Способ определения иммуногенной активности препаратов из адгезинов кишечной палочки

СОЮЗ СОВЕТСКИХСОЦИАЛИСТИЧЕСКИХРЕСПУБЛИК 51)5 САНИЕ ИЗОБРЕТСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ О НИ А(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ АДГЕЗИНОВ КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ (57) Использование: ветеринарная микробиология, иммунология, способы определения иммуногенных свойств препаратов, в частности, из адгезинов кишечной палочки. Сущность изобретения: подкожно иммуниэируют белых мышей адгезинами кишечной палочки, заражают перорально через 7-14 дней штаммом кишечной палочки, из которого получают адгеэины, забивают животных на 2-4 день после заражения, отбирают тонкий отдел кишечника, готовят суспензию, высевают ее на твердые питательные среды, выделяют, идентифицируют культуру, определяют частоту выделения исходного штамма. Способ упрощаети повышает точность оценки иммуногенной активности препарата. 2 табл.(21).4738 (22) 21.0 (46) 15.0 (71) Укр институт (72) А.Н. ков (53) 576. муно наук вак оза 198 19 лочки испытывают несколькими способа Известен способ определения иммуногенной активности препаратов из адгезинов путем внутрибрюшинного заражения вакцинированных лабораторных животных летальными дозами Е,соИ с гомологичным типомадгези нов.Недостатком этого способа является неполная доказательность полученных результатов, так.как при этом не учитывается иммунитет возникающий в кишечнике, где в основном и оказывают свое действие эшерихии с адгезинами, вызывая так наэыРаемую энтеротоксическую форму заболевания (колидиарею). Внутрибрюшинное зараже 1 ГОСУДАР СТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМПРИ ГКНТ СССР 784/139.892.92. Бюл.,В 6аинский научноэкспериментальГоловко, Г.В.Гнат8.097 (088.8)А,Н.Головко.Адгезитогенных для телят эгенные свойства. Авт1989, с,157.Пирожков М,К. Усоина против колибактпоросят. Автореф,, 15, ЬЬ 2, р, 111-116 исследовательский ной ветеринарии енко и Г.А,Краснивный антиген К 99 шерихий и его имореф.дис. кандвет. вершенствованная ериоза /эшерихидис. канд. вет.наук.ч. сцЬ, ойа 1 с; к 1,: Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и иммунологии, а именно к области определения иммуногенйых свойств адгезинов кишечной палочки, которая вызывает колибактериозы сельскохозяйственных животных.Адгезины (пили, фимбрии) являются одним из факторов патогенности Е,соИ. Они обеспечивают способность микроорганизмов прикрепляться к эпителию кишечника и сказывать дальнейшее болезнетворное влияние на организм животного. Из адгезинов в настоящее время производят препараты для специфической профилактики колибактериоза, Иммуногенные свойства вакцин, приготовленных из адгеэинов кишечной па 712406 Аечника, измельчают его, добавляют 10,0 мл физиологического раствора хлориа натрия и растирают в стерильной фарфоровой ступке. После этого на специальные питательные среды (Минка или УНИИЭВ) елают высев 0,1 мл суспензии кишечника. Через 24 ч культивирования при 37 С из каждого посева подвергают исследованию 10 выросших колоний в реакцИи агглютинации (РА) на стекле с антиадгезивной К 99 сывороткрй, Далее определяют средний процент выделения исходной культуры по группам и проводят сравнение. Оптимальным для оценки иммуногенной активности используемого для иммунизации мышей препарата из адгезинов Е.соИ, считается день после заражения, в который отмечается наиболее существенная разница в выделении исходной культуры из суспензии тонкого отдела кишечника иммунизированных и неиммунизированных животных.Определение выделяемости исходной культуры из суспензий тонкого отдела кишечника мышей в различные дни после заражения.