Способ определения водорастворимого меланина

союз советскихсоциАлистическихРЕСПУБЛИК 3513 1 й ЗЗ/52, 33/4 ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН меланина определяют по степени ингибирования реакции восстановления нитросинего тетраэолия в формаэан в слабощелочной среде рН 8,2 в присутствии феназинметосульфата и восстановленного никотинамидадениндинуклеотида - НАДН 2, или по ускорению реакции авто- окисления адреналина в щелочной среде рН 10,2. Количество меланина определяют спектрофотометрически по изменению начальной скорости образования продукта реакций по сравнению с контролем. (В первом случае - по торможению начальной скорости образования формаэана и ри 560 нм. во втором - по ускорению начальной скорости образования адренохрома при 500 нм).3 табл,никотинамидадениндинуклеотида - НАДН 2 или по ускорению реакции автоокисления адреналина в щелочной среде рН 10,2. Количество меланина определяют спектрофотометрически по изменению начальной скорости образования продукта реакций по сравнению с контролем. В первом случае - по торможению начальной скорости образования формаэана (Ч) при 560 нмЬ 05 е), т - 1 мин), во втором - по ускорению начат ьной скоростивания адренохрома (Ч,) при браэо 0 нм 1 мин). Концен итывают по калиброац меланина раскривым,Примеции меланинстановления очным ОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМРИ ГКНТ СССР ТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВ(71) Самаркандский государственный университет им. А. Навои(56) Авторское свидетельство СССР ЬЬ 1107053, кл. 0 01 й 33/48, 1983,(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОДОРАСТВОРИМОГО МЕЛАНИНА(57) Изобретение относится к методам биохимического анализа, в частности к способам определения концентрации меланиновых пигментов. Цель изобретения - повышение точности способа. Количество Изобретение относится к методам биохимического анализа, а именно к способам определения концентрации меланиновых природных и синтетических пигментов, и может быть использовано в научно-исследовательской работе и медицине.Цель изобретения - повышение точности способа.Способ осуществляют следующим обраэом.Для количестведорастворимого мелтрофотометрическиесупероксидного радКоличество меланинни ингибирования рнитросинего тетразослабощелочной средфенаэинметосульфа ного определения вонина применяют спек методы обнаружения икала в водной среде определяют по степе- акции восстановления лия (НСТ) в формазан в е рН 8,2 в присутствии а и восстановленного 1. Определение концентрас применением метода воснитросинего тетраэолия, Вспектрофотометрическую кювету толщиной 10 мм, содержащую 50 мкМ нитросинего тетразолия (0,5 мл), 4,5 мкМ фенаэинметосульфата (0,2 мл),в 0,05 М пирофосфатном буфере рН 8,2 с О.б 9 мкМ ЭДТА. добавляют 0,2 мл водного раствора пробы, содержащей меланИювыйпигмент, Непосредственно перед спектрофотометрированием в реакционную смесь добавляют 384 мкМ (1 мл) восстановленного никотинамидадениндинуклеотида - НАДН 2, Общий объем реакционной смеси равен 3 мл, Контролем служит проба, не содержащая меланина, Все растворы, кроме буферного, готовят в день анализа и содержат в темной посуде.Результаты определений меланиновых пигментов, полученных иэ виноградных выжимок и иэ выделений тутового шелкопряда, приведены в табл. 1.П р и м е р 2, Определение концентрации меланина применением метода авто- окисления адреналина в щелочной среде. В спектрофотометрическую кювету толщиной 10 мм, содержащую 2,3 мл 0,2 М раствора йа-карбонатного буфера рН 10,2, добавляют 0,2 пробы и непосредственно пере спектрофотометрированием 0,5 мл 5,4 х 10 раствора адреналина (гидротартрата) в 0,2 0 ьной лимонной кислоте. Количество меланина определяют по величине начальной скорости образования продукта окисления адреналина - адренохрома при 500 нм или по проценту ускорения реакции по отношению к контрольной, пользуясь калибровочными кривыми,Результаты определений меланиновых5 пигментов иэ виноградных выжимок и иэвыделений гусениц тутового шелкопрядаприведены в табл. 2,В табл. 3 представлены данные, подтверждающие более высокую точность10 предлагаемого способа по сравнению с из-,вестным способом.Таким образом, использование предлагаемого способа обеспечивает повышениеточности по сравнению с способом-прото 15 типом,Формула изобретения Способ определения водорастворимогомеланина, включающий обработку пробы и 20 спектрофотометрическую регистрацию, о тличающийся тем,что,сцельюповышения точности способа, пробу добавляют в систему генерации супероксидных радикалов феназинметосульфат-восстановленный 25 и никотинамидадениндинуклеотид в присутствии нитросинего тетразолиевого или адреналин в щелочной среде, а содержание меланина определяют по степени ингибирования скорости восстановления нитроси него тетраэолиевого или по степениувеличения скорости образования адренохромэ.Таблица 1163513 ц Таблица 2 ца 3 Составитель Н, ГуляеваТехред М,Моргентал Коррек едактор А.Ревин липен и ГКНТ С гарина, 10 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгор Заказ 754 Тираж 431 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открыт 113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5