на 1 использованный эмбрион составил 10 мл, что в 9-10 раз. больше по сравнению с биофабричной технологией.П р и м е р 2, Эмбрион заражают в в желточную полость суспензией 104) желточного мешка в дозе 0,2 мп. На второй день после заражения эмбрионы овоскопируют, удаляют павшие эмбрионы, а остальные инфицируют повторно в аллантоисную полость суспензией, разведенной до 35 10 9 в дозе 0;2 мп. Инкубацию эмбрионов проводят в течение 8 дней. Павшие эмбрионы по мере их гибели охлаждают и вскрывают, при этом отсасывают хламидиосодержащую аллантоисную 40 жидкость и отбирают желточную и хорионаллантоисную оболочки. От 120 куриных эмбрионов получают 452 мп хламидиосодержащей аллантоисной жидкости и 130 г инфицированных оболочек. 45 Выход хламидиосодержащего материала с инфекционньк титром 10 ЭЛД п в6 Фч 0,2 мл составляет 582 или 4,8 г на один инфицированный куриный эмбрион, что в 9,6 раза больше биомассы данного штамма, полученного при заражении только в желточный мешок. Из полученной биомассы готовят экспериментальную инактивированную эмульсионную вакцину против хламидиозного аборта крупного рогатого скота и испытывают ее иммуногенную активность на белых мышах и нетелях. Вакцина в дозе 0,2 мл обеспечивает иммунологическую устойчивость к контрольному заражению вирулентным штаммом хламидий у 91,77 вакцинированных мьппей. Двукратное подкожное введение экспериментальной вакцины в дозе по 1,5 ми нетелям предохраняет их от развития хламидиозного аборта крупно. го рогатого скота после контрольного заражения вирулентным штаммом хламидий (см. таблицу).Таким образом, предлагаемый способ выращивания биомассы хламидий позволяет более эффективно использовать широкодоступную биологическую модель - куриные эмбрионы при выращивании хламидий для целей биотехнологии. Формула изобретенияСпособ получения биомассы хламидий, включающий заражение и культивирование суспензии хламидий в желточной полости куриных эмбрионов с последующим сбором хламидосодержащего материала и вьделением биомассы, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода биомассы, через 1-2 дня после заражения эмбрион дополнительно инфицируют в аллантоисную пълость суспензией хламидий в-2 Юразведении 10 -10 в дозе 0,2 мп и культивируют в течение 4-6 дней, при этом выделение биомассы производят из всего инфицированного материала.1641883 Данные по исходу беременности опытной н контрольной группы нетелей после экспериментального запалепя возбудителем хламидиозпого аборта крупного рогатого скота Наличне хламиднй в пла- центе Характеристика плода а какойень посл оличеств вотныхрупп Развитие ни с 1 Хорошее 9 Хорошее Нольше 8 :опыте 8 Не беременнаяНормальные родСоставитель А.Техред М,ДРдик тов Корректор М.Демчик азоренк кт Подписно Заказ 1126 Тира)х 388ВНИИПИ Государственного комитета. но изобр113035, Москва, Ж, Раув ениям и открытиям при ГКНТ СССРкая наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Уагород, ул. Гагарина,10 52 36 53 13 озраст,мес,копо 8