П р и м е р 2, Опытные группы белых мышей массой 14-16 г иммунизируют подкожно, однократно, различными дозами (0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,7 мл) адгезивного антигена К 99, Животных контрольной группы не иммунизируют. Через,7 дней после вакцинации мышей опытных групп и животных контрольной группы заражают через рот живой культурой Е,со 1, содержащей адгезин К 99 в дозе 1 10 микробных тел.8Через 2 сут, после заражения, выделение и идентификацию исходной культуры проводят, как в примере 1.После определения процента выделения исходной культуры из суспензий тонкого отдела кишечника, иммунизированных различными дозами препарата и непривитых животных, устанавливается наиболее оптимальная доза, дающая наибольшую степень предотвращения прикрепления Е.соИ к эпителию кишечника.Выделение исходной культуры из суспензий тонкого отдела кишечника мышей, иммунизированных различными дозами адгезина К 99.Формула изобретенияСпособ определения иммуногенной актйвности препаратов из адгезинов кишечной палочки, включающий подкожную. иммунизацию животных, последующее их заражение исходным штаммом кишечной. палочки, из которого получают адгезины, и оценку результатов, о т л и ч а ю щи й с я тем, что, с целью упрощения и повышения ние дает воэможность воспроизвести лишь шсептическую форму заболевания.Наиболее близким к изобретению яв- дляется способ определений иммуногенности препаратов из адгезинов, путем 5вакцинации глубокостельных коров с по- дследующим пероральным заражением,родившихся от них телят, энтеротоксигенными Е.соИ с гомологичным типом адгезинов, Эффективность препаратов в данном 10случае устанавливается по наличию или отсутствию клинических проявлений заболевания (диареи).НеДостатком известного способа является его трудоемкость и большие расходы 15по постановке пробы в контролируемыхусловиях и то, что способ не позволяетопределить степень предотвращения антиадгезивными антителами прикрепленияэшерихий к эпителию кишечника. 20Целью изобретения является упрощение и повышение точности определениястепени иммуногенной активности препаратов из адгезинов Е.соИ при использовании в качестве биологической модели белых 25мышей,Поставленная цель достигается тем, чтопривитых препаратами из пилей Е,соИ мышей заражают через рот культурой Е.соИ сгомологичным типом адгезионов, на вто- ЗОрые - четвертые сутки после заражения мышей умервщляют, а из тонкого отделакишечника готовят суспензию, которую высевают на твердую питательную среду длякультивирования Е,соИ с адгезином, после 35культивирования проводят идентификациювыделенной культуры и ее соответствие исходной с антиадгезивной сывороткой, причем полученные данные сравнивают срезультатами заражения непривитых мышей по частоте выделения исходной Е,соИ вгруппе животных,Примеры определения степени предотвращения прикрепления Е,соИ к эпителиюкишечника белых мышей, иммунизированных препаратами адгезинов.П р и м е р 1. Беспородных белых мышей, массой 14 - 16 г вакцинируют подкожно, однократно адгезином К 99, полученнымиз культуры Е,соИ К 12 К 99, в обьеме О,З мл, 50Животных контрольной группы не прививают.Через 7 дней после вакцинации опытных животных и мышей контрольной группызаражают через рот живой культурой Е.соИ, 55всодержащей адгезин К 99 в дозе 1 10 микробных тел. Через 1-5 сут после заражения,в контрольной и опытной группах эфиромумервщляют по 5 мышей. У каждого животного отдельно извлекают тонкий отдел ки1712406 Таблица 1 Составитель А; ГоловкоТехред М,Моргентал Корректор С. Шев Редактор да аз 510 Тираж ПодписноеВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям п113035, Москва, Ж, Раушская наб., 4/5 СССР изводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101Г точности, иммунизируют белых мышей, за- высевают на твердые питательные среды ражение осуществляют перорально через для идентификации выделенной культуры, а 7-14 дней, далее животных забивают на 2-4 о иммуногенности препарата судят по часдень после заражения, отбирают тонкий от- тоте выделения культуры исходного штам дел кишечника, готовят из него суспензию, 5 ма.