Способ качественного определения гемолитической активности бактерий

Союз СоеетскнхСоцналнстнческнхРеспублнк ОПИСАНИЕИЗОБРЕТЕНИЯК АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ по 899644(088,8) Государственный комитет СССР по делам изобретений и открытий(54) СПОСОБ КАЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕМОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАКТЕРИЙ Изобретение относится к микробиологии, а именно к способам определения гемолитической активности бактерий.Известен способ качественного определения гемолитической активностибактерий по результатам визуальногонаблюдения зон гемолиза, образуемыхпри инкубации изучаемых культур накровяном агаре 1),Известен также способ качественного определения гемолитической активности бактерий путем воздействияжидкой фазы бактериальной взвеси наэритроциты и последующей регистрацииокрашивания жидкой фазы продуктамигемолиза,согласно которому исследуемые культуры инкубируют на жидкойпитательной среде со взвесью эритроцитов и судят с гемолитической активности бактерий по окраске среды продуктами гемолиэа 2.Недостатком известных способовявляется их длительность.Цель изобретения - ускорение определенияЭта цель достигается. тем, чтосогласно способу качественного определения гемолитической активностибактерий путем воздействия жидкой фазы бактериальной взвеси на эритроциты и последуюцей регистрации окрашивания жидкой фазы продуктами гемолиза, воздействие осуцествляютпутем пропускания жидкой фазы черезполоску хроиатографической бумаги,на которую нанесена проба эритроцитов, а окрашивание регистрируют поналичию размытой эоны продуктов гемолиэа, образуемой на полоске послепрохождения жидкой фазы через зонунанесения эритроцитов.П р и м е р . В пробирку наливают 0,5-1 мл (в зависимости от диаметра пробки) исследуемой бактериальной взвеси. Парралельно ставятконтроль - пробирку с аналогичнойжидкой фазой.На две полоски хроматографической бумаги (хромотографическая бумага Р 50 размером 0,8 х 5 см) нарасстоянии 2 см от конца микропипеткой наносят маленькую каплю 3-нойвзвеси эритроцитов.Полоски помещают в пробирки так,чтобы место нанесения эритроцитовбыло выше уровня исследуемой жидкости. Пробирки помещают в термостатпри 37 С. Можно исследование вести З 0 при комнатной теипературе. Жидкость899644 Количество пронеренныхштаммов Способ Виды микроорганизмов Известный Предлагаемый Времяопределения гемолитической активности одного штамма,мин Положительная реакция Положительная реакция Время,определения ге- молитической активности одного штамма,ч 5-10 5-10 5-10 18-24 19 18 РгоееиьЕ.со 1 18-24 18-24 18-24 18-24 В.руосеопеищ 5 5 сарЬуососсць 16 5 герйососсце 10 15 5-10 16 5-10 10. Реакция отрицательнаяКонтроль(культуры, не давшие гемолиза на кровяном агаре) Формула изобретения ВНИИПИ Заказ 12072/34 Тираж 504 Подписное Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул. Проектная, 4 поднимается, доходит до зритоцитов, Если происходит их гемолиз, то с фронтом жидкости вверх уходят продукты гемолиза, образуя над местом нанесения эритроцитов окрашенную размытую зону.Положительная реакция в виде окрашенной размытой эоны появляется через 3-10 мин, в зависимости от активности субстрата. На контрольной полоске эритроциты должны оставаться без изменений, поэтому окрашеной размытой эоны не образуется.В таблице представлены сравнительные данные известного и предлагаемого способов. Способ качественного определения гемолитической активности бактерий путем воздействия жидкой Фазы бактериальной взвеси на эритроциты и последующей регистрации окрашивания жидкой фазы продуктами гемолиза, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью ускорения определения, воздействие осуществляют путем пропуснания жидкой, фазы через полоску хроматографической бумаги, на которую Как видно из таблицы, получено совпадение результатов по определению гемолитической активности, проведенному известным и предлагаемым способами. Большинство штаммов, у которых выявлена гемолитическая активность при посевах на кровяной агар, проявили гемолитическую активность и при определении предлагаемым способом. 1 ОВремя, затрачиваемое на определение гемолитической актинности бактерий по известному способу, значительно больше времени, затрачиваемого по предлагаемому способу. 5 О нанесена проба эритроцитов, а окрашивание регистрируют по наличию размытой зоны продуктов гемолиза, образуемой на полоске после прохождения жидкой фазы через зону нанесения у эритроцитов,Источники информации,принятые во внимание при экспертизе1, Нестерова Г.Н. Биология про,тея. Горький, "Сормовский рабочий",ЙО 1972, с. 21.2, Там же (прототип),